一種人血清中谷氨酸脫羧酶抗體快速檢測試紙條的制作方法
【專利摘要】本實用新型公開了一種人血清中谷氨酸脫羧酶抗體快速檢測試紙條，包括背襯底板，該背襯底板上設置有硝酸纖維素膜、樣品結合墊和吸水膜，該樣品結合墊和吸水膜分別疊壓在硝酸纖維素膜的兩端上；該樣品結合墊上包被有標記物標記的GAD抗原和鼠IgG，所述標記物為膠體金、有色微球、熒光乳膠微球、時間分辨熒光乳膠納米微球、量子點中的一種；該硝酸纖維素膜上設有檢測線和質控線，該檢測線包被有另一個表位的GAD抗原，該質控線包被有羊抗鼠IgG。本實用新型具有反應迅速、靈敏度高、特異性強、穩定性好等特點，可廣泛應用于谷氨酸脫羧酶抗體的臨床免疫檢驗和科學研究中；且試紙條制作方便，可批量生產；體積小，便于攜帶。
【專利說明】
-種人血清中谷氨酸脫錢酶抗體快速檢測試紙條
技術領域
[0001] 本實用新型屬于免疫層析檢測技術領域，具體設及一種人血清中谷氨酸脫簇酶抗 體快速檢測試紙條。
【背景技術】
[0002] 谷氨酸脫簇酶(GAD)抗體在I型糖尿病不同的發病階段均可持續高水平存在。與 ICA和IAA相比，GAD抗體與成人晚發自身免疫性糖尿病(LADA)關系更密切，在檢出成人晚發 自身免疫性糖尿病時價值更大。糖尿病發病時GAD抗體的狀態是預測其臨床過程的理想指 標，它可W將LADA與Π 型糖尿病區別開來，為正確分型提供確切的指標，從而更好地指導治 療。GAD抗體檢測作為理想工具適用于大規模人群中I型糖尿病高危人群的篩查，需要有一 種人血清中谷氨酸脫簇酶抗體快速檢測試紙條。 【實用新型內容】
[0003] 本實用新型的目的在于克服現有技術的不足之處，提供了一種人血清中谷氨酸脫 簇酶抗體快速檢測試紙條。
[0004] 本實用新型解決其技術問題所采用的技術方案是：
[0005] -種人血清中谷氨酸脫簇酶抗體檢測試紙條，包括背襯底板，該背襯底板上設置 有硝酸纖維素膜、樣品結合墊和吸水膜，該樣品結合墊和吸水膜分別疊壓在硝酸纖維素膜 的兩端上;該樣品結合墊上包被有標記物標記的GAD抗原和鼠 IgG，所述標記物為膠體金、有 色微球、巧光乳膠微球、時間分辨巧光乳膠納米微球、量子點中的一種;該硝酸纖維素膜上 設有檢測線和質控線，該檢測線包被有另一個表位的GAD抗原，該質控線包被有羊抗鼠 IgG。
[0006] -實施例中：所述巧光乳膠微球的巧光物質為直接巧光物質異硫氯酸巧光素、四 乙基羅丹明、四甲基異硫氯酸羅丹明、巧光素 C巧中的一種。
[0007] -實施例中:所述時間分辨巧光乳膠納米微球為銅系元素巧光乳膠納米微球。
[000引一實施例中:所述銅系元素為館，鋪，衫或鋪中的一種。
[0009] 一實施例中:所述樣品結合墊為玻璃纖維素膜或聚醋膜。
[0010] -實施例中：所述樣品結合墊為玻璃纖維素膜或聚醋膜經表面活性劑緩沖液浸泡 處理后干燥而得。
[0011] -實施例中:所述試紙條外還包裹有一殼體。
[0012] 本技術方案與【背景技術】相比，它具有如下優點：
[0013] 1.傳統的檢測試紙條分別設有樣品墊和結合墊，血清/血漿等樣品首先與樣品墊 接觸，樣品墊對樣品進行預處理，去除樣品中雜質顆粒，調節樣品液抑值或粘度等，減緩樣 品滲透速度，有利于樣品的均勻分布;經樣品墊預處理過后的均勻的樣品再流動至結合墊 上與標記抗體發生結合，才能夠保證反應的準確性，如果不經預處理，樣品在結合墊上的結 合量無法把握，且結合穩定性也差;而本實用新型采用一個樣品結合墊代替傳統的樣品墊 和結合墊，該樣品結合墊上準確而均勻地分布有標記抗體，既能保證樣品得到預處理，又能 保證樣品結合一定量的標記抗體，保證了反應的準確性，經檢測，靈敏度和特異性良好；同 時，也使得試紙條結構和制備過程得到簡化。
