一種a/b族鏈球菌膠體金免疫層析檢測裝置的制造方法
【專利摘要】本實用新型提供一種A/B族鏈球菌膠體金免疫層析檢測裝置。該檢測裝置能夠用于膠體金免疫層析法檢測樣品中的A/B族鏈球菌。本實用新型提供的檢測裝置包括檢測試紙和盒體(7)；檢測試紙包括從左到右依次連接并設置在底基(1)上的樣品墊(2)、結合物墊(3)、包被膜(4)和吸水墊(5)，所述的吸水墊(5)上設有標簽識別貼(6)；盒體包括加樣孔(10)、標簽觀察窗口(8)和結果觀察窗口(9)，所述的加樣孔(10)設有與其相配套的加樣孔防污蓋(11)。本實用新型旨在提供一種準確、快速、易于區分檢測項目名稱的檢測裝置，提高了臨床檢測效率，便于臨床檢測的流程化管理的。
【專利說明】
一種A/B族鏈球菌膠體金免疫層析檢測裝置
技術領域
[0001]本實用新型涉及膠體金免疫檢測領域，具體而言，涉及一種A/B族鏈球菌膠體金免疫層析檢測裝置。
【背景技術】
[0002]A族鏈球菌是在世界范圍內普遍存在的以人類為主要生物學宿主的細菌性病原體。在臨床上推廣使用A族溶血性鏈球菌快速檢測產品快速篩選病原體，對于臨床治療上合理使用抗生素、避免抗生素濫用等具有非常重要的意義。B族鏈球菌可引起新生兒敗血癥、肺炎、腦膜炎，甚至死亡。感染后存活的新生兒，還有可能有嚴重的神經系統后遺癥，包括腦積水、智力障礙、小頭畸形、耳聾等。因此，對孕婦B族鏈球菌的檢測非常重要和必須。
[0003]膠體金免疫層析法是一種快速、簡便、靈敏、直觀，并可進行現場檢測的方法，而且有實驗結果表明，膠體金檢測的敏感性正逐步接近和達到ELISA的水平。
[0004]目前依據膠體金免疫層析法原理快速檢測A/B族鏈球菌的試紙條被廣泛應用于臨床中。現有的檢測裝置通常將檢測項目名稱置于外包裝盒上。在臨床檢測中，除去外包裝盒的試紙條則不便于識別檢測項目的類型，造成檢測結果難以被快速、準確的分類和記錄。同時現有的檢測裝置中即便包含具有保護試紙條不被污損的功能的盒體，但該類盒體的檢測項目名稱通常置于盒體表面，造成檢測項目名稱遮擋檢測結果或需翻轉盒體后才能查看的情況，不利于臨床檢測的流程化管理。該種位置的檢測項目名稱也易被污損，導致檢測裝置作廢，造成浪費。
[0005]因此，本領域迫切需要提供一種在臨床中能夠實現快速、準確地檢測A/B族鏈球菌并分類記錄的檢測裝置，便于臨床檢測的流程化管理，以滿足臨床檢測的需要，實現即時床邊檢測需求。
【實用新型內容】
[0006]有鑒于此，本實用新型提供了一種A/B族鏈球菌膠體金免疫層析檢測裝置，所述的檢測裝置包括盒體，以及位于盒體內的檢測試紙;所述的檢測試紙包括底基、以及從左到右依次連接并設置在所述底基上的樣品墊、結合物墊、包被膜和吸水墊;所述的檢測試紙的結合物墊上含有膠體金抗A/B族鏈球菌單克隆抗體交聯物;所述的檢測試紙的包被膜上從左到右依次設有一道檢測線T和一道質控線C;所述的檢測線T包被有固相化的抗A/B族鏈球菌單克隆抗體，所述的質控線C包被有固相化羊抗鼠多克隆抗體，所述的吸水墊上設有標簽識另IJ貼;所述的盒體開設有用于向所述樣品墊添加樣品液的加樣孔、用于觀察所述包被膜的結果觀察窗口和用于觀察所述標簽識別貼的標簽觀察窗口。
[0007]在某些實施方式中，所述的樣品墊右端具有搭接在所述的結合物墊上的樣品搭接部，所述的結合物墊右端具有搭接在所述包被膜上的結合物搭接部，所述的吸水墊左端具有搭接在包被膜上的吸水搭接部。
