一種五指毛桃提取物的制備方法及其制備的五指毛桃提取物和用圖
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于水果病害防治和保鮮領域，具體涉及一種具有抑制柑橘采后病原菌作 用的五指毛桃提取物及其制備方法和新用途。
【背景技術】
[0002] 柑橘是世界第一大貿易水果，也是第三大貿易農產品。我國柑橘資源豐富、種植歷 史悠久。目前我國柑橘的種植面積和產量均居世界第一位，2013年柑橘種植面積達3600多 萬畝，總產量約為3200多萬噸，柑橘產業(yè)在我國農業(yè)經濟中占有非常重要的地位。
[0003] 柑橘果實組織細嫩多汁且富含糖分，在采摘、貯運和銷售等過程中容易發(fā)生機械 損傷，果皮損傷后易受多種病原真菌的侵染而產生采后病害。柑橘采后發(fā)生的病理性病害 種類多達20余種，主要有意大利青霉（Penicilliumitalicum)引起的青霉病和指狀青霉 (Penicilliumdigitatum)引起的綠霉病，這些病害易造成果實腐爛變質，腐爛率一般為 10 %?30 %，嚴重時可高達40 %?50 %以上，造成巨大的經濟損失。柑橘其它的病理性病 害還包括黑腐病、酸腐病、褐腐病、褐色帝腐病、炭疽病和焦腐病等。
[0004] 長期以來，人們主要采用化學合成物質作為保鮮劑對柑橘進行保鮮，不同時期 使用的化學殺菌劑有所不同。硼砂、山梨酸及其鹽類等是最早使用的柑橘防腐劑；包括 苯菌靈（Benomy1)、托布津（Thiophanate)、甲基托布津（Thiophanatemethyl)、多菌靈 (Carbendazim)、噻菌靈（Thiabendazole)等的苯并咪挫類殺菌劑是70年代應用的第二代 柑橘防腐劑；目前使用的第三代柑橘防腐劑包括抑霉唑（Imazalil)、雙胍鹽（Guazatine)、 咪鮮胺（Prochloraz)等。這些化學殺菌劑能殺死或抑制病原微生物的生長，有較好的防腐 保鮮效果。由于化學殺菌劑會造成藥劑殘留、污染環(huán)境，以及長期使用導致柑橘采后病菌產 生抗藥性等原因使得化學殺菌劑的使用安全性日益得到人們的關注。另外，隨著科技的發(fā) 展、檢測分析手段的完善和化學殺菌劑毒理的深入研宄，發(fā)現一些化學防腐劑有致癌或潛 在致癌、致突變、致畸的可能性。目前一些化學殺菌劑已被歐美等發(fā)達國家禁止或限制使 用，如苯菌靈和雙胍鹽類殺菌劑等己被美國環(huán)保局明令禁止使用或在部分果實產品上限制 使用。
[0005] 近年來，人們開始轉向天然植物源保鮮劑的研發(fā)。天然植物源保鮮劑具有高效、低 毒、低殘留、無污染、使用安全等優(yōu)點，采用其處理柑橘進行防腐保鮮將受到消費者的普遍 歡迎。另外，植物源藥劑是通過多成分，多靶點發(fā)揮抑菌作用，不易產生抗藥性。因此，有必 要從天然植物中尋找、開發(fā)天然植物源防腐劑對柑橘進行保鮮以減少對化學藥劑的依賴。
