本發明屬于農藥領域，具體涉及一種含解淀粉芽孢桿菌（bacillusamyloliquefaciens）和啶酰菌胺的組合物及其在防治草莓灰霉病方面的應用。
背景技術：
草莓果實鮮紅形美，柔軟多汁，香味濃郁，甜酸可口，營養豐富，是目前果品市場上的高檔水果之一，深受消費者的喜愛，市場前景廣闊。近年來，我省各地種植面積迅速擴大，在我國多個省市廣泛栽培，且種植面積呈逐年上升的趨勢。為提高草莓產品的產量和品質，延長市場供應時間，目前我國大部地區均采用以大棚和日光溫室為主保護地栽培模式進行種植。在這種栽培模式下，由于環境相對密閉，通風透氣性差，溫度、濕度適宜，及化學肥料的過度施用，草莓極易產生各種病蟲害。
草莓灰霉病是草莓的主要病害之一，主要危害花器和果實，引起花器和果實腐爛，此病能迅速傳播，是造成草莓爛果的主要原因，一般使草莓減產10%-30%，嚴重時可造成草莓減產50%以上，嚴重影響草莓的產量和品質。目前化學藥劑仍然是防治草莓灰霉病的主要措施，由于化學藥劑的多頻次、多劑量的使用，導致抗藥性增加、防治效果下降、環境污染及果實的農藥殘留等一系列問題更加突出，因此尋求一種高效安全的防治方法顯得尤為重要，對草莓產業的可持續發展具有重要的意義。
解淀粉芽孢桿菌（bacillusamyloliquefaciens）屬革蘭陽性芽孢桿菌，是一種與枯草芽孢桿菌親緣性很高的細菌，在自然界中分布廣泛。解淀粉芽孢桿菌生長過程中可以產生一系列具有廣泛地抑制真菌和細菌的活性的代謝產物，在生物防治方面具有廣闊的應用前景，已逐步成為具有生物農藥開發潛力的微生物。解淀粉芽孢桿菌wh1g，抑菌譜較廣，對多種病原真菌和病原細菌均有很強的抑制作用，該菌株生長速度快，適應環境能力強，易于在植物表面定殖，并形成優勢種群；誘導寄主產生抗病性；分泌多種抗菌物質；對多種植物病害均有較好的防效。該菌株對啶酰菌胺有天然抗性，在啶酰菌胺含量為5000ppm的na培養基中能正常生長，該菌株與2015年04月15日保藏于在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為cgmccno.10722。該菌株命名為whig，分類命名：解淀粉芽孢桿菌（bacillusamyloliquefaciens）。
啶酰菌胺屬于煙酰胺類新型殺菌劑，主要通過抑制線粒體琥珀酸酯脫氫酶阻礙三羧酸循環，使氨基酸和糖缺乏、能量減少，干擾細胞的分裂和生長。該藥劑可用于控制草莓灰霉病，而且與多菌靈、速克靈等藥劑無交互抗藥性。目前在我國草莓病害防治上應用的啶酰菌胺產品多數是單劑，僅有的少數復配劑也是與其它化學藥劑進行復配，對于延緩和治理啶酰菌胺的抗藥性作用有限。至今還未發現啶酰菌胺與生防菌的復配劑型用于草莓病害的防治，而本發明利用解淀粉芽胞桿菌與啶酰菌胺的組合物在防治草莓灰霉病上的應用還沒有公開報道。
技術實現要素：
本發明的目的在于：針對目前利用現有的殺菌劑防治草莓灰霉病時出現的一系列問題，提供一種高效、低毒、可延長藥劑使用時間、降低成本、協同增效作用顯著，對草莓灰霉病有較好防治作用的，且環境友好、安全的農用殺菌組合物。該組合物以解淀粉芽孢桿菌和啶酰菌胺為主要活性物質，不僅極大的減少了化學殺菌劑的使用量，降低了現有病原菌對啶酰菌胺的潛在抗藥性的風險，還能發揮解淀粉芽孢桿菌wh1g有效控制草莓灰霉病的作用，彌補了解淀粉芽孢桿菌抑菌效果慢的缺點，綜合了生防菌和化學殺菌劑的優點。本研究結果表明解淀粉芽孢桿菌whig與啶酰菌胺的組合對草莓灰霉病的防治具有明顯的增效作用。
本發明所述的殺菌組合物可以用已知的方法加工成適合農業使用的劑型，包括可濕性粉劑、懸浮劑、水乳劑等，本發明提供了所述殺菌劑的可濕性粉劑及水懸浮劑的制備方法。