[0008]在某些實施方式中，所述的樣品搭接部在其延伸方向上與所述的結合物搭接部留有間距。
[0009]在某些實施方式中，所述的檢測試紙的樣品墊是由玻璃纖維、聚酯膜、纖維素濾紙或無紡布制成的樣品墊。
[0010]在某些實施方式中，所述的檢測試紙的結合物墊是由聚酯纖維素膜或玻璃纖維膜制成的結合物墊。
[0011]在某些實施方式中，所述的檢測試紙的包被膜由硝酸纖維素膜制成的包被膜。
[0012]在某些實施方式中，所述的A/B族鏈球菌膠體金免疫層析檢測裝置進一步包括一種或多種選自下組的組成部分:用于固定所述檢測試紙的固定底座、上蓋、干燥劑、滴管、說明書、顏色標簽、樣品收集管、和樣品稀釋液。
[0013]在某些實施方式中，所述的加樣孔設有與其相配套的加樣孔防污蓋并用于打開和閉合加樣孔。
[0014]在某些實施方式中，所述的加樣孔防污蓋以可拆卸的方式與盒體連接，以打開和蓋合加樣孔。
[0015]與現有技術相比，采用本實用新型提供的A/B族鏈球菌膠體金免疫層析檢測裝置，能夠利用膠體金免疫層析法對A/B族鏈球菌進行快速的檢測，同時通過吸水墊上設置的標簽識別貼和盒體上的標簽觀察窗口，避免了檢測項目名稱置于盒體表面時出現的遮擋檢測結果以及污損而不能辨認的情況，實現了準確、快速區分檢測項目的目的，提高了臨床檢測效率，便于臨床檢測的流程化管理。
[0016]進一步的通過設置加樣孔防污蓋，避免了現有裝置中檢測試紙從開放的加樣孔處污染的情況，完善了盒體對于檢測試紙的保護功能。
[0017]由此可以看出，與現有檢測裝置相比，以上改進能夠有效的節約檢測流程所需要的時間、減少臨床檢測中由于檢測試紙污染而造成的浪費。
【附圖說明】
[0018]圖1是本實用新型提供的檢測裝置結構示意圖；
[0019]圖2是本實用新型提供的檢測裝置的盒蓋俯視圖；
[0020]圖3是本實用新型提供的檢測試紙結構示意圖；
[0021 ]圖4是本實用新型提供的檢測試紙判定結果為陽性時俯視圖；
[0022]圖5是本實用新型提供的檢測試紙判定結果為陰性時示意圖；
[0023]圖6是本實用新型提供的檢測試紙判定結果為無效時示意圖。
[0024]其中:底板I，樣品墊2，結合物墊3，包被膜4，吸水墊5，檢測線T，質控線C，標簽識別貝占6，盒體7，標簽觀察窗口 8，結果觀察窗口 9，加樣孔10，加樣孔防污蓋11。
【具體實施方式】
[0025]下面結合具體實施例的方式對本實用新型的權利要求做進一步的詳細說明，但并不構成對本實用新型的任何限制，任何人在本實用新型權利要求范圍內所做的有限次的修改，仍在本實用新型的權利要求范圍之內。
[0026]為了便于理解本實用新型，下面合實施例來進一步說明本實用新型的技術方案。
[0027]實施例1
[0028]從圖1至圖2可見，本實用新型的A/B族鏈球菌膠體金免疫層析檢測裝置，包括盒體7，以及位于盒體內的檢測試紙，所述的檢測試紙包括底基1、以及從左到右依次連接并設置在所述底基I上的樣品墊2、結合物墊3、包被膜4和吸水墊5;所述的檢測試紙的結合物墊3上含有膠體金抗A/B族鏈球菌單克隆抗體交聯物;所述的檢測試紙的包被膜4上從左到右依次設有一道檢測線T和一道質控線C;所述的檢測線T包被有固相化的抗A/B族鏈球菌單克隆抗體，所述的質控線C包被有固相化羊抗鼠多克隆抗體;所述的吸水墊5上設有標簽識別貼6;所述的盒體7開設有用于向所述樣品墊2添加樣品液的加樣孔10、用于觀察所述包被膜4的結果觀察窗口 9和用于觀察所述標簽識別貼6的標簽觀察窗口 8。
