地中海莢蒾的組培繁殖方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及農學技術領域，更具體而言，特別涉及一種地中海莢蓮(Viburnumtinus)的組培繁殖方法。
【背景技術】
[0002]地中海莢蓮樹冠呈球形，冠徑可達2.5?3米。葉橢圓形，深綠色，葉長10厘米，聚傘花序，單花小，僅0.6厘米，花蕾粉紅色，花蕾期很長，可達5個多月，盛開后花白色，整個花序直徑達10厘米，花期在原產地從11月直到翌春4月。在上海地區10月初便可見細小的黃綠色花蕾，隨著花序的伸長，花蕾越來越密集覆蓋于枝頂，顏色也逐步加深呈殷紅色，遠遠望去像一片片紅云，飄浮在墨綠色的樹冠上，格外引人注目，為冬日增添了暖意和生氣。盛花期在3月中下旬，紅云般的花蕾綻放成雪白一片，在春日的百花園里大放光彩。果卵形，深藍黑色，徑0.6厘米。地中海莢蓮，較容易分化花芽，一到兩年生幼樹常見開花。如果適當控制營養生長，也可使其在夏季或秋季開花，群植則可在一年中常見有花植株。生長快速，枝葉繁茂，耐修剪，適于作綠籬，也可栽于庭園觀賞，是長江三角洲地區冬季觀花植物中不可多得的常綠灌木。
[0003]但是目前尚未公開有效的地中海莢蓮的快速組培繁殖方法。
【發明內容】
[0004]本發明旨在至少解決【背景技術】中存在的問題之一。
[0005]本發明的目的之一在于提供一種地中海莢蓮的組培繁殖方法，包括如下步驟:步驟101:外植體的選取與處理:選取地中海莢蓮帶腋芽莖段作為培養材料，用流水沖洗；在超凈臺上用酒精表面滅菌，無菌水沖洗，接著用氯化汞滅菌，然后用無菌水沖洗，接種于誘導培養基中；步驟102:誘導培養:使用MS培養基、6-芐氨基腺嘌呤、萘乙酸、蔗糖、瓊脂混合后作為誘導培養基，將所選取的地中海莢蓮帶腋芽莖段接種于誘導培養基中；步驟103:增殖培養:將生長于誘導培養基上的外植體轉接于MS培養基、6-芐氨基腺嘌呤、萘乙酸、蔗糖、瓊脂混合后作為誘導培養基進行連續培養；步驟104:生根培養:選擇1/2MS培養基、吲哚丁酸、活性炭、蔗糖、瓊脂混合后作為生根培養基；步驟105:移栽:將已生根的植株取出，移栽到腐質土:炭渣:鋸木肩混合基質上。
[0006]進一步的，所述步驟101中用水沖洗時間為20-30分鐘，酒精比例為70%，用表面滅菌時間為30秒，氯化汞比例為0.1%，用氯化汞滅菌的時間為4-12分鐘。
[0007]進一步的，所述步驟102中6-芐氨基腺嘌呤的比例為0.5-2.0mg/L，萘乙酸的比例為0.1-0.5mg/L，蔗糖比例為2 %，瓊脂比例為0.6%，誘導培養基的pH值為5.8。
[0008]進一步的，所述步驟103中6-芐氨基腺嘌呤的比例為0.1-0.5mg/L，萘乙酸比例為0.1-0.3mg/L，蔗糖比例為2%，瓊脂比例為0.6%。
[0009]進一步的，所述步驟104的培養基的培養條件:光強為1500-20001x，溫度為23至27°C，光照時間為12h/d，吲哚丁酸比例為0.1-2.0mg/L，活性炭比例為0.1-0.5%，蔗糖比例為2%，瓊脂比例為0.6%，生根培養基的pH值為5.8。
[0010]進一步的，所述步驟105中腐質土:炭渣:鋸木肩的比例為3:1:1。
[0011]本發明的有益效果在于:(I)地中海莢蓮的生產可以在人為控制條件下進行，不受季節、氣候條件、土壤、病蟲害和農藥等因素的影響，嚴格控制地中海莢蓮苗木的質量。
(2)增殖速度快，生產周期短，設備簡單，占地面積少，節省人力和物力等，便于工廠化生產。
(3)在組織培養過程中進行了脫毒處理，提高了地中海莢蓮苗木的質量，同時該技術方法解決了地中海莢蓮快速繁殖及其穩定生根的重要技術環節，可應用于工廠化生產。(4)可以保存地中海莢蓮種質資源，豐富園林綠化樹種及其資源。
【附圖說明】
[0012]圖1所示為本發明實施例一種地中海莢蓮的組培繁殖方法的流程圖。