本發明所述組合物中的助劑包括濕潤劑、分散劑、滲透劑、防凍劑、增稠劑、增效劑、消泡劑等各類助劑中的一種或幾種，具體成分和用量根據配方要求通過簡單試驗確定。
本發明的目的可以通過以下措施達到:
一種含解淀粉芽孢桿菌whig與啶酰菌胺的組合物，該組合物以解淀粉芽孢桿菌whig和啶酰菌胺為活性成分，其質量比為100：1~1:100，優化為10:1~1:10，最優選為4:1~1:4。本發明所采用的解淀粉芽孢桿菌活孢子數為1億/克~100億/克，最優選為10億/克~100億/克。
本發明所述殺菌組合物中的解淀粉芽孢桿菌要先制成母粉，方法如下：首先將wh1g接入na培養基中振蕩培養(180r/min,28℃)48h，80℃水浴處理15min，8000r/min離心15min，去上清液獲得細菌沉淀，加入10ml過濾除菌的mgso4溶液(0.lmol/l)和1ml無菌甘油，振蕩混勻后再加入lml濃度為1.5%(w/v)海藻酸鈉溶液，然后將上述混合液與50g滑石粉及4gca-lignosulphate充分混合，無菌條件下室溫保存。
所述組合物中解淀粉芽胞桿菌母粉的生存能力測定每隔30d,分別測定可濕性粉劑中生防菌的生存能力，方法是每次測定時，分別稱取0.5克可濕性粉劑，置于10ml無菌水中，制備懸浮液，經倍比稀釋后，分別涂布于na平板上，28℃培養24h，計數生長菌落，計算出單位重量可濕性粉劑中細菌的菌落形成單位。結果表明，生防菌劑中細菌的生存能力較強，室溫條件下保存120d細菌的存活數量仍能達到1010cfu/g，150d能達到108cfu/g，隨著時間延長，細菌數量不斷下降，至180d僅能達到107cfu/g。
所述的殺菌組合物向活性成分解淀粉芽孢桿菌和啶酰菌胺中加入農藥助劑和填料后即可配得可濕性粉劑和懸浮劑，其中有效成分占殺菌組合物總重量的20%~60%，助劑占殺菌組合物總重量的10%~30%,其余為填料。啶酰菌胺可以采用原藥，解淀粉芽孢桿菌采用原粉，助劑可以選用濕潤劑、分散劑、滲透劑、防凍劑、增稠劑、增效劑等各類助劑中的一種或幾種。
當所述殺菌組合物的劑型為可濕性粉劑時，由下述質量百分含量的組分組成：
解淀粉芽胞桿菌母粉（100億活孢子/克）5%~50%,
啶酰菌胺5%~40%,
載體30%~65%，
分散劑3%~8%,
潤濕劑2%~5%，
滲透劑3%~5%
其特征是所述載體優選為白炭黑、高嶺土，所述分散劑優選為木質素磺酸鈉，所述潤濕劑優選為十二烷基苯磺酸，所述滲透劑優選為jfc。
當所述殺菌組合物的劑型為水懸浮劑時，由下述質量百分含量的組分組成：
解淀粉芽胞桿菌母粉（100億活孢子/克）5%~50%,
啶酰菌胺5%~45%,
分散劑2%~8%，
潤濕劑2%~4%，
增稠劑0.1%~2%
增效劑2%~5%
防凍劑2%~4%
消泡劑1%~3%
余量加水至100%，
其特征是所述分散劑優選為木質素磺酸鈣，潤濕劑優選為十二烷基硫酸鈉，增稠劑優選為黃原膠，所選防凍劑優選為乙二醇；消泡劑優選為有機硅消泡劑，水優選為自來水。
本發明的殺菌組合物用于防治草莓炭疽病、白粉病及灰霉病，在病害初步發生時進行施藥，連續施用3次，間隔期為10d，以噴霧法均勻施藥為宜。
本發明的組合物降低了草莓灰霉病菌對啶酰菌胺和解淀粉芽孢桿菌的潛在抗藥性風險，將解淀粉芽孢桿菌與啶酰菌胺組合后，二者之間具有明顯的增效作用，可以顯著提高對草莓灰霉病的防治效果，同時減少了化學農藥使用量，從而使該組合物可以廣泛的應用于草灰霉病的防治。
具體實施方式
下面結合具體實施例進一步闡釋本發明，但本發明的實質并不限于下述實施例。
