P1np檢測試劑盒的制作方法
【技術領域】
[0001] 本實用新型屬于醫療器械領域，具體地是設及一種試劑盒，該試劑盒用于人血清 或血漿中I型膠原氨基端延長膚(P1NP)的檢測。
【背景技術】
[0002] I型膠原前膚(P1NP)是最常見的骨膠原，是骨基質的重要組成部分，幾乎占總蛋白 部分的90%。在骨中的膠原是由成骨細胞W前膠原的形式合成的，前膠原形成膠原纖維時 從前膠原分子上裂解產生前膠原氨基端膚(PINP)，因此，測定其在血中的水平，可反映骨形 成情況。
[0003] P1NP反映的是I型膠原的沉積情況，因此是作為一項骨形成標志物。在I型膠原的 形成過程中，P1NP被釋放至細胞外間隙最終進入血液。所W，血清中I型膠原前膚水平在一 定范圍內是反映成骨細胞活動和骨形成W及反映 I型膠原合成速率的特異指標。
[0004] 另一方面，現有的檢測手段存在諸多缺陷：檢測成本較高，使用不方便，無法實現 快速檢測，測試的靈敏度也比較低。
【發明內容】
[0005] 本實用新型的目的，在于提供一種試劑盒，通過本實用新型可W實現對人血清或 血漿中I型膠原氨基端延長膚的快速檢測，檢測成本低，使用方便，測試靈敏度高。
[0006] 本實用新型的技術方案如下：
[0007] P1NP檢測試劑盒，包括盒體，盒體內設有多個下凹放置位，其中兩個下凹放置位內 分別設有第一試劑瓶、第二試劑瓶，在盒體內還放置有微孔測試板W及用于密封微孔測試 板的封板膜;第一試劑瓶內裝有生物素標記的小鼠抗P1NP單克隆抗體溶液，第二試劑瓶內 裝有HRP標記的小鼠抗P1NP單克隆抗體溶液。
[000引在所述下凹放置位內還設有至少八個輔助測試瓶。
[0009] 所述輔助測試瓶為十二個，其中六個裝有校準品，其中兩個裝有質控品，另四個分 別裝有解育緩沖液、底物TMB溶液、濃縮洗液、終止液。
[0010] 所述密封微孔測試板為至少兩個，所述封板膜也為至少兩個。
[0011] 在所述盒體內設有框架或插槽，所述微孔測試板置于該框架或插槽內。
[0012] 本實用新型所述P1NP檢測試劑盒使用方便，可W實現快速的檢測，檢測成本低，使 用方便，且該試劑盒對人血清或血漿中I型膠原氨基端延長膚進行檢測時，具有特異性、靈 敏度和精密度都非常好的優點。
【附圖說明】
[0013] 圖1是本實用新型所述測試盒在打開狀態時的結構圖；
[0014] 附圖標記說明：
[001引 10、盒體，11、下凹放置位，12、插槽，21、第一試劑瓶，22、第二試劑瓶，23-34、輔助 測試瓶，40、微孔測試板。
【具體實施方式】
[0016] 為了便于理解本發明，下面將參照相關附圖對本發明進行更全面的描述。附圖中 給出了本發明的較佳實施例。但是，本發明可許多不同的形式來實現，并不限于本文所 描述的實施例。相反地，提供運些實施例的目的是使對本發明的公開內容的理解更加透徹 全面。
[0017] 下面對本實用新型的實施例進行詳細說明。
[0018] 如圖1所示，一種用于人血清或血漿中I型膠原氨基端延長膚檢測的試劑盒，其包 括盒體10,盒體10內設有多個由固定泡沫模具形成的下凹放置位11，其中兩個下凹放置位 11內分別設有第一試劑瓶21、第二試劑瓶22,在盒體內10還放置有微孔測試板40W及用于 密封微孔測試板40的封板膜(封板膜可隨機放置，圖1中省略），微孔測試板40中的微孔內包 被有鏈霉親和素。在其余的下凹放置位11內還設有十二個輔助測試瓶23-34。
[0019] 具體組成為：
[0020] 1.微孔測試板40:微孔測試板40上具有12條x8孔，包被有鏈霉親和素，微孔測試板 40置于盒體10內的插槽12中；同時附帶四片用于密封微孔測試板的封板膜，W及說明書1 份，質控報告單1份(圖1中省略）。
[0021 ] 2、第一試劑瓶21內裝有生物素標記的小鼠抗P1NP單克隆抗體溶液，其濃度為濃度 為1. Omg/l;第二試劑瓶22內裝有HRP標記的小鼠抗P1NP單克隆抗體溶液。
[0022] 3、輔助測試瓶23-28內分別裝有校準品（分別標記為A-F)，六個瓶內分別含有不同 濃度P1NP和胎牛血清的PBS緩沖液，6 X 0.4mL。
[002引4、輔助測試瓶29、30內裝有質控品，該質控品為可直接使用的含有P1NP、胎牛血清 的PBS緩沖液，2X0.4m。
[0024] 5、輔助測試瓶31，裝有解育緩沖液:含有蛋白穩定劑的PBS緩沖液，1 X30mL。
[0025] 6、輔助測試瓶32，裝有底物TMB溶液，可直接使用的四甲基聯苯胺(TMB)底物(溶于 酸性緩沖液中），lX12mL。
