本發明涉及植物組織培養技術領域，具體是一種烏紫楊梅苗組培繁殖技術。
背景技術：
烏紫楊梅是象山縣的地方品種，因果實成熟時呈紫黑色而得名，是當地的通俗叫法，又稱“家梅”。據傳在象山已有500余年的栽培歷史。象山烏紫楊梅樹勢強健，果實圓球形，中大，平均單果重18.5g，最大30g以上，略小于東魁楊梅，果面紫黑色，有光澤，果肉厚，果汁多，甜酸適口，味濃，可溶性固形物11.0％以上，最高可達14.0％，含酸量1％左右。果核稍大，較粘核，質地硬，耐貯藏，成熟期在6月中下旬，比東魁楊梅約早5天。當前烏紫楊梅苗的組培繁殖技術存在操作復雜，繁殖周期長，成本較高等缺陷；因此烏紫楊梅苗組培繁殖技術的開發，是十分緊迫的任務。
技術實現要素：
本發明的目的在于提供一種烏紫楊梅苗組培繁殖技術，以解決上述背景技術中提出的問題。
為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：
一種烏紫楊梅苗組培繁殖技術，包括以下步驟：
1)前處理
挑選健康無蟲害15cm長左右的烏紫楊梅苗，去除雜葉和頂芽，使用無菌水清洗枝條表面的灰塵并裁剪成四個莖段；隨后置于2％濃度的二氧化氯溶液中浸泡10min，使用小蘇打水沖洗15-20min，并置于保鮮膜中噴水放置，放置時間不超過6h；
2)無菌組織建立
在無菌工作臺上，將步驟1)中采集到的莖段放入錐形瓶中，首先加入過氧化氫在搖床上進行搖晃浸泡2min，迅速倒出，然后加入次氯酸鈉溶液進行攪拌處理5min，處理后使用無菌水反復沖洗，并使用熱風機吹干莖段表面的水分；使用無菌刀沿著莖段的橫向位置將莖段剪開小斷口，隨后將含有小斷口的莖段接種在初代培養基中，并使其保持直立，初代培養條件為：黑暗，24℃-26℃，培養8天-10天；
3)愈傷組織分化培養及擴大培養
將在初代培養基中培養后的材料放置愈傷組織培養基中進行誘導分化，直至莖段中的小斷口產生淡黃色愈傷組織，愈傷組織培養條件為：1000Lx-1500Lx，28℃-30℃，光照時間12h-16h，黑暗時間12h-8h，培養8天-10天；愈傷組織培養結束后，將莖段放置擴大培養基中進行增殖培養，如此循環往復，直至得到所需數量的無根苗；
4)增長培養
將無根苗的基部切開產生小斷口，轉入到增長培養基中培養，直至小斷口處生芽長度為2cm以上時，并切下放置增長培養基中繼續培養7天，增長培養條件為900Lx，28℃-30℃，光照時間4h-8h，黑暗時間20h-16h；
5)分化出根
增長后的無根苗達到12cm-14cm時，將它們轉入生根誘導培養基中，生根誘導培養條件為：開始的3天-5天，黑暗，24℃培養；1400Lx光照，28℃培養15天；
6)移栽培養
待苗生根3-5條，根長5-8cm時，使用無菌水徹底洗凈苗根，并在0.8％濃度的高錳酸鉀溶液中浸泡3min，最后移栽到由細砂土、硅藻土和腐殖質組成并滅菌的基質中，套上塑料膜，保持相對濕度67％-70％，溫度30℃-32℃，3600Lx光照，20h，隨后按照一般試管苗方法進行管理。
作為本發明進一步的方案：所述初代培養基主要成份為MS+0.8mg/L BA+2mg/L青蒿素+2mg/L ZR+45mg/L肌醇+38g/L蔗糖+4g/L瓊脂，pH 5.8-6.0。
作為本發明進一步的方案：所述愈傷組織培養基主要成份為1/2MS+1/2WPM+4mg/L 6-BA+12mg/L大蒜素+340mg/L香蕉粉+30g/L蔗糖+6g/L瓊脂，pH 5.8-6.0。
作為本發明進一步的方案：所述擴大培養基培養基主要成份為MS+0.4mg/L NAA+0.7mg/L IBA+40mg/L人參提取物+60mg/L賴氨酸+35g/L蔗糖+4g/L瓊脂，pH 5.8-6.0。