[0014] 2.本實用新型的人血清中谷氨酸脫簇酶抗體檢測試紙條，包被有標記物標記的 GAD抗原和鼠 IgG，所述標記物為膠體金、有色微球、巧光乳膠微球、時間分辨巧光乳膠納米 微球、量子點中的一種，上述標記物為巧光物質標記或有色物質標記，具有反應迅速、靈敏 度高、特異性強、易于辨別、穩定性好等特點，可廣泛應用于谷氨酸脫簇酶抗體的臨床免疫 檢驗和科學研究中。
[0015] 3.本實用新型的試紙條制作方便，可批量生產;體積小，便于攜帶。
【附圖說明】
[0016] 下面結合附圖和實施例對本實用新型作進一步說明。
[0017] 圖1為本實用新型的人血清中谷氨酸脫簇酶抗體檢測試紙條結構示意圖。
[0018] 附圖標記:樣品結合墊1;標記物標記的GAD抗原和鼠 IgG 2;硝酸纖維素膜3;檢測 線4;質控線5;吸水膜6;背襯底板7。
【具體實施方式】
[0019] 下面通過實施例具體說明本實用新型的內容：
[0020] 請查閱圖1，一種人血清中谷氨酸脫簇酶抗體檢測試紙條，包括背襯底板7，該背襯 底板7上設置有硝酸纖維素膜3、樣品結合墊1和吸水膜6,該樣品結合墊1和吸水膜6分別疊 壓在硝酸纖維素膜3的兩端上；該樣品結合墊1上包被有標記物標記的GAD抗原和鼠 IgG 2， 所述標記物為膠體金、有色微球、巧光乳膠微球、時間分辨巧光乳膠納米微球或量子點中的 一種;該硝酸纖維素膜3上設有檢測線4(Τ線)和質控線5(C線），檢測線4(Τ線)包被有另一個 表位的GAD抗原，質控線5(C線)包被有羊抗鼠 IgG。
[0021] 上述試紙條可W通過W下制備方法制備：
[0022] 1)硝酸纖維素膜(NC膜)處理
[0023] 將NC膜貼至背襯底板的制定位置，取TRIS緩沖液(5mM TRIS pH 7.8緩沖液)將另 一個表位的GAD抗原稀釋至Img/ml，用于制備T線；用0.05M的MES緩沖液將羊抗鼠 IgG抗體稀 釋至Img/ml，用于制備C線；按化1/cm劃液量，通過biodot劃膜儀將上述兩種稀釋后的GAD抗 原和羊抗鼠 IgG抗體均勻的劃至NC膜上制備T線和C線;將劃好的NC膜放置于37Γ干燥箱中， 干燥過夜。
[0024] 2)樣品結合墊的處理
[0025] 玻璃纖維素膜用含有表面活性劑的緩沖液(配方：100mMPB(pH7.4)，其中含有 1.5%NaCl，5%BSA、0.5%吐溫-20和5%薦糖)浸泡進行預封閉后，50°C干燥過夜;將標記物 標記的GAD抗原和相同標記物標記的鼠 IgG抗體按照1:1的比例充分混合后，用0.05M的MES 緩沖液按照1:10的比例稀釋，通過Biodot儀器的air jet噴頭按照ΙΟμΙ/cm的量超聲噴霧至 干燥好的玻璃纖維素膜上，5(TC干燥過夜，制備得到樣品結合墊。
[0026] 其中，根據需要，所述標記物可W為膠體金、有色微球、巧光乳膠微球、時間分辨巧 光乳膠納米微球或量子點中的一種;所述巧光乳膠微球的巧光物質可W為直接巧光物質異 硫氯酸巧光素、四乙基羅丹明、四甲基異硫氯酸羅丹明、巧光素切5中的一種;所述時間分辨 巧光乳膠納米微球為銅系元素的巧光乳膠納米微球;所述銅系元素為館，鋪，衫或鋪中的一 種;本實施例之中，所述標記物為有色微球。
[0027] 3)組裝
[0028] 將步驟2)得到的樣品結合墊固定疊壓在步驟1)得到的硝酸纖維素膜的一端，并將 吸水膜固定疊壓在硝酸纖維素膜的另一端，用裁膜儀按每條4mm的寬度進行裁剪，并裝入層 析條殼體中，即得成品。