[0006] 五指毛桃（FicussimplicissimaLour.)為?？茻o花果屬植物裂掌格的根，收載 于歷年《中國藥典》、《中藥大辭典》、《全國中草藥匯編》、《中藥志》、《中華本草》等多種中藥 學書籍中。五指毛桃是廣東嶺南地區(qū)的道地中藥材，又名五爪龍、亞椏木、五爪毛桃、五爪 牛奶、土黃芪、南芪等，具有很好的益氣健脾功效，有"廣東人參"之美譽。五指毛桃性平，味 甘、辛，有健脾補肺、利濕舒筋之功，可用于脾虛浮腫、食少無力、肺癆咳嗽、盜汗、風濕痹痛、 產后無乳等癥，在廣東民間使用歷史悠久。現代藥理活性研宄表明，五指毛桃可以通過改善 微循環(huán)對胃黏膜發(fā)揮保護作用，減輕肝組織損傷，提高機體免疫功能，減輕腦缺血缺氧的損 害（王偉偉，陳瑤；五指毛桃的化學成分和藥理作用研宄進展；《中國民族民間醫(yī)藥》，2013， 22(3) :41-42)。關于五指毛桃使用的安全性，有動物急性毒性實驗研宄表明小鼠灌服五指 毛桃水提物后14d內，動物均無死亡，眼、鼻、口無黏液性分泌物，體重、飲水量及進食量與 空白對照組無顯著差異，各臟器均無異常。表明五指毛桃毒性極低，生物安全性好（羅騫， 席萍，廖雪珍，蔡慶群招榮鑒；五指毛桃水煎液的藥理安全性實驗研宄；《今日藥學》，2009， 19(2) :12-13) 〇
[0007] 多篇專利文獻也公開了五指毛桃的醫(yī)藥用途。如，發(fā)明名稱"五指毛桃在制備抗 腫瘤藥物中的應用"（公開號CN103156922A)的中國發(fā)明專利申請，公開了五指毛桃的提 取物具有體外抗人乳腺癌細胞株Bcap-37的作用，并能在體內及體外誘生腫瘤壞死因子 (TNF)，具有抗腫瘤的作用。發(fā)明名稱"一種五指毛桃提取物及其制備方法和用途"（公開 號CN101129473A)的中國發(fā)明專利申請，公開了五指毛桃提取物在制備急慢性支氣管炎、 哮喘、肺氣腫、慢性阻塞性肺病藥物、免疫力低下疾病藥物、病毒性肝炎、慢性乙型肝炎等藥 物中的應用。發(fā)明名稱"五指毛桃在制備肝炎的輔助治療藥物和保健食品中的用途"（公開 號CN1660354A)的中國發(fā)明專利申請，公開了以五指毛桃提取物為活性成分的藥物或保健 食品可有效地治療撲熱息痛中毒性肝炎、四氯化碳中毒性肝炎和可卡因中毒性肝炎。
[0008] 經文獻檢索，關于五指毛桃的抗菌活性研宄，僅見五指毛桃水煎煮提取液對大腸 桿菌、枯草芽胞桿菌、金黃色葡萄球菌有抑制作用（陳瓊，葉思霞；微量顯色法測定五指毛 桃抑菌活性，《安徽農業(yè)科學》，2012,（15) :8452-8454)，但對黑曲霉、黃曲霉沒有抑制作用 (王曉平，段麗菊，陳曉白，李麗梅，陸奇豐，李鑒清；五指毛桃水提液體外抗菌作用的實驗 研宄，《時針國醫(yī)國藥》，2010, 21 (7) : 1692-1693)。
[0009] 另外，公開號CN101138585A的中國發(fā)明專利申請公開了一種超臨界二氧化碳萃 取五指毛桃有效成分的方法。該方法存在儀器設備價格昂貴，僅適用于親脂性、分子量較小 物質的萃取。
[0010] 可見現有技術對五指毛桃的研宄主要局限在以人為施用對象的醫(yī)藥用途。迄今， 尚未見五指毛桃提取物對柑橘采后病原真菌作用的報道，也沒有關于超聲波輔助提取制備 五指毛桃提取物的報道。
【發(fā)明內容】
[0011] 本發(fā)明的目的是針對現有技術的不足，提供一種五指毛桃提取物的制備方法及其 制備的五指毛桃提取物新用途。本發(fā)明以天然的中草藥植物為原料，制備的五指毛桃提取 物對柑橘采后病原真菌的抑菌效果明顯且無化學殘留，對人體無健康危害，對環(huán)境無污染， 預示著很好的應用前景。
[0012] 為解決上述技術問題，本發(fā)明采用如下的技術方案：
[0013] 一種五指毛桃提取物的制備方法，采用超聲波輔助提取，以乙醇為提取溶劑，包括 如下步驟：
