快速檢測牛流行熱病毒的試紙條的制作方法
【技術領域】
[0001] 本實用新型涉及一種在檢測病毒情況下使用的試紙。更具體地說，本實用新型涉 及一種用在檢測病毒情況下的快速檢測牛流行熱病毒的試紙條。
【背景技術】
[0002] 牛流行熱（bovineephemeralfever，BEF)是由牛流行熱病毒（bovineephemeral fevervirus，BEFV)引起的一種急性熱性傳染病。其特征是突發高熱、呼吸迫促、消化機能 障礙、全身虛弱、僵硬、跋行或癱瘓、奶牛產奶量降低、乳品質下降，部分懷孕母牛流產，并且 傳播迅速，流行面廣，給養牛業造成重要經濟損失。
[0003]BEF首先發現于19世紀中期東非，隨后流行于非洲、亞洲和大洋洲許多國家和地 區，在我國多個省份多次爆發流行。本病嚴重影響乳牛的產乳量，且部分病牛因癱瘓而淘 汰，極大影響了養牛業的健康發展。
[0004] 及時、快速診斷BEF，是有效控制BEF的前提。目前BEF的診斷主要有常規實驗室 檢測和分子生物學兩大類方法。常規方法主要有病毒分離鑒定和BEFV抗體的血清學檢測， 包括血清中和試驗和ELISA等方法。分子生物學方法主要有RT-PCR和核酸探針技術等。但 BEFV的病毒分離培養、血清中和試驗、ELISA、PCR和核酸探針等檢測技術操作復雜，需要昂 貴的儀器設備、過程較長、耗時費力，需要特定儀器設備和專業技術人員操作，很難在基層 普及，不能滿足生產一線或疫病現場的快速診斷需要。因此，研宄一種快速檢測禽牛流行熱 病毒感染的檢測技術非常重要而迫切。 【實用新型內容】
[0005] 本實用新型的一個目的是解決至少上述問題和/或缺陷，并提供至少后面將說明 的優點。
[0006] 本實用新型還有一個目的是提供一種可快速檢測牛流行熱病毒的試紙條，其利用 微孔濾膜的滲濾濃縮和毛細管作用，將抗原-抗體反應由ELISA的傳統液相環境轉到固相 濾膜上快速進行，采用膠體金印跡代替酶印跡，憑肉眼直接觀察膠體金的顯色狀況，即時獲 得檢測結果。
[0007] 本實用新型還有一個目的是提供一種檢測特異性強的快速檢測牛流行熱病毒的 試紙條，膠體金標對單抗/多抗的特異性和親和力（結合力）影響很小，具有較高的印跡 率、特異性和敏感性，可檢測到2納克的相應病毒的蛋白。
[0008] 為了實現根據本實用新型的這些目的和其它優點，提供了一種快速檢測牛流行熱 病毒的試紙條，其特征在于，包括：
[0009] 支撐層、吸附纖維層、金標抗體纖維層、纖維素膜層及吸水層，其中吸附纖維層、金 標抗體纖維層、纖維素膜層及吸水層順次搭接粘貼在支撐層上；
[0010] 牛流行熱病毒抗體的檢測印跡線，其為包被的抗牛流行熱病毒的單克隆抗體或多 克隆抗體檢測印跡線且設置在所述纖維素膜層上；
[0011] 羊抗鼠免疫球蛋白G或兔抗鼠免疫球蛋白G的對照印跡線，其為包被的抗牛流行 熱病毒的多克隆抗體或單克隆抗體對照印跡線且設置在所述纖維素膜層上，且與所述牛流 行熱病毒抗體的檢測印跡線定距間隔排列；
[0012] 其中，所述金標抗體纖維層上附著有與牛流行熱病毒抗體的檢測印跡線對應的以 膠體金標記的牛流行熱病毒單克隆抗體或多克隆抗體。
[0013] 優選的是，其中，在所述吸附纖維層、金標抗體纖維層以及吸水層上敷設有保護 膜，且在所述吸附纖維層與金標抗體纖維層交界處對應的保護膜上偏向所述吸附纖維層一 側0. 3~0. 7cm處印制有樣品標記線。
