一種楊梅花色苷納米脂質體的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種楊梅花色苷納米脂質體的制備方法。
【背景技術】
[0002]脂質體系指將藥物包封于類脂質雙分子層內而形成的超微型球狀載體制劑，亦稱類脂小球或液晶微囊，結構為一層或多層同心脂質雙分子層。脂質體結構具有適合體內降解、無毒性和無免疫原性等特點，可以控制包埋藥物在體內穩定緩慢釋放。脂質體作為藥物載體應用十分廣泛。而納米脂質體是人們設計的較為理想的脂質體藥物載體。納米脂質體作為藥物載體，具有生物相容性好、對所載藥物有廣泛的重應性無毒，生物利用度高，不弓丨起免疫反應以及達到尋靶目的等優點。
[0003]楊梅花色苷(Anthocyanin)是一類廣泛存在于植物的花、果實和葉中的水溶性天然色素，其化學結構是花青素與糖類物質通過糖苷鍵結合而成。同時楊梅花色苷作為一種天然食用色素，具有安全、無毒、資源豐富等優點，且具有抗癌、抗炎、抗氧化、抗血栓、預防糖尿病、促進視紅細胞再生、減輕視覺疲勞、減輕肝功能障礙等多種生理活性。目前，楊梅花色苷類產品在實際應用中有如下的缺點:對光、氧化敏感，在體內釋放較快、光照等惡劣條件下極易被氧化，在非保護狀態下生物利用率不高等。針對以上楊梅花色苷在實際應用中的問題，有必要將楊梅花色苷進行包封并制成楊梅花色苷脂質體，以保護其不被外界因素所氧化，提高楊梅花色苷的穩定性和生物利用度，有利于儲存，可廣泛應用于食品、化妝品、保健品和藥品中。
【發明內容】
[0004]針對現有技術存在的問題，本發明的目的在于設計提供一種楊梅花色苷納米脂質體的制備方法的技術方案。
[0005]所述的一種楊梅花色苷納米脂質體的制備方法，其特征在于包括以下工藝步驟:
I)將大豆卵磷脂與膽固醇按質量比3-5:1的比例溶解在有機溶劑中得溶液A，其中，固液比(mg/ml)為4-9:1 ；
2)將楊梅花色苷溶解在溶劑中制成楊梅花色苷原液，其中，固液比(mg/ml)為1:10;
3)將楊梅花色苷原液用PH=7.4的磷酸鹽緩沖液溶解稀釋，得溶液B，其中，固液比(mg/ml)為1:100-120;
4)將A、B液按體積比1-2:1混合，先經磁力攪拌及水浴超聲儀超聲處理，再經磁力攪拌處理，使混合液變成澄清的單相，然后將混合液置于旋轉蒸發儀中減壓蒸發直至形成一層脂質薄膜；
5)向脂質薄膜中加入磷酸鹽緩沖溶液，溶解脂質薄膜，得溶液C;
6)將溶液C過濾膜，超聲，放4°C冰箱中保存，即得包封楊梅花色苷的脂質體。
[0006]所述的一種楊梅花色苷納米脂質體的制備方法，其特征在于所述的步驟I)中有機溶劑為乙醚與三氯甲烷的混合溶劑，所述乙醚與三氯甲烷的體積比為1-2:1。
[0007]所述的一種楊梅花色苷納米脂質體的制備方法，其特征在于所述的步驟I)中膽固醇為蛋白膽固醇、血清膽固醇、蛋黃膽固醇或膽囊膽固醇中的任一種。
[0008]所述的一種楊梅花色苷納米脂質體的制備方法，其特征在于所述的步驟2)中溶劑為無水乙醇、無水乙醚和氯仿中的至少一種。
[0009]所述的一種楊梅花色苷納米脂質體的制備方法，其特征在于所述的步驟3)中磷酸鹽緩沖溶液由0.2mol/L的Na2HPO4溶液與0.2mol/L的NaH2PO4溶液按體積比0.1-0.3:1混合得到。
[0010]所述的一種楊梅花色苷納米脂質體的制備方法，其特征在于所述的步驟4)中先經磁力攪拌時間為40-50分鐘，水浴超聲儀在功率10Hz的條件下，超聲5-8分鐘，再經磁力攪拌時間為3-8分鐘，轉速30-40r/min。
[0011]所述的一種楊梅花色苷納米脂質體的制備方法，其特征在于所述的步驟4)中減壓蒸發真空度為0.06-0.1Mpa0
[0012]所述的一種楊梅花色苷納米脂質體的制備方法，其特征在于所述的步驟6)中濾膜孔徑為450nm和220nm，超聲時間為5-10分鐘。