[0029]應當理解的是，實施方式中，通過開設在盒體7上的標簽觀察窗口8能夠觀察到位于吸水墊5上的標簽識別貼6，從而獲得了對檢測裝置的檢測項目依據名稱進行準確分類、快速記錄檢測結果的效果，起到了快速、準確檢測A族鏈球菌或B族鏈球菌的目的。
[0030]進一步的所述的樣品墊2右端具有搭接在所述的結合物墊3上的樣品搭接部，所述的結合物墊3右端具有搭接在所述包被膜4上的結合物搭接部，所述的吸水墊5左端具有搭接在包被膜4上的吸水搭接部。
[0031]“搭接”是指，相鄰的兩個組件的首尾部分重疊，并且在重疊處形成可以允許液體樣品移動的連接結構。例如，可以在相鄰的兩個組件的首尾部分通過按壓操作形成較為緊密的重疊結構，使得樣品能夠從上游組件的尾部通過該重疊結構移動至下游組件上。上游組件可以重疊在下游組件的上方，也可以重疊在下方。在檢測時，可以將液體狀態的樣品(如血液，血漿以及其他體液稀釋液等)加樣到樣品墊2上，該液態狀態的樣品可以通過吸水作用，沿著樣品墊2向與之搭接的結合物墊3移動，接觸到結合物墊3后再沿著結合物墊3向與之搭接的包被膜4移動，接觸到包被膜4之后再沿著包被膜4向與之搭接的吸水墊5移動。
[0032]這樣的移動通常稱為層析作用，由此可知，進一步的，所述的樣品搭接部在其延伸方向上與所述的結合物搭接部留有間距，可以使得結合物墊上膠體金標記后特異性抗體能夠與樣品中的待測抗原留有充分的結合時間，如待測樣品中存在所要檢測的特異性抗原，則可以在含有膠體金標記后特異性抗體的結合物墊處形成抗原一抗體一膠體金復合物;所述的結合物搭接部在其延伸方向上與所述的吸水搭接部留有間距，預留充分的結合時間以便上述抗原一抗體一膠體金復合物于包被膜上形成抗體一抗原一抗體一膠體金復合物，即發生雙抗夾心的特異性結合。
[0033]在該實施例中，所述的檢測線T和所述的質控線C平行設置。
[0034]樣品加到樣品墊2上后，其中的物質通過層析作用，依次移動到結合物墊3和包被膜4上。當樣品移動到結合物墊3時，其中的待檢測抗體，如人抗體，可與結合物墊3上包被的金屬膠體標記的特異性抗體相結合，然后含有從結物合墊3上結合或混合的物質的樣品繼續移動到包被膜4上，并與包被膜4上包被的特異性抗體相結合并且被截留，從而使得樣品中的被檢物質得以被檢測。應該理解的是特異性抗體經包被液包被于包被膜4上，即檢測線T;質控線C通常為包被液包被與包被膜4上的羊抗鼠多克隆抗體或羊抗兔多克隆抗體。檢測線T與質控線C之間應留有適當間距，而設置為相互平行的區域，更便于區分兩者。
[0035]所述的檢測試紙的樣品墊2可以是由聚酯膜、纖維素濾紙或無紡布制成的樣品墊，優選玻璃纖維樣品墊;玻璃纖維相對于其他材料脫水性好、不黏連樣品。
[0036]所述的包被膜4優選硝酸纖維素膜制成的包被膜，硝酸纖維素膜的蛋白固定能力優于其他材料制成的包被膜，能夠更好的固化包被在其上的蛋白質，即本實用新型中涉及的A/B鏈球菌單克隆抗體和羊抗鼠多克隆抗體。
[0037]所述的結合物墊3可由玻璃纖維膜制成，優選地由聚酯纖維素膜制成，聚酯纖維素膜與膠體金的親和力優于其他材料制成的結合物墊，防止膠體金發生聚集或形成沉淀。
[0038]所述的檢測試紙的底基I優選地由PVC板制成的底基，PVC板易于獲得，較為便宜，并且具有很好的穩定性，并易于固定上述材料。