作為本發明進一步的方案：所述增長培養基主要成份為MS+0.6mg/L NAA+0.1mg/L KT+200mg/L香豆酸+4g/L半乳糖+31g/L蔗糖+5g/L瓊脂，pH 5.9-6.4。
作為本發明進一步的方案：所述生根誘導培養基主要成份為MS+0.8mg/L NAA+0.8mg/L IBA+4.8mg/L D-酒石酸+6.1mg/L L-高絲氨酸內酯鹽酸鹽+32g/L蔗糖+4.6g/L瓊脂，pH 6.0-6.5。
與現有技術相比，本發明的有益效果是：
本發明所提供的組培繁殖技術，具有繁殖系數高、生產周期短、程序簡單易于操作、成本低廉等優點，適于烏紫楊梅苗的快速繁殖。
具體實施方式
下面將結合本發明實施例，對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發明保護的范圍。
實施例1
一種烏紫楊梅苗組培繁殖技術，包括以下步驟：
1)前處理
挑選健康無蟲害15cm長左右的烏紫楊梅苗，去除雜葉和頂芽，使用無菌水清洗枝條表面的灰塵并裁剪成四個莖段；隨后置于2％濃度的二氧化氯溶液中浸泡10min，使用小蘇打水沖洗15min，并置于保鮮膜中噴水放置，放置時間不超過6h；
2)無菌組織建立
在無菌工作臺上，將步驟1)中采集到的莖段放入錐形瓶中，首先加入過氧化氫在搖床上進行搖晃浸泡2min，迅速倒出，然后加入次氯酸鈉溶液進行攪拌處理5min，處理后使用無菌水反復沖洗，并使用熱風機吹干莖段表面的水分；使用無菌刀沿著莖段的橫向位置將莖段剪開小斷口，隨后將含有小斷口的莖段接種在初代培養基中，并使其保持直立，初代培養條件為：黑暗，24℃，培養8天；
3)愈傷組織分化培養及擴大培養
將在初代培養基中培養后的材料放置愈傷組織培養基中進行誘導分化，直至莖段中的小斷口產生淡黃色愈傷組織，愈傷組織培養條件為：1000Lx，28℃，光照時間12h，黑暗時間12h，培養8天；愈傷組織培養結束后，將莖段放置擴大培養基中進行增殖培養，如此循環往復，直至得到所需數量的無根苗；
4)增長培養
將無根苗的基部切開產生小斷口，轉入到增長培養基中培養，直至小斷口處生芽長度為2cm以上時，并切下放置增長培養基中繼續培養7天，增長培養條件為900Lx，28℃，光照時間4h，黑暗時間20h；
5)分化出根
增長后的無根苗達到12cm時，將它們轉入生根誘導培養基中，生根誘導培養條件為：開始的3天，黑暗，24℃培養；1400Lx光照，28℃培養15天；
6)移栽培養
待苗生根3條，根長5cm時，使用無菌水徹底洗凈苗根，并在0.8％濃度的高錳酸鉀溶液中浸泡3min，最后移栽到由細砂土、硅藻土和腐殖質組成并滅菌的基質中，套上塑料膜，保持相對濕度67％，溫度30℃，3600Lx光照，20h，隨后按照一般試管苗方法進行管理。
其中：
所述初代培養基主要成份為MS+0.8mg/L BA+2mg/L青蒿素+2mg/L ZR+45mg/L肌醇+38g/L蔗糖+4g/L瓊脂，pH 5.8。
所述愈傷組織培養基主要成份為1/2MS+1/2WPM+4mg/L 6-BA+12mg/L大蒜素+340mg/L香蕉粉+30g/L蔗糖+6g/L瓊脂，pH 5.8。
所述擴大培養基培養基主要成份為MS+0.4mg/L NAA+0.7mg/L IBA+40mg/L人參提取物+60mg/L賴氨酸+35g/L蔗糖+4g/L瓊脂，pH 5.8。
所述增長培養基主要成份為MS+0.6mg/L NAA+0.1mg/L KT+200mg/L香豆酸+4g/L半乳糖+31g/L蔗糖+5g/L瓊脂，pH 5.9。
