一種測定抗角蛋白抗體的試劑盒及其制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種測定抗角蛋白抗體的試劑盒及其制備方法，包括彼此獨立的試劑R1和試劑R2雙液體組分組成試劑盒：試劑R1：緩沖液、無機鹽離子、加速劑、表面活性劑、穩定劑、螯合劑、殺菌劑、抗氧化劑、防腐劑、抗免疫球蛋白G抗體，試劑R2：緩沖液、無機鹽離子、穩定劑、助懸劑、表面活性劑、抗氧化劑、殺菌劑、防腐劑、膠乳包被抗AKA抗體，制備方法為：按照組分含量配制好試劑；將待測樣本與試劑R1和試劑R2混合，使其充分反應；用全自動生化分析儀測定反應后的吸光度差值；根據吸光度變化值計算出樣本中的抗角蛋白抗體的濃度。本發明具有準確度高等優點。
【專利說明】
一種測定抗角蛋白抗體的試劑盒及其制備方法
技術領域
[0001] 本發明涉及醫學及生物化學技術領域，具體來說是一種測定抗角蛋白抗體的試劑 盒及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 抗角蛋白抗體(AKA)，1979年Young等發現RA血清中有一種能與鼠食管角質層反應 的抗體，并對RA具有特異性，命名為AKA。
[0003] 抗角蛋白抗體(AKA)與類風濕因子在診斷類風濕(RA)時具有顯著的相關性，抗角 蛋白抗體(AKA)是判斷類風濕預后的一種標志性抗體，特別是高濃度的抗角蛋白抗體(AKA) 的類風濕患者，常提示預后不佳，同時抗角蛋白抗體(AKA)可出現在診斷未確診的關節炎病 人中，但隨后確診為類風濕患者，因此抗角蛋白抗體對類風濕患者早期診斷亦有一定的價 值。
[0004] 目前檢測抗角蛋白抗體(AKA)的方法主要為間接免疫熒光分析法，但此法檢測復 雜，對結果的判讀需要專業人士進行，且會造成熒光劑的污染，而且市場上的一些其它的方 法也存在準確度不準的缺陷。
【發明內容】
[0005] 本發明所要解決的技術問題是為了克服現有技術存在污染以及測定準確度低的 缺陷，而提供一種測定抗角蛋白抗體的試劑盒及其制備方法。
[0006] 本發明解決上述技術問題提供的技術方案是:本發明公開了一種測定抗角蛋白抗 體的試劑盒，包括彼此獨立的試劑R1和試劑R2雙液體組分組成試劑盒，包括的成分及相應 含量為： 試劑R1: 緩沖液 15~185 mmol/L 無機鹽離子 15CK450 mmol/L 加速劑 5~25 g/L 表面活性劑 0.5~3.0 mL/L 穩定劑 15~25 g/L 螯合劑 28~62 mmol/L 殺菌劑 0.1~3 g/L 抗氧化劑 1~24 g/L 防腐劑 1~9 g/L 抗免疫球蛋白G抗體 0.2~2.2 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 50~150 mmol/L 無機鹽離子 35~165 mmol/L 穩定劑 6~20 g/L 助懸劑 5~45 mmol/L 表面活性劑 0.5~3.0 mL/L 抗氧化劑 1~24g/L 殺菌劑 1~24g/L 防腐劑 0.1~0.9 g/L 膠乳包被抗AKA抗體 1~8 g/L 其溶劑為純化水。
[0007] 作為優選，本發明公開了一種測定抗角蛋白抗體的試劑盒，包括彼此獨立的試劑 R1和試劑R2雙液體組分組成試劑盒，包括的成分及相應含量為： 試劑R1: 緩沖液 100 mmol/L 無機鹽離子 250 mmol/L 加速劑 10 g/L 表面活性劑 2.0 mL/L 穩定劑 20 g/L 整合劑 45 mmol/L 殺菌劑 1.5 g/L 抗氧化劑 15 g/L 防腐劑 5 g/L 抗免疫球蛋白G抗體 1.0 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 100 mmol/L 無機鹽離子 100 mmol/L 穩定劑 13 g/L 助懸劑 25 mmol/L 表面活性劑 2.0 mL/L 抗氧化劑 15g/L 殺菌劑 15g/L 防腐劑 0.5 g/L 膠乳包被抗AKA抗體 4g/L 其溶劑為純化水。