實施例1：35%可濕性粉劑的制備（各組分為質量份）
解淀粉芽孢桿菌wh1g（100億活孢子/克）7
啶酰菌胺28
十二烷基硫酸鈉2
木質素磺酸鈉4
滲透劑jfc4
白炭黑補足至100（調ph值5~7）
實施例2：40%可濕性粉劑的制備（各組分為質量份）
解淀粉芽孢桿菌wh1g（100億活孢子/克）30
啶酰菌胺10
十二烷基硫酸鈉2
木質素磺酸鈉4.5
滲透劑jfc4.5
白炭黑補足至100（調ph值5~7）
實施例3：42%可濕性粉劑制備（各組分為質量份）
解淀粉芽孢桿菌wh1g（100億活孢子/克）28
啶酰菌胺14
十二烷基硫酸鈉2
木質素磺酸鈉4.5
滲透劑jfc4.5
白炭黑30
高嶺土補足至100（調ph值5~7）
實施例4：50%可濕性粉劑制備（各組分為質量份）
解淀粉芽孢桿菌wh1g（100億活孢子/克）25
啶酰菌胺25
十二烷基硫酸鈉3
木質素磺酸鈉5
滲透劑jfc5
白炭黑20
高嶺土補足至100（調ph值5~7）
按照實施例1、2、3、4的配方，將有效成分、助劑、填料加在一起，經氣流粉碎后，在錐形混合機內攪拌30分鐘，即可制得解淀粉芽孢桿菌與啶酰菌胺的殺菌可濕性粉劑。
實施例5:30%懸浮劑的制備（各組分為質量份）
解淀粉芽孢桿菌wh1g（100億活孢子/克）10
啶酰菌胺20
木質素磺酸鈣5
十二烷基硫酸鈉2
有機硅2
黃原膠0.3
乙二醇2
自來水補足至100
實施例6:55%懸浮劑的制備（各組分為質量份）
解淀粉芽孢桿菌wh1g（100億活孢子/克）44
啶酰菌胺11
木質素磺酸鈣5
十二烷基硫酸鈉2
有機硅2
黃原膠0.2
乙二醇3.5
自來水補足至100
實施例7:60%懸浮劑的制備（各組分為質量份）
解淀粉芽孢桿菌wh1g（100億活孢子/克）15
啶酰菌胺45
木質素磺酸鈣7
十二烷基硫酸鈉4
有機硅2
黃原膠0.2
乙二醇3.5
自來水補足至100
按照實施例5、6、7的配方，將有效成分、分散劑、潤濕劑等各組分裝入帶高剪切攪拌的反應釜中，粉碎混合，直到混合體均勻后將攪拌粉碎的物料通入砂磨機中，通冷卻循環水進行砂磨超微粉碎，終點粒徑小于3微米。即可制得解淀粉芽孢桿菌與啶酰菌胺的殺菌水懸浮劑。
實施例8用實施例1-實施例7所配置的解淀粉芽孢桿菌與啶酰菌胺的殺菌組合物防治草莓灰霉病的田間效果。
本發明試驗作物為草莓，品種為：紅顏；共設置實施例1-實施例7所配置的解淀粉芽孢桿菌與啶酰菌胺的殺菌組合物、100億cfu/g解淀粉芽孢桿菌母粉、50%啶酰菌胺水分散粒劑和空白對照共10個處理，每個處理4次重復，小區面積20㎡，于病害發生初期開始第一次噴藥，每畝兌水50公斤均勻噴霧，連續噴灑2次，間隔期為10d，最后一次防治后10d調查各處理草莓灰霉病的病情指數，并以對照區的病情指數計算相對防治效果，調查結果如表1。
表1解淀粉芽孢桿菌﹒啶酰菌胺對草莓灰霉病的田間小區試驗的防效（%）
注：a:理論防效%=（實施例中芽孢桿菌單劑防效×所占比例＋啶酰菌胺防效×所占比例）×100
b:增效效果%=（實施例防治效果—理論防效）/理論防效×100
從表1可以看出當草莓灰霉病初見病斑時就開始用本發明的組合物進行施藥，每間隔10d噴施一次，連續噴灑2次后，本發明組合物的7個制劑實施例對草莓灰霉病的防效較好，除了實施例2，防效均在85%以上，特別是實施例7防效達到93.10%，明顯高于對照藥劑，防效顯著；本發明組合物和單劑相比，均有增效效果，特別是實施例2、3和實施例6增效效果高達20%以上，增效作用明顯，可顯著提高防治效果；本發明組合物對草莓生長安全，田間未發現任何不良反應，所以該組合物在生產上可以廣泛的用于田間草莓灰霉病的防治。