本發明涉及一種復合益生菌生物消毒劑的制備方法。
背景技術：
我國畜禽養殖業的快速發展帶來了嚴重的環境污染問題，其中病原微生物污染是影響畜禽舍環境質量的重要因素。研究表明，畜禽舍環境中的微生物含量與疾病發病率有著顯著的關系，給畜禽生產和人類健康帶來了嚴重的威脅。因此，降低畜禽舍環境中的微生物水平，是控制疾病流行、凈化養殖環境的關鍵環節。定期消毒是目前畜禽舍環境凈化的重要措施，消毒的方式主要有沖洗、浸液、紫外和噴霧等4種方式，常用消毒劑為含氯、有機碘混合物或酚類等的化學消毒劑。然而，隨著化學消毒劑的大量使用，其潛在的化學毒性、腐蝕性、不穩定性以及細菌耐藥性等問題日益凸顯。
因此，研發綠色環保的生物消毒劑改善畜禽舍環境、控制病原微生物，對于提高畜禽健康水平，促進畜牧業健康發展顯得尤為重要。益生菌以天然無毒、無副作用、元殘留，可以促進機體微生態平衡、抑制有害菌生長等優勢已經成為畜牧業研究的熱點。
目前，益生菌不僅作為一種新型綠色飼料添加劑在提高畜禽生產性能方面顯示了良好的應用效果，而且在發酵床養殖模式中通過對墊料和畜禽糞便的協同發酵，促進了養殖環境凈化與畜禽健康。辛國芹等報道，使用抗菌肽與乳酸菌混合制劑進行肉雞場環境消毒，可顯著提高肉雞生產性能及免疫性能；陳靜等報道，微生態噴霧劑可以有效降低蛋雞舍NH。和H.S含量；仝永娟報道，規模化肉雞舍噴灑芽孢桿菌復合制劑可以有效抑制大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的數量，并對雞只的生長和免疫健康有一定的促進作用。然而，利用益生菌對規模化鴨場進行生物消毒的研究尚鮮見報道。
本研究以項目組前期從河南某規模肉鴨場分離鑒定獲得的3種益生菌菌株為材料，基于不同益生菌的協同作用，研制復合益生菌生物消毒劑，并以常規化學消毒劑為對照，對其實際應用效果進行了考察，以期為利用益生菌進行畜禽舍生物消毒提供依據。
技術實現要素：
本發明提出一種復合益生菌生物消毒劑的制備方法。
一種復合益生菌生物消毒劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟：
（1）對枯草芽孢桿菌、乳酸桿菌、酵母菌3種益生菌菌株分別進行活化與種子培養；然后將其種子培養液按體積分數5％的接種量分別接種到相應的50L發酵罐中進行發酵培養；
（2）所述枯草芽孢桿菌的培養溫度為35℃，初始pH7，轉速120r／min，通氣量1.1vvm，24h后每隔2h取樣1次，測定產芽孢率，當產芽孢率達到90％以上時停止發酵；
（3）乳酸桿菌的培養溫度為32-41℃，初始pH6.5，培養時間28h；
（4）酵母菌的培養溫度為25-30℃，初始pH6.0，轉速120r／min，通氣量0.8vvm，培養時間48h；
（5）發酵結束后，使用0.2μm微濾膜分別對3種益生菌發酵液進行濃縮，活菌數不少于1×1011CFU／mL。
優選地，所述步驟（2）發酵溫度穩33℃。
優選地，所述步驟（4）發酵溫度穩28℃。
本發明所述方法制備的復合益生菌生物消毒劑能顯著降低鴨舍內NH3含量與活菌數，而且可以顯著提高肉鴨平均日增質量、降低料肉比，對抑制肉鴨盲腸大腸桿菌的生長，促進乳酸桿菌的增殖有顯著效果。
具體實施方式
實施例1。
一種復合益生菌生物消毒劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟：
（1）對枯草芽孢桿菌、乳酸桿菌、酵母菌3種益生菌菌株分別進行活化與種子培養；然后將其種子培養液按體積分數5％的接種量分別接種到相應的50L發酵罐中進行發酵培養；
（2）所述枯草芽孢桿菌的培養溫度為35℃，初始pH7，轉速120r／min，通氣量1.1vvm，24h后每隔2h取樣1次，測定產芽孢率，當產芽孢率達到90％以上時停止發酵；
（3）乳酸桿菌的培養溫度為32-41℃，初始pH6.5，培養時間28h；
（4）酵母菌的培養溫度為25-30℃，初始pH6.0，轉速120r／min，通氣量0.8vvm，培養時間48h；
（5）發酵結束后，使用0.2μm微濾膜分別對3種益生菌發酵液進行濃縮，活菌數不少于1×1011CFU／mL。
實施例2。
一種復合益生菌生物消毒劑的制備方法，包括以下步驟：
（1）對枯草芽孢桿菌、乳酸桿菌、酵母菌3種益生菌菌株分別進行活化與種子培養；然后將其種子培養液按體積分數5％的接種量分別接種到相應的50L發酵罐中進行發酵培養；
（2）所述枯草芽孢桿菌的培養溫度為35℃，初始pH7，轉速120r／min，通氣量1.1vvm，24h后每隔2h取樣1次，測定產芽孢率，當產芽孢率達到90％以上時停止發酵；
（3）乳酸桿菌的培養溫度為32-41℃，初始pH6.5，培養時間28h；
（4）酵母菌的培養溫度為25-30℃，初始pH6.0，轉速120r／min，通氣量0.8vvm，培養時間48h；
（5）發酵結束后，使用0.2μm微濾膜分別對3種益生菌發酵液進行濃縮，活菌數不少于1×1011CFU／mL；
（6）所述步驟（2）發酵溫度穩33℃。
實施例3。
一種復合益生菌生物消毒劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟：
（1）對枯草芽孢桿菌、乳酸桿菌、酵母菌3種益生菌菌株分別進行活化與種子培養；然后將其種子培養液按體積分數5％的接種量分別接種到相應的50L發酵罐中進行發酵培養；
（2）所述枯草芽孢桿菌的培養溫度為35℃，初始pH7，轉速120r／min，通氣量1.1vvm，24h后每隔2h取樣1次，測定產芽孢率，當產芽孢率達到90％以上時停止發酵；
（3）乳酸桿菌的培養溫度為32-41℃，初始pH6.5，培養時間28h；
（4）酵母菌的培養溫度為25-30℃，初始pH6.0，轉速120r／min，通氣量0.8vvm，培養時間48h；
（5）發酵結束后，使用0.2μm微濾膜分別對3種益生菌發酵液進行濃縮，活菌數不少于1×1011CFU／mL；
（6）所述步驟（4）發酵溫度穩28℃。