[0008] 作為優選，所述的試劑R1中，所述的緩沖液采用Tris緩沖液、MOPS緩沖液、PBS緩 沖液、MES緩沖液、甘氨酸緩沖液中的一種或多種的組合，所述的無機鹽離子采用氯化鈉、氯 化鉀、氯化鎂中的一種或多種的組合，所述的加速劑采用聚乙二醇-2000、聚乙二醇-6000、 聚乙二醇-8000、聚乙烯吡咯烷酮中的一種或多種的組合，所述的表面活性劑采用吐溫-80、 聚氧乙烯苯基醚中的一種，所述的穩定劑采用牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖中的一種或多種 的組合，所述的螯合劑采用乙二胺四乙酸、雙硫腙、酒石酸鉀鈉、8-羥基喹啉中的一種或多 種的組合，所述的殺菌劑采用青霉素、鏈霉素、慶大霉素、四環素、土霉素中的一種或多種的 組合，所述的抗氧化劑采用苯多酚、二丁基羥基甲苯、丁基羥基茴香醚、硫代二丙酸二月桂 酯中的一種或多種的組合，所述的防腐劑采用苯酚、苯甲酸鈉、疊氮鈉中的一種或多種的組 合。
[0009]作為優選，所述的試劑R2中，所述的緩沖液采用Tris緩沖液、MOPS緩沖液、PBS緩沖 液、MES緩沖液、甘氨酸緩沖液中的一種或多種的組合，所述的無機鹽離子采用氯化鈉、氯化 鉀、氯化鎂中的一種或多種的組合，所述的穩定劑采用牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖中的一 種或者多種的組合，所述的助懸劑采用阿拉伯膠、海藻酸鈉、膠體二氧化硅、甘油中的一種 或多種的組合，所述的表面活性劑采用吐溫-80、聚氧乙烯苯基醚中的一種，所述的抗氧化 劑采用苯多酚、二丁基羥基甲苯、丁基羥基茴香醚、硫代二丙酸二月桂酯中的一種或多種的 組合，所述的殺菌劑采用青霉素、鏈霉素、慶大霉素、四環素、土霉素中的一種或多種的組 合，所述的防腐劑采用苯酚、苯甲酸鈉、疊氮鈉中的一種或多種的組合。
[0010]作為優選，所述的膠乳包被抗AKA抗體的制備方法為：用60 mmol/L的甘氨酸緩沖 液將粒徑為40-500nm的聚苯乙烯微球稀釋成為所含的聚苯乙烯微球的質量濃度為1.5%的 溶液，然后每毫升溶液中加入1.0 mg的1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽， 在20°C_37°C的條件下反應6小時，使用離心機，在15000 rpm/min的轉速下離心30分鐘，去 上清，然后將沉淀懸浮于60 mmol/L的甘氨酸緩沖液中，超聲分散，再使用離心機，在15000 rpm/min的轉速下離心30分鐘，去上清，將沉淀懸浮于60 mmol/L的甘氨酸緩沖液中，使得溶 液中的聚苯乙烯微球的最終質量濃度為3%，超聲分散，然后邊攪拌邊加入等體積的含8mg/ ml的抗抗角蛋白抗體的甘氨酸緩沖液，混合攪拌，在20°C_37°C的條件下反應2小時，使得聚 苯乙稀微球最終質量濃度為1.5%，使用離心機，在15000 rpm/min的轉速下離心30分鐘，去 上清，將沉淀懸浮于50 mmol/L的甘氨酸緩沖液中，超聲分散，加入牛血清白蛋白，使得牛血 清白蛋白的濃度為15g/L，在4°C的條件下封閉8-16小時，即可制備得到膠乳包被抗AKA抗 體。
[0011]作為優選，所述的抗抗角蛋白抗體為含有能與人抗角蛋白抗體特異性結合的Fab 功能部位的單克隆完整抗體或抗體片段。
[0012]作為優選，本發明還公開了上述測定抗角蛋白抗體的試劑盒的制備方法和使用方 法，包括以下步驟： (a)按照下列組分含量配制好試劑： 試劑R1: 緩沖液 15~185 mmol/L 無機鹽離子 150~450 mmol/L 加速劑 5~25 g/L 表面活性劑 0.5~3.0 mL/L 穩定劑 15~25 g/L 螯合劑 28~62 mmol/L 殺菌劑 0.1~3 g/L 抗氧化劑 1~24 g/L 防腐劑 1~9 g/L 抗免疫球蛋白G抗體 0.2~2.2 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 50~150 mmol/L 無機鹽離子 35~165 mmol/L 穩定劑 6~20 g/L 助懸劑 5~45 mmol/L 表面活性劑 0.5~3.0 mL/L 抗氧化劑 1~24g/L 殺菌劑 1~24g/L 防腐劑 0.1~0.9 g/L 膠乳包被抗AKA抗體 1~8 g/L 其溶劑為純化水； (b) 將待測樣本與試劑R1和試劑R2混合，使其充分反應； (c) 用全自動生化分析儀測定反應后的吸光度差值； (d) 根據吸光度變化值計算出樣本中的抗角蛋白抗體的濃度。
