一種提高大花型兜蘭種子萌發率及其栽培方法與流程

本發明屬于花卉栽培和園藝領域，涉及兜蘭育種與栽培方法，更具體地說，本發明涉及兜蘭尤其是大花型兜蘭的育種栽培方法。

背景技術：

兜蘭暢銷于國際花卉市場，同時也是蘭科的一個瀕危類群。我國的杏黃、硬葉兜蘭曾勇獲世界蘭展全場總冠軍，獲得近百個美國蘭展獎項。兜蘭總共有79個野生種，其中約1/3產自我國，是蘭科中唯一受國際貿易公約(CITES)保護的瀕危野生動植物物種。我國兜蘭花卉市場需求缺口大，價格極為昂貴，常見品種單株價格100至150元，珍稀品種單株價格可達上千元。2012年，我國年產兜蘭僅幾萬株，近年兜蘭產量增加了10倍，每年產品都供不應求。

然而，盡管兜蘭暢銷于國際花卉市場，但是兜蘭也是蘭科的一個瀕危類群。兜蘭種子沒有胚乳，在自然環境中需與真菌共生才能萌發，且萌發率極低，而且兜蘭組織培養是國際兜蘭產業發展的瓶頸，存在增殖率低、褐化嚴重等問題。目前世界上兜蘭商業化量產技術仍未建立，其繁殖仍以無菌播種為主要手段，但存在著萌發率極低，成苗率低的問題，且不同種和品種兜蘭的采種時間相差迥異，最適合的培養基種類也不同。此外，兜蘭設施栽培存在品質差、生長周期長、生長速度慢的缺點，從瓶苗到開花甚至需要4至5年。

目前我國大陸的兜蘭缺乏自主知識產權的兜蘭品種，種苗依賴于進口臺灣地區，更缺乏科學的栽培方法和繁殖技術。兜蘭組織培養是國際兜蘭產業發展的瓶頸，存在增殖率低、褐化嚴重等問題。目前我國兜蘭科研投入明顯不足，主要存在以下幾方面問題。我國關于兜蘭的研究主要集中于原生種保護栽培，如杏黃兜蘭、硬葉兜蘭、帶葉兜蘭、巨瓣兜蘭、同色兜蘭、文山兜蘭等，兜蘭大多數種的花徑小于10cm，關于花徑大于12cm的商業品種的研究較少。然而，與原生種小花型或者多花型兜蘭相比，商品用的大花型兜蘭盡管觀賞價值要高得多，但是這類兜蘭為雜交種，倍性復雜，往往只能得到很少的種子，難以大規模生產利用，而且種子萌發率要比原生種小花型或者多花型兜蘭更低。

特別是，大花型兜蘭中的肉餅系列兜蘭盡管具有比較高的觀賞價值且具有較高的雜交親和性，但是由于其雜交種子無胚乳或胚發育不完全，在自然狀態下萌發率極低且原球莖褐化率偏高，使得種子萌發率、成苗率和品質問題尤其突出。

因此如何運用快速育種、繁殖和栽培高品質大花型兜蘭已成為該類花卉植物科研項目的重點，在其科研與開發中具有極深遠的現實意義。

技術實現要素：

本發明的目的是研究大花型兜蘭育種與栽培的各個環節，以培育出具有的優質兜蘭，并提高兜蘭生長速度和成品率，有效降低成本，提升市場競爭力，為兜蘭的規模化生產提供理論指導和技術支撐。

針對現有技術中大花型兜蘭所存在的種子萌發率低、褐化嚴重、成苗率低、生產周期長、品質低等技術問題，本發明在第一方面提供了一種提高大花型兜蘭種子萌發率的方法，所述方法包括如下步驟：(1)在大花型兜蘭開花后進行人工授粉；(2)在授粉后180天至240天獲取種子并播種于在種子萌發培養基上，從而由種子獲得芽體。

在本發明第一方面的一些優選的實施方式中，將所獲取的種子播種在配方為1/4MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+1g/L蛋白胨+25g/L香蕉+5.5g/L瓊脂+1g/L活性炭的種子萌發培養基上。