所述生根誘導培養基主要成份為MS+0.8mg/L NAA+0.8mg/L IBA+4.8mg/L D-酒石酸+6.1mg/L L-高絲氨酸內酯鹽酸鹽+32g/L蔗糖+4.6g/L瓊脂，pH 6.0。
實施例2
一種烏紫楊梅苗組培繁殖技術，包括以下步驟：
1)前處理
挑選健康無蟲害15cm長左右的烏紫楊梅苗，去除雜葉和頂芽，使用無菌水清洗枝條表面的灰塵并裁剪成四個莖段；隨后置于2％濃度的二氧化氯溶液中浸泡10min，使用小蘇打水沖洗18min，并置于保鮮膜中噴水放置，放置時間不超過6h；
2)無菌組織建立
在無菌工作臺上，將步驟1)中采集到的莖段放入錐形瓶中，首先加入過氧化氫在搖床上進行搖晃浸泡2min，迅速倒出，然后加入次氯酸鈉溶液進行攪拌處理5min，處理后使用無菌水反復沖洗，并使用熱風機吹干莖段表面的水分；使用無菌刀沿著莖段的橫向位置將莖段剪開小斷口，隨后將含有小斷口的莖段接種在初代培養基中，并使其保持直立，初代培養條件為：黑暗，25℃，培養9天；
3)愈傷組織分化培養及擴大培養
將在初代培養基中培養后的材料放置愈傷組織培養基中進行誘導分化，直至莖段中的小斷口產生淡黃色愈傷組織，愈傷組織培養條件為：1420Lx，29℃，光照時間14h，黑暗時間10h，培養9天；愈傷組織培養結束后，將莖段放置擴大培養基中進行增殖培養，如此循環往復，直至得到所需數量的無根苗；
4)增長培養
將無根苗的基部切開產生小斷口，轉入到增長培養基中培養，直至小斷口處生芽長度為2cm以上時，并切下放置增長培養基中繼續培養7天，增長培養條件為900Lx，29℃，光照時間6h，黑暗時間18h；
5)分化出根
增長后的無根苗達到13cm時，將它們轉入生根誘導培養基中，生根誘導培養條件為：開始的3天-5天，黑暗，24℃培養；1400Lx光照，28℃培養15天；
6)移栽培養
待苗生根4條，根長4cm時，使用無菌水徹底洗凈苗根，并在0.8％濃度的高錳酸鉀溶液中浸泡3min，最后移栽到由細砂土、硅藻土和腐殖質組成并滅菌的基質中，套上塑料膜，保持相對濕度68％，溫度31℃，3600Lx光照，20h，隨后按照一般試管苗方法進行管理。
其中：
所述初代培養基主要成份為MS+0.8mg/L BA+2mg/L青蒿素+2mg/L ZR+45mg/L肌醇+38g/L蔗糖+4g/L瓊脂，pH 5.9。
所述愈傷組織培養基主要成份為1/2MS+1/2WPM+4mg/L 6-BA+12mg/L大蒜素+340mg/L香蕉粉+30g/L蔗糖+6g/L瓊脂，pH 5.9。
所述擴大培養基培養基主要成份為MS+0.4mg/L NAA+0.7mg/L IBA+40mg/L人參提取物+60mg/L賴氨酸+35g/L蔗糖+4g/L瓊脂，pH 5.9。
所述增長培養基主要成份為MS+0.6mg/L NAA+0.1mg/L KT+200mg/L香豆酸+4g/L半乳糖+31g/L蔗糖+5g/L瓊脂，pH 6.2。
所述生根誘導培養基主要成份為MS+0.8mg/L NAA+0.8mg/L IBA+4.8mg/L D-酒石酸+6.1mg/L L-高絲氨酸內酯鹽酸鹽+32g/L蔗糖+4.6g/L瓊脂，pH 6.3。
實施例3
一種烏紫楊梅苗組培繁殖技術，包括以下步驟：
1)前處理
挑選健康無蟲害15cm長左右的烏紫楊梅苗，去除雜葉和頂芽，使用無菌水清洗枝條表面的灰塵并裁剪成四個莖段；隨后置于2％濃度的二氧化氯溶液中浸泡10min，使用小蘇打水沖洗20min，并置于保鮮膜中噴水放置，放置時間不超過6h；
2)無菌組織建立