[0013] 作為優選，步驟(b)中，所述的試劑R1與試劑R2的體積比為3:1。
[0014] 作為優選，步驟(b)中，所述的待測樣本與試劑R1和試劑R2的總體積的體積比在1: 5到1:60之間。
[0015]本發明的檢測原理是:先將含有抗免疫球蛋白G抗體的試劑R1與樣本相混合，在37 °C下孵育5分鐘，使得樣本中的免疫球蛋白G與試劑R1中的抗免疫球蛋白G抗體結合形成抗 原抗體復合物，并凝集成大顆粒，以達到將有交叉反應的免疫球蛋白G清除的目的，再將含 有包被了高特異性的抗AKA抗體的聚苯乙烯微球的緩沖液即試劑R2與上述中去除過免疫球 蛋白G的樣本中相應的抗角蛋白抗體發生特異性結合，在促凝劑作用下形成不溶性的聚苯 乙烯微球-抗原-聚苯乙烯微球顆粒復合物乳濁液，產生一定的濁度，其濁度高低與樣本中 的抗角蛋白抗體抗原濃度成正比關系，在一定波長下進行濁度測定，即可測得樣本中被檢 測抗角蛋白抗體的含量。
式中：ΔΑτ/min以空白管吸光度作對照的樣品管吸光度值 Δ As/min以空白管吸光度作對照的校準管吸光度值 Cs校準液中AKA的濃度。
[0017]與現有技術相比，本發明具有以下有益優點：本發明在試劑R1和試劑R2中添加了 新型穩定劑海藻糖，在和抑菌劑青霉素，抗氧化劑丁基羥基茴香醚的協同作用下，大大提高 了試劑中其它成分的穩定性，使得試劑整體的穩定性大大提升，試劑R1中添加了金屬離子 螯合劑，在樣本的孵育中去除了金屬離子的干擾，且添加了抗免疫球蛋白G抗體，在加速劑 的作用下，可特異性的去除類風濕因子一類的免疫球蛋白G類抗體的干擾，使得結果更加準 確，而且本發明所制得試劑盒無污染，操作方便。
【具體實施方式】
[0018] 以下結合具體實施例進一步說明，但本發明并不僅限于這些實施例。
[0019] 實施例1 本發明的試劑盒包括彼此獨立的試劑R1和試劑R2雙液體組分，其中 試劑R1: Tris緩沖液 100 mmol/L 氯化鈉 250 mmol/L 聚乙二醇-2000 10 g/L 吐溫-80 2.0 mL/L 海藻糖 20 g/L 乙二胺四乙酸 45 mmol/L 慶大霉素 1.5 g/L 二丁基羥基甲苯 15 g/L 苯甲酸鈉 5 g/L 抗免疫球蛋白G抗體 1.0 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: Tris緩沖液 100 mmol/L 氯化鈉 100 mmol/L 海藻糖 13 g/L 海藻酸鈉 25 mmol/L 聚氧乙稀苯基醚 2.0 mL/L 二丁基羥基甲苯 15g/L 慶大霉素 15g/L 苯甲酸鈉 0.5 g/L 膠乳包被抗AKA抗體 4g/L 其溶劑為純化水。
[0020] 實施例2 本發明的試劑盒包括彼此獨立的試劑R1和試劑R2雙液體組分，其中 試劑R1: MES緩沖液 185 mmol/L 氯化鎂 150 mmol/L 聚乙二醇-8000 25 g/L 聚氧乙稀苯基醚 3.0 mL/L 牛血清白蛋白 15 g/L 乙二胺四乙酸 28 mmol/L 鏈霉素 3 g/L 二丁基羥基甲苯 1 g/L 苯甲酸鈉 9 g/L 抗免疫球蛋白G抗體 〇. 2 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: MES緩沖液 150 mmol/L 氯化鈉 165 mmol/L 牛血清白蛋白 6 g/L 海藻酸鈉 45 mmol/L 吐溫-80 0.5 mL/L 丁基羥基茴香醚 24g/L 慶大霉素 24g/L 苯甲酸鈉 0.1 g/L 膠乳包被抗AKA抗體 lg/L 其溶劑為純化水。