[0013]通過采用逆向蒸發法制備楊梅花色苷脂質體，并采用水浴超聲儀進行超聲處理，直至為穩定的體系，該方法可顯著提高楊梅花色苷脂質體的穩定性，有效保護楊梅花色苷不被惡劣的條件所氧化，提高楊梅花色苷的穩定性。通過調整確定了脂質成分及緩沖液的比例，經過磁力攪拌、超聲及旋轉蒸發等工藝步驟，可有效的控制脂質體的粒徑，提高包封率;本發明楊梅花色苷脂質體開拓了脂質體的應用范圍，運用脂質體作為載體包埋楊梅花色苷，其制備工藝簡單，設備要求較低，便于推廣應用，可產業化生產。
【附圖說明】
[0014]圖1為納米脂質體粒徑分布圖。
【具體實施方式】
[0015]以下結合實施例來進一步說明本發明。
[0016]實施例1
將I 1mg大豆卵磷脂和36mg膽固醇(蛋白膽固醇、血清膽固醇、蛋黃膽固醇或膽囊膽固醇中的任一種)溶于含有I Oml三氯甲烷和8ml乙醚的混合溶液中得A液，將5mg楊梅花色苷溶于50ml乙醇制備成原液，取Iml原液用磷酸鹽緩沖液稀釋至1ml制成樣液，取9ml樣液作為B液，將A液和B液按體積比1:1混合，先磁力攪拌40min，然后在水浴超聲儀頻率為10Hz的條件下超聲I Omin，再磁力攪拌5min，使混合液變成澄清的單相;在40°C的水浴，0.08Mpa的真空壓下，轉速30r/min下將混合溶液旋轉蒸發直至形成一層脂質薄膜；向脂質薄膜中加入30ml磷酸鹽緩沖溶液，溶解脂質薄膜，得溶液C;將溶液C分別過450nm，220nm濾膜，濾液超聲5min，置于4°C冰箱保存，即得包封楊梅花色苷的脂質體。
[0017]磷酸鹽緩沖液的配置:
0.2mol/L的Na2HPO4溶液:稱取磷酸氫二鈉71.64g，加蒸餾水溶解并定容到100ml。
[0018]0.2mo I/L的NaH2PO4溶液:稱取磷酸二氫鈉31.21g，加蒸餾水溶解并定容到100ml。
[0019]將上述兩溶液分別裝在棕色瓶內，于4°C冰箱中保存，用時兩溶液各按不同比例混合，即可得到所需pH的緩沖液。
[0020]將0.2mol/L的Na2HPO4溶液、0.2mol/L的NaH2PO4溶液按0.1-0.3:1體積混合，即得至IJpH為7.4的磷酸鹽緩沖液。
[0021]實施例2
將10mg大豆卵磷脂和25mg膽固醇溶于含有1ml三氯甲烷和8ml乙醚的混合溶液中得A液，將5mg楊梅花色苷溶于50ml乙醇制備成原液，取Iml原液用磷酸鹽緩沖液稀釋至1ml制成樣液，取9ml樣液作為B液，將A液和B液按體積比2:1混合，先磁力攪拌50min，然后在水浴超聲儀頻率為10Hz的條件下超聲1min，再磁力攪拌8min，使混合液變成澄清的單相;在40°〇的水浴，0.08Mpa的真空壓下，轉速30r/min下將混合溶液旋轉蒸發直至形成一層脂質薄膜；向脂質薄膜中加入30ml磷酸鹽緩沖溶液，溶解脂質薄膜，得溶液C;將溶液C過過450nm，220nm濾膜，濾液超聲5min，置于4°C冰箱保存，即得包封楊梅花色苷的脂質體。
[0022]磷酸鹽緩沖液的配置同實例I。
[0023]實施例3
將60mg大豆卵磷脂和20mg膽固醇溶于含有1ml三氯甲烷和8ml乙醚的混合溶液中得A液，將5mg楊梅花色苷溶于50ml乙醚制備成原液，取Iml原液用磷酸鹽緩沖液稀釋至1ml制成樣液，取9ml樣液作為B液，將A液和B液按體積比I: I混合，先磁力攪拌40min，然后在水浴超聲儀頻率為10Hz的條件下超聲1min，再磁力攪拌5min，使混合液變成澄清的單相;在40°〇的水浴，0.08Mpa的真空壓下，轉速40r/min下將混合溶液旋轉蒸發直至形成一層脂質薄膜；向脂質薄膜中加入30ml磷酸鹽緩沖溶液，溶解脂質薄膜，得溶液C;將溶液C過450nm，220nm濾膜，濾液超聲lOmin，置于4°C冰箱保存，即得包封楊梅花色苷的脂質體。
[0024]磷酸鹽緩沖液的配置同實例I。
[0025]實施例4
對實施例1得到的包封楊梅花色苷的脂質體進行檢測，其包封率為58.3%。
[0026]物理穩定性:
制作完成的脂質體分別在每隔一天測定粒徑及分布系數，研究其物理穩定性，得出結果:
1.粒徑變化范圍(如圖1所示):l-30nm
2.分布系數變化范圍:0.04-0.1
表明粒徑變化不大，分布系數變化幅度較小，顯示所制作的納米脂質體發生聚沉的效果不明顯，經長期儲藏后仍可保持其納米性能。
【主權項】
1.一種楊梅花色苷納米脂質體的制備方法，其特征在于包括以下工藝步驟: I)將大豆卵磷脂與膽固醇按質量比3-5:1的比例溶解在有機溶劑中得溶液A，其中，固液比(mg/ml)為4-9:1 ； 2)將楊梅花色苷溶解在溶劑中制成楊梅花色苷原液，其中，固液比(mg/ml)為1:10； 3)將楊梅花色苷原液用PH=7.4的磷酸鹽緩沖液溶解稀釋，得溶液B，其中，固液比(mg/ml)為1:100-120; 4)將A、B液按體積比1-2:1混合，先經磁力攪拌及水浴超聲儀超聲處理，再經磁力攪拌處理，使混合液變成澄清的單相，然后將混合液置于旋轉蒸發儀中減壓蒸發直至形成一層脂質薄膜； 5 )向脂質薄膜中加入磷酸鹽緩沖溶液，溶解脂質薄膜，得溶液C; 6)將溶液C過濾膜，超聲，放4°C冰箱中保存，即得包封楊梅花色苷的脂質體。2.如權利要求1所述的一種楊梅花色苷納米脂質體的制備方法，其特征在于所述的步驟I)中有機溶劑為乙醚與三氯甲烷的混合溶劑，所述乙醚與三氯甲烷的體積比為1-2:1。3.如權利要求1所述的一種楊梅花色苷納米脂質體的制備方法，其特征在于所述的步驟I)中膽固醇為蛋白膽固醇、血清膽固醇、蛋黃膽固醇或膽囊膽固醇中的任一種。4.如權利要求1所述的一種楊梅花色苷納米脂質體的制備方法，其特征在于所述的步驟2)中溶劑為無水乙醇、無水乙醚和氯仿中的至少一種。5.如權利要求1所述的一種楊梅花色苷納米脂質體的制備方法，其特征在于所述的步驟3)中磷酸鹽緩沖溶液由0.2mo VL的Na2HPO4溶液與0.2mol/L的NaH2PO4溶液按體積比0.1-0.3:1混合得到。6.如權利要求1所述的一種楊梅花色苷納米脂質體的制備方法，其特征在于所述的步驟4)中先經磁力攪拌時間為40-50分鐘，水浴超聲儀在功率10Hz的條件下，超聲5-8分鐘，再經磁力攪拌時間為3-8分鐘，轉速30-40r/min。7.如權利要求1所述的一種楊梅花色苷納米脂質體的制備方法，其特征在于所述的步驟4)中減壓蒸發真空度為0.06-0.1Mpa。8.如權利要求1所述的一種楊梅花色苷納米脂質體的制備方法，其特征在于所述的步驟6)中濾膜孔徑為450nm和220nm，超聲時間為5-10分鐘。
【專利摘要】一種楊梅花色苷納米脂質體的制備方法，屬于生物技術領域。其包括以下工藝步驟：將大豆卵磷脂與膽固醇溶解在有機溶劑中得溶液A；將楊梅花色苷溶解在溶劑中制成楊梅花色苷原液；將楊梅花色苷原液用磷酸鹽緩沖液溶解稀釋得溶液B；將A、B液混合，先經磁力攪拌及水浴超聲儀超聲處理，再經磁力攪拌處理，使混合液變成澄清的單相，然后將混合液置于旋轉蒸發儀中減壓蒸發直至形成一層脂質薄膜；向脂質薄膜中加入磷酸鹽緩沖溶液，溶解脂質薄膜，得溶液C；將溶液C過濾膜，超聲，放4℃冰箱中保存。本發明楊梅花色苷脂質體開拓了脂質體的應用范圍，運用脂質體作為載體包埋楊梅花色苷，其制備工藝簡單，設備要求較低，便于推廣應用，可產業化生產。
【IPC分類】A61P39/06, A61P35/00, A61P29/00, A61K9/127, A61K8/60, A61P27/02, A61P3/10, A61P1/16, A61Q19/00, A61P7/02, A23L33/12, A61K31/7048
【公開號】CN105639654
【申請號】
【發明人】關榮發, 梁提松, 趙進, 吳知盼, 王彥波, 呂飛, 劉明啟
【申請人】中國計量學院
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2016年1月27日