本發明在第二方面還提供了一種大花型兜蘭的栽培方法，所述方法采用本發明第一方面所述的方法來提高種子萌發率。

采用本發明方法可以顯著提高大花型兜蘭的種子萌發率、降低或消除褐化程度，從而為擴大生長規模和縮短生產周期提供技術支撐。在本發明第二方面的一些優選的實施方式中，還嚴格控制栽培養護條件包括但不限于濕度、溫度、光照和水肥條件，提高了大花型兜蘭的種苗成活率，改善了大花型兜蘭產品的品質，從而進一步為擴大生長規模和縮短生產周期提供技術支撐。

附圖說明

圖1為綠肉餅系列兜蘭的照片；

圖2為紅肉餅系列兜蘭的照片；

圖3為肉餅類兜蘭種子萌發率隨授粉后時間的變化曲線；

圖4為肉餅類兜蘭在不同相對濕度條件下的組培苗成活率；

圖5為肉餅類兜蘭組培苗移栽時使用不同基質的情況下成活率隨時間的變化；

圖6為肉餅類兜蘭中壯苗換盆時使用不同基質的情況下葉片生長總量隨時間的變化；

圖7a為使用對照方法種植得到的肉餅類兜蘭盆花產品的照片；

圖7b為使用本發明方法種植得到的肉餅類兜蘭盆花產品的照片。

具體實施方式

如上所述，本發明在第一方面提供了一種提高大花型兜蘭種子萌發率的方法，在一些優選的實施方式中，所述方法包括如下步驟：

(1)在大花型兜蘭開花后進行人工授粉；和

(2)在授粉后180天至270天(例如180、210、240或270天)獲取種子并播種于在種子萌發培養基上，從而由種子獲得芽體。

本發明人在深入研究大花型兜蘭的雜交育種和播種的基礎上，發現現有的大花型兜蘭種子萌發率低的主要原因至少有二。

本發明經過深入研究發現，影響兜蘭尤其是大花型兜蘭的種子萌發率的最關鍵因素是用于播種的種子的成熟度。現有技術盡管也選擇具有一定成熟度的播種僅播種，但是對適合于播種的兜蘭種子的成熟度沒有統一認識，有的認為來自授粉后300至360天的充分膨大蒴果的種子最好，例如CN201510565855.3公開了一種肉餅系列兜蘭雜交育種及其種苗快速繁殖的方法，其中采用授粉后300至360天的充分膨大蒴果作為種子；有的認為獲自授粉后140～150天的果莢的種子為宜，例如CN201410514229.7公開了兜蘭種子萌發培養基及培養方法，其中采用授粉140～150天的果莢的種子；有的認為獲自授粉后110～120天的果莢的種子更佳，例如CN201310742625.0使用授粉后110至120天收取的種子用于播種；有的認為使用授粉后180～220天時采收的種子會遇到夏季高溫，從而造成種子有胚率下降，爛果率增加，建議使用在授粉后120天左右所采收的種子，例如CN201510731703.6公開了一種縮短兜蘭果實發育期及提高種子萌發率的方法，認為魔帝兜蘭在授粉后180～220天時采收種子會遇到夏季高溫，從而造成種子有胚率下降，爛果率增加，因此建議在授粉后120天左右即可采果播種。但是，本發明人經過研究卻發現，大花型兜蘭的種子發育階段是影響種子無菌播種后萌發的關鍵因子，種子發育初期，幼嫩的種子緊密著生在果莢的胎座組織上，難以分離 下來，即使播種于培養基上也很快褐化，僅少量種子具有萌發能力。種子發育過于成熟時呈棕褐色，干燥松動，播種的萌發率也很低，可能是因為種皮發育成熟，難以打破休眠，需要超聲破皮或者化學物質處理才能促進萌發。對于大花型兜蘭，使用授粉后120天采收的種子萌發率非常低，有的甚至沒有萌發，并且適合播種的種子成熟度存在品種差異，對于肉餅系列兜蘭(參見圖1和2)而言，以授粉后240天采收的種子為最佳。