[0029] 本實用新型的試紙條利用雙抗原夾屯、法進行檢測，方法如下：將樣品量取75化滴 加到樣品墊上，樣品中的GAD-Ab與樣品墊上標記物標記的抗原結合，形成抗體-標記抗原復 合物。經層析原理，液體中的抗體-標記抗原復合物和鼠 IgG依次與硝酸纖維素膜上的GAD抗 原(T線)和羊抗鼠抗體(C線）形成抗原-抗體-標記抗原復合物和抗原-標記抗體結合物。結 合有標記抗原的T線將會呈現顏色或巧光，顏色越深或巧光強度越強說明血清中的GAD-Ab 濃度越高。質控線表示此次層析過程有效。
[0030] 本實施例之中采用的標記物是有色微球，如果用的是藍色微球就會呈現藍色，用 的是紅色微球就會呈現紅色;若標記物為膠體金、巧光乳膠微球、時間分辨巧光乳膠納米微 球或量子點，其檢測原理與有色微球類似，若標記物為膠體金，也可通過顏色變化用肉眼直 接判斷;若標記物為巧光乳膠微球、時間分辨巧光乳膠納米微球或量子點，采用現有的巧光 分析儀器即可配套輔助閱讀。
[0031] 結果判定:用肉眼觀察，T線和C線同時顯色的樣本即為陽性樣本;T線未顯色而C線 顯色為陰性樣本;T線和C線均未顯色為無效檢測。
[0032] 實驗例：同已上市產品檢測試劑盒臨床血樣測值對比
[0033] 采用本實用新型的一種人血清中谷氨酸脫簇酶抗體檢測試紙條與已上市GAD-Ab 檢測試劑盒同時檢測45份I型糖尿病和35份II型糖尿病人標本，分別進行測試，比較結果如 表1和2所示，說明本實用新型的試紙條在45份I型糖尿病樣本中的檢測靈敏度為100%，特 異性為93.3% ;在35份II型糖尿病樣本中的檢測靈敏度為100%，特異性為100%。
[0034] 表1 I型糖尿病測試結果對比
[0035]
[0036] 表2 II型糖尿病測試結果對比
[0037]
[0038] W上所述，僅為本實用新型較佳實施例而已，故不能依此限定本實用新型實施的 范圍，即依本實用新型專利范圍及說明書內容所作的等效變化與修飾，皆應仍屬本實用新 型涵蓋的范圍內。
【主權項】
1. 一種人血清中谷氨酸脫羧酶抗體檢測試紙條，其特征在于:包括背襯底板，該背襯底 板上設置有硝酸纖維素膜、樣品結合墊和吸水膜，該樣品結合墊和吸水膜分別疊壓在硝酸 纖維素膜的兩端上;該樣品結合墊上包被有標記物標記的GAD抗原和鼠 IgG，所述標記物為 膠體金、有色微球、焚光乳膠微球、時間分辨焚光乳膠納米微球、量子點中的一種;該硝酸纖 維素膜上設有檢測線和質控線，該檢測線包被有另一個表位的GAD抗原，該質控線包被有羊 抗鼠 IgG。2. 根據權利要求1所述的一種人血清中谷氨酸脫羧酶抗體檢測試紙條，其特征在于:所 述熒光乳膠微球的熒光物質為直接熒光物質異硫氰酸熒光素、四乙基羅丹明、四甲基異硫 氰酸羅丹明、焚光素 Cy5中的一種。3. 根據權利要求1所述的一種人血清中谷氨酸脫羧酶抗體檢測試紙條，其特征在于:所 述時間分辨熒光乳膠納米微球為鑭系元素熒光乳膠納米微球。4. 根據權利要求3所述的一種人血清中谷氨酸脫羧酶抗體檢測試紙條，其特征在于:所 述鑭系元素為銪，鉞，釤或鏑中的一種。5. 根據權利要求1所述的一種人血清中谷氨酸脫羧酶抗體檢測試紙條，其特征在于:所 述樣品結合墊為玻璃纖維素膜或聚酯膜。6. 根據權利要求5所述的一種人血清中谷氨酸脫羧酶抗體檢測試紙條，其特征在于:所 述樣品結合墊為玻璃纖維素膜或聚酯膜經表面活性劑緩沖液浸泡處理后干燥而得。7. 根據權利要求1至6中任一項所述的一種人血清中谷氨酸脫羧酶抗體檢測試紙條，其 特征在于:所述試紙條外還包裹有一殼體。
【文檔編號】G01N33/58GK205484370SQ201521131186
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2015年12月30日
【發明人】許元峰, 袁新, 呂懷谷
【申請人】廈門依柯利斯醫療科技有限公司