[00%] 7、輔助測試瓶33，裝有濃縮洗板液:含有吐溫的50 X化is鹽緩沖的濃縮洗板液，1 X20mL〇
[0027] 8、輔助測試瓶34，裝有終止液:0.3M稀硫酸，1 X 12mL。
[00%]本實施例的使用過程具體包括W下步驟：
[0029] 1)預解育
[0030] 向各孔加入1(Κ)化生物素標記的抗P1NP抗體，用封板膜密封，在酶標板振蕩器(300 轉/分鐘)上于室溫(20-25 °C)下靜置解育30 ± 5分鐘。
[003。2)清洗
[0032] 清洗緩沖溶液(50x)Wl體積濃縮緩沖溶液+49體積蒸饋水的比例稀釋。手工清洗 微孔板5次(250UL/孔），若使用自動洗板機，同樣清洗5次。應確保每次手工或自動清洗后將 微孔中的溶液去除干凈。
[0033] 3) -次解育
[0034] 向對應的孔中加入50化校準品(A-F )，質控品和待測血樣，再向每孔中加入50化解 育緩沖液，加蓋封板膜，室溫、300r/min解育60min。
[0035] 4)清洗
[0036] 見第2步。
[0037] 5)二次解育
[0038] 向各孔加入10化L過氧化物酶標記的抗體溶液。加蓋封板膜，室溫、300r/min解育 60min。
[0039] 6)清洗
[0040] 見第2步。
[0041 ] 7)顯色
[0042] 向各孔加入10化L底物TMB溶液，加蓋封板膜，室溫靜置解育15min。
[0043] 8)終止顯色反應
[0044] 向各孔加入10化L終止液。
[0045] 9)測定吸光度
[0046] 在0.5小時內W650nm為參照測定450nm吸光度。
[0047] 本實施例的檢測范圍：
[0048] 如果待測樣本的吸光度高于校準A，建議用校準品F稀釋樣本并重新分析。
[0049] 針對本實施例檢驗結果的解釋：
[(K)加]結果處理
[0051]用四參數對數曲線擬合構建標準曲線，用內推法確定質控和患者樣本中PINP的濃 度。結果舉例：
[0化2]
[0053]本實施例所述P1NP檢測試劑盒使用方便，可W實現快速的檢測，檢測成本低，且該 試劑盒對人血清或血漿中I型膠原氨基端延長膚進行檢測時，具有特異性、靈敏度和精密度 都非常好的優點。
[0054] W上所述實施例的各技術特征可W進行任意的組合，為使描述簡潔，未對上述實 施例中的各個技術特征所有可能的組合都進行描述，然而，只要運些技術特征的組合不存 在矛盾，都應當認為是本說明書記載的范圍。
[0055] W上所述實施例僅表達了本發明的幾種實施方式，其描述較為具體和詳細，但并 不能因此而理解為對本發明專利范圍的限制。應當指出的是，對于本領域的普通技術人員 來說，在不脫離本發明構思的前提下，還可W做出若干變形和改進，運些都屬于本發明的保 護范圍。因此，本發明專利的保護范圍應W所附權利要求為準。
【主權項】
1. P1NP檢測試劑盒，其特征在于，包括盒體，盒體內設有多個下凹放置位，其中兩個下 凹放置位內分別設有第一試劑瓶、第二試劑瓶在盒體內還放置有微孔測試板以及用于密封 微孔測試板的封板膜;第一試劑瓶內裝有生物素標記的小鼠抗P1NP單克隆抗體溶液，第二 試劑瓶內裝有HRP標記的小鼠抗P1NP單克隆抗體溶液。2. 如權利要求1所述P1NP檢測試劑盒，其特征在于，在所述下凹放置位內還設有至少八 個輔助測試瓶。3. 如權利要求2所述P1NP檢測試劑盒，其特征在于，所述輔助測試瓶為十二個，其中六 個裝有校準品，其中兩個裝有質控品，另四個分別裝有孵育緩沖液、底物TMB溶液、濃縮洗 液、終止液。4. 如權利要求1至3中任一項所述P1NP檢測試劑盒，其特征在于，所述密封微孔測試板 為至少兩個，所述封板膜也為至少兩個。5. 如權利要求1至3中任一項所述P1NP檢測試劑盒，其特征在于，在所述盒體內設有框 架或插槽，所述微孔測試板置于該框架或插槽內。
【專利摘要】本實用新型公開了一種試劑盒，其包括盒體，盒體內設有多個下凹放置位，其中兩個下凹放置位內分別設有第一試劑瓶、第二試劑瓶，在盒體內還放置有微孔測試板以及用于密封微孔測試板的封板膜；第一試劑瓶內裝有生物素標記的小鼠抗P1NP單克隆抗體溶液，第二試劑瓶內裝有HRP標記的小鼠抗P1NP單克隆抗體溶液。通過本實用新型可以實現對人血清或血漿中I型膠原氨基端延長肽的快速檢測，檢測成本低，測試靈敏度高。
【IPC分類】G01N33/577, G01N33/68
【公開號】CN205333655
【申請號】CN201620077592
【發明人】郭志程
【申請人】廣州菲康生物技術有限公司
【公開日】2016年6月22日
【申請日】2016年1月25日