本發明人還發現，相對于小花型兜蘭，例如原生種兜蘭，如杏黃兜蘭、硬葉兜蘭、帶葉兜蘭、巨瓣兜蘭、同色兜蘭、文山兜蘭等(這些兜蘭的花徑均小于12cm，觀賞價值較差)，商品用的大花型兜蘭盡管觀賞價值要高得多，但是這類兜蘭為雜交種，倍性復雜，往往只能得到很少的種子，難以大規模生產利用，而且種子萌發率要比原生種小花型或者多花型兜蘭更低。但是，采用本發明方法能夠很大程度上克服了現有技術中大花型兜蘭所存在的問題。于是，在一些優選的實施方式中，所述大花型兜蘭為花朵大于12cm的兜蘭品種，更優選為F1代大花型兜蘭品種，進一步優選為種子萌發、種苗成活、品質問題更嚴重并且生產周期長的肉餅系列兜蘭品種(Paphiopedilum Pacific Shamrock)。

在一些優選的實施方式中，所述種子為在授粉后210天至240天獲取的種子(例如210、220、230或240)，更優選為在授粉后240天獲取的種子。

本發明對授粉方式沒有特別的限制，但是在一些優選的實施方式中，使用人工授粉的方式，所述人工授粉可以為人工自交授粉也可以為人工雜交授粉，或者這兩種授粉方式的組合。不過，為了避免性狀分離，更優選為人工雜交授粉。

在一些優選的實施方式中，所述種子萌發培養基為1/4MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+1g/L蛋白胨+25g/L香蕉+5.5g/L瓊脂+1g/L活性炭。

本發明經過試驗發現，大花型兜蘭的種子萌發培養基的組成是影響萌發率的另一個重要因素。現有技術中用于兜蘭種子萌發的基礎培養基有很多種，例如MS、NDM、花寶1號、VW培養基，其中進一步添加的組分更是五花八門。另外，一般認為，香蕉果肉中含有大量的氨基酸、激素和酶等有機物且成分較為復雜的天然復合物，蛋白胨的主要成分是氨基酸，因此在兜蘭的種子萌發培養基中，使用香蕉泥和蛋白胨的主要目的都是為了提供各種氨基酸，一般情況下沒有同時兩者都使用。但是經過研究發現，在1/4MS的基礎上添加適量的6-BA、NAA、瓊脂和活性炭，并同時添加適量的蛋白胨和香蕉肉泥可以顯著提高大花型兜蘭的種子萌發率。

本發明在第二方面還提供了一種大花型兜蘭的栽培方法，所述方法采用本發明第一方面所述的方法來提高種子萌發率。

在一些優選的實施方式中，在播種100天至150天(例如100、110、120、130、140或150天)后，將已發育出葉片的芽體轉入壯苗培養基中培養以獲得組培苗，所述壯苗培養基的配方為1/4MS+4mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+25g/L香蕉+5.5g/L瓊脂+1g/L活性炭。本發明人經過試驗發現，壯苗培養基中可以在不添加任何蛋白胨的情況下能夠很好地生長，從而實現壯苗的目的。

在一些優選的實施方式中，在所述組培苗的株高為4cm至6cm時，將組培苗轉移到自然光下煉苗20天后，將組培苗移栽到裝有樹皮基質的栽培容器中，并且以如下條件進行養護：相對濕度條件為60％至80％，更優選為80％。如果相對濕度低于60％，將會對大花型兜蘭的植株生長造成不利的不可逆的影響，因此需要在練苗移栽之后需要嚴格講相對濕度控制在60％以上。溫度條件可以為白天18℃至28℃，夜間15℃至18℃；光照條件為10000lux至15000lux；水肥管理條件為每5至7天澆透水一次，單獨或者交替地施用N:P:K為30:10:10和20:20:20的復合肥，稀釋倍數優選為3000倍，施用頻率為2至4周一次，施用方式為根區澆灌和/或葉面噴施。