【具體實施方式】
[0013]下文將結合具體實施例詳細描述本發明。應當注意的是，下述實施例中描述的技術特征或者技術特征的組合不應當被認為是孤立的，它們可以被相互組合從而達到更好的技術效果。
[0014]圖1所示為本發明實施例一種地中海莢蓮的組培繁殖方法的流程圖。
[0015]本發明實施例提供的地中海莢蓮的組培繁殖方法，包括如下步驟:
[0016]步驟101:外植體的選取與處理:選取地中海莢蓮帶腋芽莖段作為培養材料，用流水沖洗；在超凈臺上用酒精表面滅菌，無菌水沖洗，接著用氯化汞滅菌，然后用無菌水沖洗，接種于誘導培養基中；
[0017]步驟102:誘導培養:使用MS培養基、6-芐氨基腺嘌呤、萘乙酸、蔗糖、瓊脂混合后作為誘導培養基，將所選取的地中海莢蓮帶腋芽莖段接種于誘導培養基中；
[0018]步驟103:增殖培養:將生長于誘導培養基上的外植體轉接于MS培養基、6-芐氨基腺嘌呤、萘乙酸、蔗糖、瓊脂混合后作為誘導培養基進行連續培養；
[0019]步驟104:生根培養:選擇1/2MS培養基、吲哚丁酸、活性炭、蔗糖、瓊脂混合后作為生根培養基；
[0020]步驟105:移栽:將已生根的植株取出，移栽到腐質土:炭渣:鋸木肩混合基質上。
[0021]進一步的，所述步驟101中用水沖洗時間為20-30分鐘，酒精比例為70%，用表面滅菌時間為30秒，氯化汞比例為0.1%，用氯化汞滅菌的時間為4-12分鐘。
[0022]在本發明中，所述步驟102中6-芐氨基腺嘌呤的比例為0.5-2.0mg/L，萘乙酸的比例為0.1-0.5mg/L，蔗糖比例為2 %，瓊脂比例為0.6%，誘導培養基的pH值為5.8。所述步驟103中6-芐氨基腺嘌呤的比例為0.1-0.5mg/L，萘乙酸比例為0.1-0.3mg/L，蔗糖比例為2%，瓊脂比例為0.6%。所述步驟104的培養基的培養條件:光強為1500-20001x，溫度為23至27°C，光照時間為12h/d，吲哚丁酸比例為0.1-2.0mg/L，活性炭比例為0.1-0.5%，蔗糖比例為2%，瓊脂比例為0.6%，生根培養基的pH值為5.8。所述步驟105中腐質土:炭渣:鋸木肩的比例為3:1:1。
[0023]下邊將舉出具體例子進行詳細說明:
[0024]首先，對于地中海莢蓮離體繁殖的啟動和增殖培養的過程如下:
[0025](I)外植體的選取與處理
[0026]從植株上剪取帶腋芽的枝條，切成Icm左右帶腋芽莖段，用流水沖洗20?30min。在超凈臺上用70%酒精表面滅菌30s，無菌水沖洗I次，接著用0.1 %氯化汞滅菌，分別處理4、6、8、10、12min，然后用無菌水沖洗5次，接種在MS培養基(含蔗糖2 %、瓊脂0.6 %，pH5.8)中，每個處理接種50瓶，每瓶接I個外植體。30d后調查各處理的死亡率、污染率和成活率。死亡率(％ )=死亡的外植體數/接種外植體數X 100%;污染率(％ )=污染的外植體數/接種外植體數X 100%;成活率(％ )=成活的外植體數/接種外植體數X 100%。
[0027](2)啟動培養
[0028]選取Icm左右帶腋芽莖段為試材。以MS培養基為基本培養基，分別附加如下激素濃度(單位:mg/L)組合:6_芐氨基腺嘌0.5+萘乙酸0.1 ;6_芐氨基腺嘌呤0.5+萘乙酸0.3 ；6-芐氨基腺嘌呤0.5+萘乙酸0.5 ；6-芐氨基腺嘌呤1.0+萘乙酸0.1 ;6_芐氨基腺嘌呤1.0+萘乙酸0.3 ；6-芐氨基腺嘌呤1.0+萘乙酸0.5 ；6-芐氨基腺嘌呤2.0+萘乙酸0.1 ;6-芐氨基腺嘌呤2.0+萘乙酸0.3 ；6-芐氨基腺嘌呤2.0+萘乙酸0.5。每種培養基均添加蔗糖2%、瓊脂0.6%，pH5.8。每處理接種50瓶，每瓶接I個外植體，30d后統計腋芽萌發率及芽的生長狀況。腋芽萌發率=腋芽萌發的外植體數/接種的外植體