[0039]該實施方式中所述的A/B族鏈球菌膠體金免疫層析檢測裝置進一步包括一種或多種選自下組的組成部分:用于固定所述檢測試紙的固定底座、盒體的上蓋、干燥劑、滴管、說明書、顏色標簽、樣品收集管、和樣品稀釋液。以上組成部分均為檢測裝置使用時或保存時的常用物品，便于操作，可與檢測裝置組合成便于臨床操作的檢測套裝。
[0040]該實施例中還提供了與所述的盒體7還包括與加樣孔10相配套的加樣孔防污蓋11用于打開和閉合加樣孔10，從而起到防止污染物進入加樣孔10的作用。加樣孔防污蓋11可以存在多種形式，如:與加樣孔10尺寸、形狀相匹配的薄蓋，該薄蓋可以相對于加樣孔10左右滑動，從而打開和閉合加樣孔10;也可以以可拆卸的方式與盒體7相連，不易脫落丟失。
[0041]本申請還提供了該A/B族鏈球菌膠體金免疫層析檢測裝置的檢測方法:
[0042]I)確認檢測項目名稱后用移液槍吸取大約100微升樣品液由加樣孔10加樣到樣品墊2;
[0043]2)樣品液通過吸水墊5的吸水作用，沿著樣品墊2向與之搭接的結合物墊3移動，
[0044]若樣品液中含有A/B族鏈球菌，該A/B族鏈球菌可與結合物墊3上膠體金抗A/B族鏈球菌單克隆抗體交聯物結合形成A/B族鏈球菌一抗A/B族鏈球菌單克隆抗體一膠體金復合物，含有所述復合物的樣品液繼續移動至包被膜4上，并與包被膜4上檢測線T處包被的抗A/B族鏈球菌單克隆抗體結合，形成抗A/B族鏈球菌單克隆抗體一 A/B族鏈球菌一抗A/B族鏈球菌單克隆抗體一膠體金復合物，檢測線T出現紅色條帶，質控線C處也出現紅色條帶，檢測結果為陽性；
[0045]若樣品液中不存在A/B族鏈球菌，檢測線T則無紅色條帶出現，只有質控線C處出現紅色條帶，檢測結果為陰性；
[0046]若檢測線T和質控線C均未出現紅色條帶，則代表操作有誤或檢測結果無效，需重復試驗。
[0047]結果判斷:加樣10分鐘后，觀察結果窗口9，參閱圖4，當質控線C和檢測線T都有紅色條帶出現時說明樣品中含有能夠與檢測蛋白特異性結合的抗體，A/B族鏈球菌為陽性；
[0048]參閱圖5，當只有質控線C有紅色條帶而檢測線T無紅色條帶時，說明樣品中A/B族鏈球菌為陰性。
[0049]參閱圖6當質控線C和檢測線T均未出現紅色條帶，則代表操作有誤或檢測結果無效，需重復試驗。
[0050]該檢測方法可用于孕婦或兒童A/B族鏈球菌的早期篩查。
[0051]此外，本申請還提供了A/B族鏈球菌膠體金免疫層析檢測試裝置中檢測試紙的制備方法:檢測試紙包括底基1、以及從左到右依次連接并設置在所述底基I上的樣品墊2、結合物墊3、包被膜4和吸水墊5;所述的檢測試紙的結合物墊3上含有膠體金抗A/B族鏈球菌單克隆抗體交聯物;所述的檢測試紙的包被膜4上從左到右依次設有一道檢測線T和一道質控線C;所述的檢測線T包被有固相化的抗A/B族鏈球菌單克隆抗體，所述的質控線C包被有固相化羊抗鼠多克隆抗體，所述的吸水墊5上設有標簽識別貼6;
[0052]其中:
[0053]I)樣品墊2的制備方法是:將樣品墊2裁成20mmX 300mm的大小，浸泡在樣品墊緩沖液中，I小時之后取出，于室溫干燥16-18小時。
[0054]樣品墊2的緩沖液配方如下:2 % BSA、I % PVP、0.5 % Twe en溶解于0.0I的PBS(PH7.4)緩沖液中。
[0055]2)結合物墊3的制備方法:
[0056]①膠體金溶液的配制:將濃度為lmg/ml氯金酸溶液950ml加熱煮沸5?10分鐘，加入濃度為100mg/ml的檸檬酸三鈉溶液50ml，混勻，繼續加熱5?10分鐘，直至溶液變透明玫瑰紅色為止。加純化水補足體積至1000ml。
[0057]②抗A/B族鏈球菌抗體金標液的配制:取上述膠體金溶液300ml，加入0.1M K2CO3置于室溫攪拌，調節溶液的pH值至8.0;取抗A/B族鏈球菌單克隆抗體6mg，加入濃度為0.015M體積為20mlPBS緩沖溶液中混勻后加入攪拌中的膠體金溶液中；將上述混合溶液室溫下攪拌2小時；攪拌結束后加入3%聚乙二醇20000溶液160ml，混勻；室溫下以13000轉/分鐘，離心30分鐘分離上述溶液;離心結束后棄去上清液，取沉淀，將該沉淀溶解于10ml的金標抗體保存液中。
[0058]③將上述抗A/B族鏈球菌單克隆抗體金標液用金標抗體保存液稀釋后，鋪于結合物墊3上，置于溫度為37°C的干燥間內干燥4?6小時;干燥后的金標結合物墊3同干燥劑一同放入密封袋，置玻璃干燥器中保存備用。
[0059]3)包被膜4的制備方法:
[0060]①包被
[0061 ]包被液的制備:取硼酸12g，氫氧化鈉2g溶于純化水并定容至1000ml。
[0062]檢測線T:在包被膜4上劃線，在膜的一端用記號筆做好質控線C和檢測線T的標記，質控線C和檢測線T的距離為0.5cm，檢測線T與包被膜4下緣的距離為lcm，用上述包被液將抗A/B族鏈球菌單克隆抗體稀釋到1.2mg/mL進行包被，劃線濃度為IyL/cm，速度10mm/s。
[0063]質控線C:上述包被液將羊抗鼠多克隆抗體稀釋到1.2mg/mL進行包被，劃線濃度為IyL/cm，速度 I OOmm/s。
[0064]②干燥
[0065]置于37°C干燥間內4?6小時；干燥完畢后將包被膜4與干燥劑一同放入密封袋置于玻璃干燥器中保存備用。
[0066]另外，A/B族鏈球菌膠體金免疫層析檢測裝置中檢測試紙的組裝方法如下:
[0067]①利用裁切機裁切樣品墊2、結合物墊3和吸水墊5，裁切后的樣品墊2寬度為10_，長度為58mm;裁切后的結合物3墊寬度為7mm，長度為58mm;裁切后的吸水墊5寬度為10mm，長度為58mm。
[0068]②將寬度為1mm的吸水墊貼5裝于PVC底基I上，并且使其下端與包被膜4疊壓2mm，然后撕去結合物墊3下端保護膜，將寬度7mm的結合物墊3與包被膜4疊壓2mm，進一步在結合物墊3下方粘貼寬度1mm的樣品墊2;粘貼時需要將吸水紙、結合物墊3、樣品墊2均勻、輕微滾動式推進，以加強粘合力，并防止產生氣泡。
[0069]③取出粘貼好的檢測試紙置于切板機上，切成寬度為2mm，然后在鋁箔袋中放入一包Ig的干燥劑和裁切好的檢測試紙，在封口機上將鋁箔袋熱合封口。
[0070]本實驗新型實施例中，檢測裝置還可含有未圖示的滴管、干燥劑、說明書、顏色標簽、樣品收集管、和樣品稀釋液。
[0071]前述，本實驗新型提供的A/B鏈球菌檢測裝置還包括I號抽提液和2號抽提液。所述的抽提液為細胞抽提液，用于裂解采集到的樣品中細胞，并將細胞內的蛋白溶解于細胞抽提液中。具體過程:在試管中依次加入5滴I號和2號抽提液，用無菌棉拭子挑取部分樣品放入已加入上述抽提液的試管中，在室溫下靜置2分鐘，通過反復將無菌棉拭子的拭子頭于上述試管壁上擠壓，旋轉，盡可能多的獲得樣品抽提物。承裝所述的I號抽提液和2號抽提液的試劑瓶由PVC制成。