在一些優選的實施方式中，在株幅等于或者大于9cm時進行一次換盆，并且在株幅等于或者大于22cm時進行二次換盆，換盆使用的基質均為由質量比為1:1的水苔和樹皮組成，并且以如下條件進行養護：相對濕度條件為60％至80％，更優選的為80％；溫度條件為白天18℃至28℃，夜間15℃至18℃；光照條件為10000lux至15000lux；水肥管理條件為每7至10天澆透水一次，施用N:P:K為20:20:20的復合肥，稀釋倍數為3000倍，施用頻率為每2周一次，施用方式為根區澆灌和/或葉面噴施。

在一些優選的實施方式中，在二次換盆之后并且在目標花期之前6個月進行催花，催花期間以如下條件進行養護：相對濕度條件為不低于50％，更優選的為80％；溫度條件為白天25℃至27℃，夜間16℃至18℃；光照條件為10000lux至15000lux；水肥管理條件為每7至10天澆透水一次，施用N:P:K為10:30:10的復合肥，稀釋倍數為3000倍，施用頻率為4周一次，施用方式為根區澆灌和/或葉面噴施。

在一些優選的實施方式中，練苗后移栽時使用的所述樹皮基質為松樹皮，優選為松鱗，更優選的是樹皮的尺寸為3mm至7mm。在另外一些優選的實施方式 中，換盆時使用的基質中所含有的樹皮為松樹皮，優選為松鱗，更優選的是樹皮的尺寸為10mm至20mm。

在練苗后移栽時，可以使用百菌靈稀釋液清洗掉根部的培養基，在清洗的同時進行消毒。

本發明人經過試驗還發現，現有技術中大花型兜蘭種苗的成活率低和產品品質欠佳還與種苗出瓶練苗后所使用的培養基質密切相關，如果練苗后使用樹皮作為基質和/或換盆后使用水苔和樹皮的組合作為基質可以顯著大花型兜蘭的瓶苗成活率。

在一個具體的實施方式中，本發明方法包括品種的選擇、育種方法、無菌播種與組織培養、組培苗定植與基質篩選、盆苗管理與花期管理技術等，具體可以包括以下步驟：(a)選擇具有目標性狀的大花型兜蘭品種；(b)在兜蘭品種開花后，選擇健康成熟的植株進行人工自交或雜交授粉；(c)將果莢中的種子播種于培養基上，萌發后進行壯苗和生根培養；(d)組培苗煉苗、消毒與定植；(e)換盆、光溫、水肥管理技術；(f)低溫催花及花期肥水管理技術。