[0014] 所述五指毛桃中加入五指毛桃重量10?40倍的質量百分比濃度為60%?100% 的乙醇，在提取溫度為40?60°C，提取時間為30min?150min，超聲頻率為30?40KHz的 條件下提??；過濾，回收乙醇，濃縮，即得。
[0015] 在本發(fā)明所述制備方法中，優(yōu)選的，乙醇的重量為所述五指毛桃重量的20?40 倍；更優(yōu)選為30倍。
[0016] 優(yōu)選的，乙醇的質量百分比濃度優(yōu)選為90%?100% ;更優(yōu)選為90%。
[0017] 優(yōu)選的，超聲波輔助提取時間優(yōu)選為30?90min，更優(yōu)選為60min。
[0018] 優(yōu)選的，超聲波輔助提取的溫度為60°C。
[0019] 還優(yōu)選的，乙醇提取前，所述五指毛桃40?50°C烘干，粉碎后過40目篩，取篩下粉 末進行超聲波輔助提取。
[0020] 作為一個優(yōu)選的【具體實施方式】，本發(fā)明提供一種五指毛桃提取物的制備方法，包 括如下步驟：
[0021] I.將五指毛桃40?50°C烘干，粉碎后過40目篩，取篩下粉末；
[0022] II.步驟I得到的粉末中加入所述五指毛桃重量20?40倍的質量百分比濃度為 90 %?100 %的乙醇進行超聲波輔助提取，提取溫度為40°C?60°C，提取時間為60min? 90min，超聲頻率為30?40KHz;過濾，得到醇提取液；
[0023] III.步驟II得到的醇提取液，減壓回收乙醇至無醇味，即得。
[0024] 作為一個更優(yōu)選的【具體實施方式】，本發(fā)明提供一種五指毛桃提取物的制備方法， 包括如下步驟：
[0025] I.將五指毛桃40?50°C烘干，粉碎后過40目篩，取篩下粉末；
[0026] II.步驟I得到的粉末中加入所述五指毛桃重量30倍的質量百分比濃度為90% 的乙醇進行超聲波輔助提取，提取溫度為60°C，提取時間為60min，超聲頻率為30?40KHz; 過濾，得到醇提取液；
[0027] III.步驟II得到的醇提取液，減壓回收乙醇至無醇味，即得。
[0028] 本發(fā)明的另一個目的，在于提供上述制備方法制備得到的五指毛桃提取物。
[0029] 本發(fā)明還有一個目的，在于提供五指毛桃或五指毛桃提取物在制備用于防治柑橘 采后病原菌的藥物組合物和/或柑橘采后保鮮劑中的用途；優(yōu)選的，所述五指毛桃提取物 通過本發(fā)明所述制備方法制備得到。
[0030]所述柑橘采后病原菌選自意大利青霉（Penicilliumitalicum)，指狀青霉 (Penicilliumdigitatum)，柑橘酸腐病菌（Geotrichumcandidum)和柑橘黑腐病菌 (Alternariacitri)中的一種或幾種。
[0031] 由此，本發(fā)明提供一種防治柑橘采后病原菌的藥物組合物，包括本發(fā)明所述制備 方法制備得到的五指毛桃提取物。
[0032] 另外，本發(fā)明還提供一種柑橘采后保鮮劑，包括本發(fā)明所述制備方法制備得到的 所述五指毛桃提取物。
[0033] 本發(fā)明所述的藥物組合物或柑橘采后保鮮劑，除所述五指毛桃提取物外，還可以 包括可以接受的輔料，例如選自羧甲基纖維素、殼聚糖等成膜劑，選自甘油、蔗糖酯、吐溫等 的助溶劑，選自檸檬酸、丙酸鈣、山梨酸鉀或苯甲酸鈉等的防腐劑，以及適當的溶