一種葡萄酒中赭曲霉毒素a的檢測方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于食品檢測工藝，涉及一種葡萄酒中赭曲霉毒素A的檢測方法。
【背景技術】
[0002]葡萄酒是國際公認的健康飲品，是國民經濟發展中增長較快、最具活力的產業之一。近幾年來，國內葡萄酒市場消費年增長率持續保持較高水平，增長空間大。相比于進口葡萄酒，國產葡萄酒存在產品同質化、質量安全隱患大等缺陷，已嚴重影響到國內葡萄酒行業的健康發展。因此，提高葡萄酒生產水平、消除質量安全隱患是提高我國葡萄酒國際競爭力的主要策略，也是我國葡萄酒行業持續穩定發展的關鍵。
[0003]赭曲霉毒素主要是由曲霉屬(Aspergillus sp.)和青霉屬(Penicillium sp.)真菌產生的一類次級代謝產物，赭曲霉毒素A是其中最重要的一種。研究發現，赭曲霉毒素A具有腎毒性、肝毒性、基因毒性、致畸性、免疫毒性和胚胎毒性等特點，毒性僅次于黃曲霉毒素。赭曲霉毒素A在1993年已被國際癌癥研究機構劃為IIB類致癌物，大量研究證實赭曲霉毒素A廣泛存在于谷物、水果、咖啡和葡萄酒中，赭曲霉毒素A產生菌的污染已成為威脅葡萄、葡萄干、葡萄汁和葡萄酒等食用安全的重要因子。作為一種健康飲品，葡萄酒受到廣大消費者越來越多的青睞，而葡萄酒中赭曲霉毒素A的存在對消費者安全構成了重大威脅。為從根源上提升葡萄酒的質量安全，亟需建立一種葡萄酒中赭曲霉毒素A精確、高效和經濟的檢測方法，
【發明內容】
[0004]本發明所要解決的技術問題是提供一種葡萄酒中赭曲霉毒素A的檢測方法，旨在為食品中赭曲霉毒素A的形成來源及迀移轉化規律等研究奠定基礎，同時為相關檢測提供參考。
[0005]為解決上述問題，本發明提供了一種葡萄酒中赭曲霉毒素A的檢測方法，包括下述步驟:
[0006]I)將葡萄酒樣品添加到甲醇溶液中；
[0007]2)利用均質器，高速攪拌提取葡萄酒樣品中的赭曲霉毒素A;
[0008]3)攪拌提取后，離心得到上清液；
[0009]4)取上清液經玻璃微纖維濾紙過濾后，上樣免疫親和柱，收集洗脫液后用甲醇洗脫免疫親和柱，兩次洗脫液合并旋轉蒸發至干，以水復溶后過濾收集濾液。
[0010]5)采用液相色譜-四級桿靜電場軌道阱質譜法對于濾液中的赭曲霉毒素A含量進行檢測。
[0011]與現有技術相比，本發明的優點在于一種葡萄酒中赭曲霉毒素A的檢測方法，通過將葡萄酒樣品加入甲醇溶液，均質器高速攪拌提取，離心后得上清液，以免疫親和柱結合玻璃微纖維濾紙處理后，采用液相色譜-四級桿靜電場軌道阱質譜法檢測濾液中的赭曲霉毒素A含量。本檢測方法回收率高，檢出限低且前處理成本低，可作為一種相對準確、高效和經濟的葡萄酒中赭曲霉毒素A的檢測方法進行推廣。
【具體實施方式】
[0012]I)將葡萄酒樣品添加到甲醇溶液中，葡萄酒樣品占甲醇溶液的比例為1%，甲醇溶液中甲醇與水的體積分數為80: 20 ；
[0013]2)利用均質器，高速攪拌提取葡萄酒樣品中的赭曲霉毒素A，均質器運轉速度為8000r/min，攪拌提取時間為5min;
[OOM] 3)攪拌提取后進行離心，轉速3000r/min離心5min得到上清液；
[0015]4)取ImL離心上清液，經玻璃微纖維濾紙過濾后以2mL/min的速度上樣免疫親和柱，收集洗脫液后，取5mL甲醇以2mL/min的速度洗脫免疫親和柱，兩次洗脫液合并旋轉蒸發至干，加入ImL水復溶后，以0.45μπι微孔濾膜過濾，收集濾液；
[0016]5)采用液相色譜-四級桿靜電場軌道阱質譜法對于濾液中的赭曲霉毒素A含量進行檢測，離子源為電噴霧負離子模式，毛細管溫度為320 °C，霧化溫度為300 °C，鞘氣為40八4，輔助氣為1(^4，電壓為3800V。
【主權項】
1.一種葡萄酒中赭曲霉毒素A的檢測方法，包括如下步驟: 1)將葡萄酒樣品添加到甲醇溶液中； 2)利用均質器，高速攪拌提取葡萄酒樣品中的赭曲霉毒素A; 3)攪拌提取后，利用離心機離心得到上清液； 4)取上清液經玻璃微纖維濾紙過濾后，上樣免疫親和柱，收集洗脫液后用甲醇洗脫免疫親和柱，兩次洗脫液合并旋轉蒸發至干，以水復溶后過濾收集濾液。 5)采用液相色譜-四級桿靜電場軌道阱質譜法對于濾液中的赭曲霉毒素A含量進行檢測。2.根據權利要求1所述的一種葡萄酒中赭曲霉毒素A的檢測方法，其特征在于步驟I)中葡萄酒樣品占甲醇溶液的比例為1-2%，甲醇溶液中甲醇與水的體積分數為80:20。3.根據權利要求1所述的一種葡萄酒中赭曲霉毒素A的檢測方法，其特征在于步驟2)中均質器運轉速度為8000-10000r/min，攪拌提取時間為3-5min。4.根據權利要求1所述的一種葡萄酒中赭曲霉毒素A的檢測方法，其特征在于步驟3)中離心機離心時間為5_8min，轉速3000-4000r/min。5.根據權利要求1所述的一種葡萄酒中赭曲霉毒素A的檢測方法，其特征在于步驟4)中取ImL離心上清液，經玻璃微纖維濾紙過濾后以2-3mL/min的速度上樣免疫親和柱，收集洗脫液后取5mL甲醇以2-3mL/min的速度洗脫免疫親和柱，兩次洗脫液合并旋轉蒸發至干，加入ImL水復溶后，以0.45μπι微孔濾膜過濾，收集濾液。6.根據權利要求1所述的一種葡萄酒中赭曲霉毒素A的檢測方法，其特征在于步驟5)中，離子源為電噴霧負離子模式，毛細管溫度為3200C，霧化溫度為3000C，鞘氣為40Arb，輔助氣為1Arb，電壓為3800V。
【專利摘要】本發明公開一種葡萄酒中赭曲霉毒素A的檢測方法。其主要步驟包括取葡萄酒樣品加入甲醇溶液，均質器高速攪拌提取，離心后得上清液，以免疫親和柱結合玻璃微纖維濾紙處理后，采用液相色譜-四級桿靜電場軌道阱質譜法進行檢測。選擇免疫親和柱結合玻璃微纖維濾紙進行前處理，利用液相色譜-四級桿靜電場軌道阱質譜法對葡萄酒中的赭曲霉毒素A含量進行檢測，具有回收率高，檢出限低且前處理成本低的優點。
【IPC分類】G01N30/88
【公開號】CN105651915
【申請號】
【發明人】張鑫, 雷紀鋒, 吳祖芳, 翁佩芳
【申請人】寧波大學
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2015年12月24日