在一個更具體的實施方式中，可以選擇3年成熟苗、花朵大(直徑大于12cm)的黃色、綠色和紅色品種，如肉餅系列兜蘭，其以美洲兜蘭系列為主要親本雜交選育的F1代新品種，主要分為紅花和綠花系列。選擇健康成熟的兜蘭品種開花后，進行人工自交或雜交育種。授粉時，首先去掉父母本的唇瓣，用針挑下父本花粉粒，安放在母本柱頭上，因花粉團具有粘性物質，因此，花粉粒很容易粘在柱頭上。選擇授粉180天至270天后成熟的果莢，制作無菌播種培養基，配方為1/4MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+1g/L蛋白胨+25g/L香蕉+5.5g/L瓊脂+1g/L活性炭。將果莢中的白色種子播種于制作好的培養基上。播種30天至40天后，種子開始萌動，出現白色點狀組織，并轉綠，出現綠色芽尖。播種100天至150天后，可將已發育葉片的芽體轉入壯苗培養基，配方為1/4MS+4mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+25g/L香蕉+5.5g/L瓊脂+1g/L活性炭。在株高為4cm至6cm時，將組培苗帶瓶轉移到自然光下培養20天后進行練苗(練苗時間最好選擇在11月左右進行)，取出植株，用百菌靈1000倍稀釋液清洗根部培養基，移栽于1.7寸透明營養缽中，基質為樹皮。養護管理條件：濕度是決定組培苗移栽成活率的重要因素，最佳濕度為60至80％，濕度達到60％時，可以在盆栽兜蘭附近地下灑水、噴霧、水簾通風；溫度條件白天18℃至28℃，夜間15℃至18℃；大花型兜蘭光照控制在10000lux至15000lux，可以采用遮光度在75％的遮光網遮光進行 光照控制。水肥管理條件：樹皮為基質，需要一般5至7天澆一次(基質8成干即可補水)，每次澆水要澆透。肥料濃度為3000倍，營養生長期可以每2周施肥一次，可以采用液肥澆灌根區和噴施葉表面。大花型兜蘭的營養生長期以氮肥及均衡肥為主，常用N:P:K為30:10:10和/或20:20:20復合肥。將養護1年、株幅大于9cm的1.5寸植株換盆至2.5寸透明營養缽中，養護1年后，株幅大于22cm的2.5寸植株換盆至3寸透明營養缽中，基質均為水苔:樹皮＝1:1。養護管理條件：白天18℃至28℃，夜間15℃至18℃。夏季達到28℃時，可以加強通風和采取降溫措施，冬季低至15℃時，進行保溫或加溫；相對濕度50至80％，濕度大于80％時，可以加強通風以促進空氣流動，濕度低于50％時，可以在盆栽兜蘭附近地下灑水、噴霧、水簾通風；大花型兜蘭的光照強度可以控制為10000lux至15000lux，在必要的情況下可以采用遮光度為75％的遮光網遮光進行遮光控制。水肥管理條件：水苔加樹皮為基質時，一般7至10天澆一次。每次澆水要澆透，下雨天不澆水。肥料濃度為3000倍，營養生長期2周施肥一次，生殖生長期1個月施肥一次，可以采用液肥澆灌根區和噴施葉表面。兜蘭生長期以氮肥及均衡肥為主，具體可以采用N:P:K為30:10:10和/或20:20:20復合肥。催花日期為目標花期之前6個月，晝/夜溫度控制于25至27℃/16至18℃進行催花處理，光照強度10000lux至15000lux。花期減少施肥，可以每4周施肥一次，適當提高P肥，具體可以采用N:P:K為10:30:10復合肥，可以采用液肥澆灌根區和噴施葉表面。

采用本發明的方法可以具有如下優點等：1、兜蘭雜交后代花徑大于12cm，甚至達到15至16cm。2、無菌播種萌發率高，組培苗生長速度快。3、瓶苗基質為樹皮，肉餅系列兜蘭的瓶苗成活率達85％以上。4、縮短栽培周期到3年。5、花序完整，花瓣完好無損，觀賞效果好。

實施例

以下實施例用來進一步說明本發明的實質性內容。根據本發明技術方案和實施例的描述，也許同領域技術人員在本發明的基礎上還可以對本發明技術方案進行一些修改和改進。因此，在不偏離本發明主要技術方案基礎上所做的修改和改進，均應屬于本發明所要求保護的范圍。以下實施例中練苗后移栽時使用的樹皮基質時樹皮為5mm的松鱗，并且換盆時使用的樹皮基質或者基質中所含有的樹皮基質為15mm松鱗。

實施例1

選擇健康成熟的肉餅系列兜蘭品種(參見圖1左圖)，進行人工雜交育種。授粉時，首先去掉父母本的唇瓣，用針挑下父本花粉粒，安放在母本柱頭上，因花粉團具有粘性物質，因此，花粉粒很容易粘在柱頭上。選擇授粉30天至300天不同成熟程度的果莢，分別播種在種子萌發培養基上，培養基配方為1/4MS+1mg/L6-BA+0.1mg/L NAA+1g/L蛋白胨+25g/L香蕉+5.5g/L瓊脂+1g/L活性炭，并于60天后統計萌發率。

由圖3的統計結果可見，肉餅系列兜蘭的萌發率與種子成熟程度有直接關系。授粉后120天接種培養基上種子不萌發，授粉后240天種子萌發率最高，授粉后超過300天種子因過于成熟，難以萌發。因此，選擇播種時間對種子萌發率有重要影響。

實施例2

使用實施例1所述的肉餅系列兜蘭品種的組培苗，出瓶后，栽培于1.7寸透明營養缽，基質為樹皮。設置不同養護濕度管理條件：濕度為60％和80％。培養200天后，統計成活率。試驗結果如圖4所示，肉餅兜蘭抗性差，成活率低。相對濕度為80％時，肉餅組培苗成活率可達79％。相對濕度為60％時，肉餅組培苗成活率為51％。因此，相對濕度為80％更適合組培苗出瓶生長。