[0021] 實施例3 試劑盒的制備和使用方法 1、 膠乳包被抗AKA抗體的制備：用60 mmol/L的甘氨酸緩沖液將粒徑為120nm的聚苯乙 烯微球稀釋成為所含的聚苯乙烯微球的質量濃度為1.5%的溶液，然后每毫升溶液中加入 1.0 mg的1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽，在28°C的條件下反應6小時，使 用離心機，在15000 rpm/min的轉速下離心30分鐘，去上清，然后將沉淀懸浮于60 mmol/L的 甘氨酸緩沖液中，超聲分散，再使用離心機，在15000 rpm/min的轉速下離心30分鐘，去上 清，將沉淀懸浮于60 mmol/L的甘氨酸緩沖液中，使得溶液中的聚苯乙烯微球的最終質量濃 度為3%，超聲分散，然后邊攪拌邊加入等體積的含8mg/ml的抗抗角蛋白抗體的甘氨酸緩沖 液，混合攪拌，在28°C的條件下反應2小時，使得聚苯乙烯微球最終質量濃度為1.5%，使用離 心機，在15000 rpm/min的轉速下離心30分鐘，去上清，將沉淀懸浮于50 mmol/L的甘氨酸緩 沖液中，超聲分散，加入牛血清白蛋白，使得牛血清白蛋白的濃度為15g/L，在4°C的條件下 封閉10小時，即可制備得到膠乳包被抗AKA抗體； 2、 按照下列組分含量配制好試劑： 試劑R1: Tris緩沖液 100 mmol/L 氯化鈉 250 mmol/L 聚乙二醇-2000 10 g/L 吐溫-80 2.0 mL/L 海藻糖 20 g/L 乙二胺四乙酸 45 mmol/L 慶大霉素 1.5 g/L 二丁基羥基甲苯 15 g/L 苯甲酸鈉 5 g/L 抗免疫球蛋白G抗體 1.0 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: Tris緩沖液 100 mmol/L 氯化鈉 100 mmol/L 海藻糖 13 g/L 海藻酸鈉 25 mmol/L 聚氧乙稀苯基醚 2.0 mL/L 二丁基羥基甲苯 15g/L 慶大霉素 15g/L 苯甲酸鈉 0.5 g/L 膠乳包被抗AKA抗體 4g/L 其溶劑為純化水； 3、 全自動生化分析儀參數設置 (a) 檢測溫度:37°C; (b) 檢測波長:主波長546nm，副波長800nm; (c) 反應時間：10min，其中，孵育時間5min，加入試劑R2后立即測定讀取吸光度 Al，5min后讀取吸光度A2,計算吸光度變化ΔΑ = A2-A1 ; (d) 反應方向：正反應； 4、 檢測步驟 (a) 取210μ1試劑R1與5μ1待測樣本混勻； (b) 將混勻后的溶液在37°C的條件下孵育5min;
(c) 加入70μ1試劑R2,立即測定讀取吸光度Al，5min后讀取吸光度A2,計算吸光度變化 ΔΑ = A2-A1; (d) 根據樣本中抗角蛋白抗體(AKA)的活性 計算出樣本中 的抗角蛋白抗體的濃度。
[0022] 實施例4 試劑盒的制備和使用方法 1、膠乳包被抗AKA抗體的制備：用60 mmol/L的甘氨酸緩沖液將粒徑為100nm的聚苯乙 烯微球稀釋成為所含的聚苯乙烯微球的質量濃度為1.5%的溶液，然后每毫升溶液中加入 1.0 mg的1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽，在28°C的條件下反應6小時，使 用離心機，在15000 rpm/min的轉速下離心30分鐘，去上清，然后將沉淀懸浮于60 mmol/L的 甘氨酸緩沖液中，超聲分散，再使用離心機，在15000 rpm/min的轉速下離心30分鐘，去上 清，將沉淀懸浮于60 mmol/L的甘氨酸緩沖液中，使得溶液中的聚苯乙烯微球的最終質量濃 度為3%，超聲分散，然后邊攪拌邊加入等體積的含8mg/ml的抗抗角蛋白抗體的甘氨酸緩沖 液，混合攪拌，在28°C的條件下反應2小時，使得聚苯乙烯微球最終質量濃度為1.5%，使用離 心機，在15000 rpm/min的轉速下離心30分鐘，去上清，將沉淀懸浮于50 