在無菌工作臺上，將步驟1)中采集到的莖段放入錐形瓶中，首先加入過氧化氫在搖床上進行搖晃浸泡2min，迅速倒出，然后加入次氯酸鈉溶液進行攪拌處理5min，處理后使用無菌水反復沖洗，并使用熱風機吹干莖段表面的水分；使用無菌刀沿著莖段的橫向位置將莖段剪開小斷口，隨后將含有小斷口的莖段接種在初代培養基中，并使其保持直立，初代培養條件為：黑暗，26℃，培養10天；
3)愈傷組織分化培養及擴大培養
將在初代培養基中培養后的材料放置愈傷組織培養基中進行誘導分化，直至莖段中的小斷口產生淡黃色愈傷組織，愈傷組織培養條件為：1500Lx，30℃，光照時間16h，黑暗時間8h，培養10天；愈傷組織培養結束后，將莖段放置擴大培養基中進行增殖培養，如此循環往復，直至得到所需數量的無根苗；
4)增長培養
將無根苗的基部切開產生小斷口，轉入到增長培養基中培養，直至小斷口處生芽長度為2cm以上時，并切下放置增長培養基中繼續培養7天，增長培養條件為900Lx，30℃，光照時間8h，黑暗時間16h；
5)分化出根
增長后的無根苗達到14cm時，將它們轉入生根誘導培養基中，生根誘導培養條件為：開始的5天，黑暗，24℃培養；1400Lx光照，28℃培養15天；
6)移栽培養
待苗生根5條，根長8cm時，使用無菌水徹底洗凈苗根，并在0.8％濃度的高錳酸鉀溶液中浸泡3min，最后移栽到由細砂土、硅藻土和腐殖質組成并滅菌的基質中，套上塑料膜，保持相對濕度70％，溫度32℃，3600Lx光照，20h，隨后按照一般試管苗方法進行管理。
其中：
所述初代培養基主要成份為MS+0.8mg/L BA+2mg/L青蒿素+2mg/L ZR+45mg/L肌醇+38g/L蔗糖+4g/L瓊脂，pH 6.0。
所述愈傷組織培養基主要成份為1/2MS+1/2WPM+4mg/L 6-BA+12mg/L大蒜素+340mg/L香蕉粉+30g/L蔗糖+6g/L瓊脂，pH 6.0。
所述擴大培養基培養基主要成份為MS+0.4mg/L NAA+0.7mg/L IBA+40mg/L人參提取物+60mg/L賴氨酸+35g/L蔗糖+4g/L瓊脂，pH 6.0。
所述增長培養基主要成份為MS+0.6mg/L NAA+0.1mg/L KT+200mg/L香豆酸+4g/L半乳糖+31g/L蔗糖+5g/L瓊脂，pH 6.4。
所述生根誘導培養基主要成份為MS+0.8mg/L NAA+0.8mg/L IBA+4.8mg/L D-酒石酸+6.1mg/L L-高絲氨酸內酯鹽酸鹽+32g/L蔗糖+4.6g/L瓊脂，pH 6.5。
綜上所述，本發明采用上述組培繁殖技術后，生根率達97％以上，移栽成活率達94％以上。
對于本領域技術人員而言，顯然本發明不限于上述示范性實施例的細節，而且在不背離本發明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實現本發明。因此，無論從哪一點來看，均應將實施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發明的范圍由所附權利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權利要求的等同要件的含義和范圍內的所有變化囊括在本發明內。
此外，應當理解，雖然本說明書按照實施方式加以描述，但并非每個實施方式僅包含一個獨立的技術方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領域技術人員應當將說明書作為一個整體，各實施例中的技術方案也可以經適當組合，形成本領域技術人員可以理解的其他實施方式。