實施例3

使用實施例1所述的肉餅系列兜蘭品種，以實施例1基本相同的方法進行種子萌發率試驗，不同的是采用如下種子萌發培養基。結果如下所示。

由上表可以看出，使用1/4MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+1g/L蛋白胨+25g/L香蕉+5.5g/L瓊脂+1g/L活性炭作為種子萌發培養基可以顯著提高大花型兜蘭 的種子萌發率。

實施例4

以實施例1所使用的肉餅系列兜蘭品種為試材，將株高4至6cm的組培苗帶瓶轉移到自然光下培養20天后，取出植株，用百菌靈1000倍稀釋液清洗根部培養基，移栽于1.7寸透明營養缽中，基質分別為樹皮、沸石：樹皮：椰塊＝2:1:2、果樹枝、水草和椰塊，分別于64天、167天、250天、365天后統計成活率。

養護管理條件：濕度60至80％；溫度條件白天18℃至28℃，夜間15℃至18℃；光照10000lux至15000lux，采用遮光度在75％的遮光網進行遮光控制。水肥管理條件：一般5至7天澆一次，基質8成干就應及時補水。每次澆水要澆透，下雨天不澆水。肥料濃度為3000倍，營養生長期2周施肥一次，采用液肥澆灌根區和噴施葉表面交替施肥，其中營養生長期以氮肥及均衡肥為主，具體為交替施用N:P:K為30:10:10和20:20:20復合肥。

由圖5可見，兜蘭組培苗基質試驗結果表明，以樹皮為基質成活率最高，培養6個月后成活率達到82％，其次是果樹枝和沸石：樹皮：椰塊＝2:1:1，成活率達72％，但是，果樹枝基質在栽培過程中，易引起真菌和細菌感染，早起出現真菌性白灰色霉狀物，后期出現細菌性灰色水漬狀物，以此為基質，將提高兜蘭病害(如莖腐病)幾率。

實施例5

以實施例1所述的肉餅系列兜蘭品種為試材，選擇株幅大于9cm的1.7寸植株換盆至2.5寸透明營養缽中，基質處理分別為水苔、樹皮、水苔：樹枝＝2:1、水苔：樹皮＝1:1、水苔：樹皮：羊糞＝1:1:1。

養護管理條件：白天18℃至28℃，夜間15℃至18℃；濕度50至80％；光照要求10000lux至15000lux，采用遮光度在75％的遮光網遮光控制光照。水肥管理條件：每7天至10天澆透水一次。肥料濃度為3000倍，營養生長期2周施肥一次，生殖生長期1個月施肥一次，采用液肥澆灌根區和噴施葉表面結合施肥方式，兜蘭營養生長期以氮肥及均衡肥為主，交替施用N:P:K為30:10:10和20:20:20的復合肥。

由圖6可以看出，水苔：樹皮＝1:1為基質時，肉餅的葉片生長量最大，由4.9cm生長至65.83cm，相對于其他基質而言，是最適合肉餅類中大苗生長的基質種類。其次，水苔：樹皮：羊糞＝1:1:1的生長量也較大，添加有機質有利于兜蘭葉片生長。這兩種基質均好于純水苔和樹皮，且基質中添加樹皮的效果好于樹枝。

實施例6

選擇實施例1所述的肉餅系列兜蘭品種的3年成熟苗。選擇健康成熟的兜蘭植株，在開花后進行人工自交授粉。授粉時，首先去掉父母本的唇瓣，用針挑下父本花粉粒，安放在母本柱頭上，因花粉團具有粘性物質，因此，花粉粒能夠粘在柱頭上。選擇授粉120天后成熟的果莢，制作無菌播種培養基，配方為MS+1mg/L6-BA+0.1mg/L NAA+5.5g/L瓊脂+1g/L活性炭。將果莢中的種子播種于制作好的培養基上。播種30至40天后，種子開始萌動，出現白色點狀組織，并轉綠，出現綠色芽尖，此時測量萌發率。