[0072]其中:I號抽提液制備過程:稱取亞硝酸鈉138.75g加入純化水1000ml。
[0073]2號抽提液制備:量取冰醋酸57.44ml加純化水至1000m。
[0074]本申請中提供的檢測裝置使用膠體金免疫層析法，利用位于吸水墊5上的標簽識另IJ貼6和盒體7開設的標簽觀察窗口8相配合，提高了臨床檢測的效率，同時避免了由于標識不明，造成的檢測裝置的浪費。
【主權項】
1.一種A/B族鏈球菌膠體金免疫層析檢測裝置，所述的檢測裝置包括盒體(7)，以及位于盒體(7)內的檢測試紙，其特征在于: 所述的檢測試紙包括底基(I )、以及從左到右依次連接并設置在所述底基(I)上的樣品墊(2)、結合物墊(3)、包被膜(4)和吸水墊(5);所述的檢測試紙的結合物墊(3)上含有膠體金抗A/B族鏈球菌單克隆抗體交聯物;所述的檢測試紙的包被膜(4)上從左到右依次設有一道檢測線(T)和一道質控線(C);所述的檢測線(T)包被有固相化的抗A/B族鏈球菌單克隆抗體，所述的質控線(C)包被有固相化羊抗鼠多克隆抗體，所述的吸水墊(5)上設有標簽識別貼(6); 所述的盒體(7)開設有用于向所述樣品墊(2)添加樣品液的加樣孔(10)、用于觀察所述包被膜(4)的結果觀察窗口(9)和用于觀察所述標簽識別貼(6)的標簽觀察窗口(8)。2.如權利要求1所述的A/B族鏈球菌膠體金免疫層析檢測裝置，其特征在于:所述的樣品墊(2)右端具有搭接在所述的結合物墊(3)上的樣品搭接部，所述的結合物墊(3)右端具有搭接在所述包被膜(4)上的結合物搭接部，所述的吸水墊(5)左端具有搭接在包被膜(4)上的吸水搭接部。3.如權利要求2所述的A/B族鏈球菌膠體金免疫層析檢測裝置，其特征在于:所述的樣品搭接部在其延伸方向上與所述的結合物搭接部留有間距。4.如權利要求1所述的A/B族鏈球菌膠體金免疫層析檢測裝置，其特征在于:所述的檢測線(T)和所述的質控線(C)平行設置。5.如權利要求1所述的A/B族鏈球菌膠體金免疫層析檢測裝置，其特征在于:所述的檢測試紙的樣品墊(2)是由玻璃纖維、聚酯膜、纖維素濾紙或無紡布制成的樣品墊(2)。6.如權利要求1所述的A/B族鏈球菌膠體金免疫層析檢測裝置，其特征在于:所述的檢測試紙的結合物墊(3)是由聚酯纖維素膜或玻璃纖維膜制成的結合物墊(3)。7.如權利要求1所述的A/B族鏈球菌膠體金免疫層析檢測裝置，其特征在于:所述的檢測試紙的包被膜(4)由硝酸纖維素膜制成的包被膜(4)。8.如權利要求1所述的A/B族鏈球菌膠體金免疫層析檢測裝置，其特征是進一步包括一種或多種選自下組的組成部分:用于固定所述檢測試紙的固定底座、上蓋、干燥劑、滴管、說明書、顏色標簽、樣品收集管、和樣品稀釋液。9.如權利要求1所述的A/B族鏈球菌膠體金免疫層析檢測裝置，其特征在于:所述的加樣孔(10)設有與其相配套的加樣孔防污蓋(11)并用于打開和閉合加樣孔(10)。10.如權利要求1或9所述的A/B族鏈球菌膠體金免疫層析檢測裝置，其特征在于:所述的加樣孔(10)設有與其相配套的加樣孔防污蓋(11)，所述的加樣孔防污蓋(11)以可拆卸的方式與盒體(7)連接。
【文檔編號】G01N33/558GK205426926SQ201620261940
【公開日】2016年8月3日
【申請日】2016年3月30日
【發明人】張兆鴻
【申請人】珠海華澳生物科技有限公司