[0014] 優選的是，其中，所述牛流行熱病毒抗體的檢測印跡線與所述羊抗鼠免疫 球蛋白G或兔抗鼠免疫球蛋白G的對照印跡線的排列組合為" 11"、"http://"、"++"、
【主權項】
1. 一種快速檢測牛流行熱病毒的試紙條，其特征在于，包括： 支撐層、吸附纖維層、金標抗體纖維層、纖維素膜層及吸水層，其中吸附纖維層、金標抗 體纖維層、纖維素膜層及吸水層順次搭接粘貼在支撐層上； 牛流行熱病毒抗體的檢測印跡線，其為包被的抗牛流行熱病毒的單克隆抗體或多克隆 抗體檢測印跡線且設置在所述纖維素膜層上； 羊抗鼠免疫球蛋白G或兔抗鼠免疫球蛋白G的對照印跡線，其為包被的抗牛流行熱病 毒的多克隆抗體或單克隆抗體對照印跡線且設置在所述纖維素膜層上，且與所述牛流行熱 病毒抗體的檢測印跡線定距間隔排列； 其中，所述金標抗體纖維層上附著有與牛流行熱病毒抗體的檢測印跡線對應的W膠體 金標記的牛流行熱病毒單克隆抗體或多克隆抗體。
2. 如權利要求1所述的快速檢測牛流行熱病毒的試紙條，其特征在于，在所述吸附纖 維層、金標抗體纖維層W及吸水層上敷設有保護膜，且在所述吸附纖維層與金標抗體纖維 層交界處對應的保護膜上偏向所述吸附纖維層一側0. 3~0. 7cm處印制有樣品標記線。
3.如權利要求2所述的快速檢測牛流行熱病毒的試紙條，其特征在于，所述牛流行熱 病毒抗體的檢測印跡線與所述羊抗鼠免疫球蛋白G或兔抗鼠免疫球蛋白G的對照印跡線的 排列組合為"II 丄丄"、"TT"、"FI"中的一種。
4.如權利要求3所述的快速檢測牛流行熱病毒的試紙條，其特征在于，所述纖維素膜 層由硝酸纖維素膜、純纖維素膜、駿化纖維素膜或聚偏二氣己締膜制成。
5.如權利要求4所述的快速檢測牛流行熱病毒的試紙條，其特征在于，所述吸附纖維 層由玻璃棉、巧龍纖維或聚醋纖維制成。
6.如權利要求5所述的快速檢測牛流行熱病毒的試紙條，其特征在于，所述支撐層由 不吸水的硬質塑膠片或硬紙條制成。
7.如權利要求6所述的快速檢測牛流行熱病毒的試紙條，其特征在于，所述吸水層用 吸水紙制成。
8.如權利要求7所述的快速檢測牛流行熱病毒的試紙條，其特征在于，所述金標抗體 纖維層由玻璃棉、巧龍纖維或聚醋纖維制成。
9.如權利要求8所述的快速檢測牛流行熱病毒的試紙條，其特征在于，所述牛流行熱 病毒抗體的檢測印跡線設置在所述纖維素膜層且靠近所述金標抗體纖維層的一端。
【專利摘要】本實用新型公開了一種快速檢測牛流行熱病毒的試紙條，包括：支撐層、順次搭接粘貼在支撐層的吸附纖維層、金標抗體纖維層、纖維素膜層及吸水層；牛流行熱病毒抗體的檢測印跡線，其為包被的抗牛流行熱病毒的單克隆抗體或多克隆抗體且設置在纖維素膜層；羊抗鼠免疫球蛋白G或兔抗鼠免疫球蛋白G的對照印跡線，其為包被的抗牛流行熱病毒的多克隆抗體或單克隆抗體且與所述檢測印跡線定距間隔排列設置在纖維素膜層；其中，所述金標抗體纖維層上附著有與牛流行熱病毒抗體的檢測印跡線對應的以膠體金標記的牛流行熱病毒單克隆抗體或多克隆抗體。本實用新型具有顯示直觀、準確、快速、特異性強、靈敏度高、操作簡便與檢測成本低的效果。
【IPC分類】G01N33-577, G01N33-569, G01N33-558
【公開號】CN204495836
【申請號】CN201520096675
【發明人】趙樸, 鄭玉姝, 陳玲先, 蘇紅遼, 張濤, 惠永華, 解軍亮, 張磊, 李小軍, 姚雪靜, 張海清, 王小平, 王亮, 袁松山, 徐力
【申請人】河南科技學院
【公開日】2015年7月22日
【申請日】2015年2月11日