播種100天至150天后，可將已發育葉片的芽體轉入壯苗培養基，配方為MS+4mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+25g/L香蕉+5.5g/L瓊脂+1g/L活性炭。

將在壯苗培養基中長到株高4至6cm時帶瓶轉移到自然光下培養20天進行練苗。

經過練苗后，取出植株，用百菌靈1000倍稀釋液清洗根部培養基，移栽于1.7寸透明營養缽中，基質為水苔。養護管理條件：濕度為60至80％，濕度低于60％時，在盆栽兜蘭附近地下灑水、噴霧、水簾通風；溫度條件白天18℃至28℃，夜間15℃至18℃；將光照強度控制為10000lux至15000lux，采用遮光度在75％的遮光網進行遮光控制。水肥管理條件：樹皮基質8成干(一般需要5至7天澆一次)時補水。每次澆水要澆透(下雨天不澆水)。肥料濃度為3000倍，營養生長期2周施肥一次，采用液肥澆灌根區結合噴施葉表面的施肥方式。兜蘭營養生長期以氮肥及均衡肥為主，具體使用N:P:K為20:20:20的復合肥。

將養護1年、株幅大于9cm的1.5寸植株換盆至2.5寸透明營養缽中，養護1年后，株幅大于22cm的2.5寸植株換盆至3寸透明營養缽中，基質均為樹皮。養護管理條件：最佳濕度為60至80％，濕度低于60％時，在盆栽兜蘭附近地下灑水、噴霧、水簾通風；溫度條件白天18℃至28℃，夜間15℃至18℃；采用遮光度在75％的遮光網將兜蘭光照控制在10000lux至15000lux。水肥管理條件：樹皮基質8成干時補水(一般需要5至7天澆一次)。每次澆水要澆透(下雨天不澆水)。肥料濃度為3000倍，營養生長期2周施肥一次，采用液肥澆灌根區結合噴施葉表面。兜蘭生長期以氮肥及均衡肥為主，具體常用N:P:K為20:20:20的復合肥。

將養護1年、株幅大于9cm的1.5寸植株換盆至2.5寸透明營養缽中，養護1年后，株幅大于22cm的2.5寸植株換盆至3寸透明營養缽中，基質均為水苔:樹 皮＝1:1。養護管理條件：白天18℃至28℃，夜間15℃至18℃。在溫度高于30℃時，通過加強通風進行降溫，冬季低于15℃時，采用保溫或加溫措施；濕度50至80％，濕度大于80％時，加強通風促使空氣流動，濕度低于50％時，在盆栽兜蘭附近地下灑水、噴霧、水簾通風；兜蘭光照采用遮光度在75％的遮光網控制在10000lux至15000lux。水肥管理條件：水苔加樹皮為基質時，7至10天澆一次。每次澆水要澆透(下雨天不澆水)。肥料濃度為3000倍，營養生長期2周施肥一次，生殖生長期1個月施肥一次，施肥采用液肥澆灌根區和噴施葉表面進行。兜蘭營養生長期以氮肥及均衡肥為主，具體使用N:P:K為30:10:10和20:20:20的復合肥。催花日期為目標花期之前6個月，晝/夜溫度控制于25至27℃/16至18℃進行催花處理，光照強度10000lux至15000lux。花期減少施肥，每4周施肥一次，適當提高P肥，具體使用N:P:K為10:30:10的復合肥，通過液肥澆灌根區和噴施葉表面進行。

該方法操作下，雜交種子無菌播種不萌發或者萌發率極低，兜蘭種子極不成熟(白色團裝)或已成熟(褐色顆粒狀)，均很難萌發。組培苗出瓶后基質為水苔，成活率低于40％。中大苗基質為樹皮，根系發育良好，但葉片不挺立且缺綠，生長周期長，開花品質差，花徑小于10cm，花色淺(參見圖7a)。

實施例7

選擇實施例1所述的肉餅系列兜蘭品種的3年成熟苗。選擇健康成熟的植株，在開花后，進行人工自交授粉。授粉時，首先去掉父母本的唇瓣，用針挑下父本花粉粒，安放在母本柱頭上，因花粉團具有粘性物質，因此，花粉粒能夠粘在柱頭上。選擇授粉240天后的果莢獲取種子(種子為半成熟，呈淺黃色顆粒狀)，制作種子萌發培養基，配方為1/4MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+1g/L蛋白胨+25g/L香蕉+5.5g/L瓊脂+1g/L活性炭。將果莢中的白色種子播種于制作好的培養基上。在播種30至40天后，種子開始萌動，出現白色點狀組織，并轉綠，出現綠色芽尖，此時測量萌發率。

在播種100天至150天后，將已發育葉片的芽體轉入壯苗培養基，配方為1/4MS+4mg/L6-BA+0.2mg/L NAA+25g/L香蕉+5.5g/L瓊脂+1g/L活性炭。

將在壯苗培養基中長到株高4至6cm時帶瓶轉移到自然光下培養20天進行練苗。

經過練苗后，取出植株，用百菌靈1000倍稀釋液清洗掉根部培養基，然后移栽于1.7寸透明營養缽中，基質為樹皮。養護管理條件：濕度控制為60至80％， 濕度低于60％時，在盆栽兜蘭附近地下灑水、噴霧、水簾通風；溫度條件白天18℃至28℃，夜間15℃至18℃；兜蘭光照在10000lux至15000lux，采用遮光度在75％的遮光網進行遮光控制。水肥管理條件：樹皮基質8成干時補水(一般需要5至7天澆一次)。每次澆水要澆透(下雨天不澆水)。肥料濃度為3000倍，營養生長期2周施肥一次，采用液肥澆灌根區結合噴施葉表面。兜蘭生長期以氮肥及均衡肥為主，具體使用N:P:K為20:20:20的復合肥。

將養護1年、株幅大于9cm的1.5寸植株換盆至2.5寸透明營養缽中，養護1年后，株幅大于22cm的2.5寸植株換盆至3寸透明營養缽中，基質均為水苔:樹皮＝1:1。養護管理條件：白天18℃至28℃，夜間15℃至18℃。在溫度高于30℃時，通過加強通風進行降溫，冬季低于15℃時，采用保溫或加溫措施；濕度50至80％，濕度大于80％時，加強通風促使空氣流動，濕度低于50％時，在盆栽兜蘭附近地下灑水、噴霧、水簾通風；兜蘭光照采用遮光度在75％的遮光網控制在10000lux至15000lux。水肥管理條件：水苔加樹皮為基質時，7至10天澆一次。每次澆水要澆透(下雨天不澆水)。肥料濃度為3000倍，營養生長期2周施肥一次，生殖生長期1個月施肥一次，施肥采用液肥澆灌根區結合噴施葉表面進行。兜蘭營養生長期以氮肥及均衡肥為主，具體使用N:P:K為20:20:20的復合肥。

在目標花期之前6個月進行催花，催花期間晝/夜溫度控制于25至27℃/16至18℃進行催花處理，光照強度10000lux至15000lux。花期減少施肥，每4周施肥一次，適當提高P肥，具體使用N:P:K為10:30:10的復合肥，通過液肥澆灌根區結合噴施葉表面進行。

該方法操作下，選擇種子半成熟(授粉后240天，呈淺黃色顆粒狀)時進行播種萌發率高，出苗整齊。采用基礎培養基為1/4MS時的成活率和生長速度高，培養基中添加蛋白胨和香蕉可提高萌發率。

組培苗出瓶后基質為樹皮，成活率可高達85％以上，甚至達到100％。中大苗基質為水苔:樹皮＝1:1時，根系發育良好，葉片挺立、墨綠色、寬而厚，大大縮短了營養生長周期，開花品質好，花徑可達12至16cm，花色艷而靚(參見圖7b)。

通過本發明方法培育的大花型兜蘭的開花數量多，觀賞效果好。雜交后代萌發率高，瓶苗成活率高，大苗葉片挺立、墨綠色、寬而厚，花大色艷，花期長達兩個半月，生產周期降到3年。本技術應用于大花型兜蘭育種與生產，縮短生產周期的同時，保證產品數量和質量，為大花型兜蘭育種和盆花的生產提供了技術保證。