mmol/L的甘氨酸緩 沖液中，超聲分散，加入牛血清白蛋白，使得牛血清白蛋白的濃度為15g/L，在4°C的條件下 封閉10小時，即可制備得到膠乳包被抗AKA抗體； 2、 按照下列組分含量配制好試劑： 試劑R1: MES緩沖液 185 mmol/L 氯化鎂 150 mmol/L 聚乙二醇-8000 25 g/L 聚氧乙稀苯基醚 3.0 mL/L 牛血清白蛋白 15 g/L 乙二胺四乙酸 28 mmol/L 鏈霉素 3 g/L 二丁基羥基甲苯 1 g/L 苯甲酸鈉 9 g/L 抗免疫球蛋白G抗體 〇. 2 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: MES緩沖液 150 mmol/L 氯化鈉 165 mmol/L 牛血清白蛋白 6 g/L 海藻酸鈉 45 mmol/L 吐溫-80 0.5 mL/L 丁基羥基茴香醚 24g/L 慶大霉素 24g/L 苯甲酸鈉 0.1 g/L 膠乳包被抗AKA抗體 lg/L 其溶劑為純化水； 3、 全自動生化分析儀參數設置 (a) 檢測溫度:37°C; (b) 檢測波長:主波長546nm，副波長800nm; (c) 反應時間：10min，其中，孵育時間5min，加入試劑R2后立即測定讀取吸光度 Al，5min后讀取吸光度A2,計算吸光度變化ΔΑ = A2-A1 ; (d) 反應方向：正反應； 4、 檢測步驟 (a) 取210μ1試劑R1與5μ1待測樣本混勻； (b) 將混勻后的溶液在37°C的條件下孵育5min; (c) 加入70μ1試劑R2,立即測定讀取吸光度Al，5min后讀取吸光度A2,計算吸光度變化 ΔΑ = A2-A1;
(d)根據樣本中抗角蛋白抗體(AKA)的活性 計算出樣本 中的抗角蛋白抗體的濃度。
[0023]表1為實施例1所制得的測定抗角蛋白抗體的試劑盒以及實施例2所制得的測定抗 由表1可知，本發明所制得的測定抗角蛋白抗體的試劑盒對質控品1的測定結果偏差較 小，因此測定準確度高，而且實施例1為最優的選擇。
[0024] 表2為實施例1所制得的測定抗角蛋白抗體的試劑盒以及實施例2所制得的測定抗角蛋 白抗體的試劑盒分別對質控品2進行測定的結果，其中質控品2中的抗角蛋白抗體的濃度為 76 U/mL，測定結果見表2:
角蛋白抗體的試劑盒分別對質控品1進行測定的結果，其中質控品1中的抗角蛋白抗體的濃 度為48 U/mL，測定結果見表1:
由表2可知，本發明所制得的測定抗角蛋白抗體的試劑盒對質控品2的測定結果偏差較 小，因此測定準確度高，而且實施例1為最優的選擇。
[0025] 表3為實施例3所制得的測定抗角蛋白抗體的試劑盒對同一待測樣本進行的多次 反復測定以及實施例4所制得的測定抗角蛋白抗體的試劑盒對同一待測樣本進行的多次反 復測定，對所得的結果進行SD和CV的計算，結果如下： 表3
由表3可知本發明所制得的測定抗角蛋白抗體的試劑盒的精密度比較好，而且由表1可 知，實施例3為最優的選擇。
[0026] 上述實施例僅例示性說明本發明的原理及其功效，而非用于限制本發明。任何熟 悉此技術的人士皆可在不違背本發明的精神及范疇下，對上述實施例進行修飾或改變。因 此，舉凡所屬技術領域中具有通常知識者在未脫離本發明所揭示的精神與技術思想下所完 成的一切等效修飾或改變，仍應由本發明的權利要求所涵蓋。
【主權項】
1. 一種測定抗角蛋白抗體的試劑盒，其特征在于:包括彼此獨立的試劑R1和試劑R2雙 液體組分組成試劑盒，包括的成分及相應含量為： 試劑R1: 緩沖液 15~185 mmol/L 無機鹽離子 150~450 mmol/L 加速劑 5~25 g/L 表面活性劑 0.5~3.0 mL/L 穩定劑 15~25 g/L 螯合劑 28~62 mmol/L 殺菌劑 0.1~3 g/L 抗氧化劑 1~24 g/L 防腐劑 1~9 g/L 抗免疫球蛋白G抗體 0.2~2.2 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 50~150 mmol/L 無機鹽離子 35~165 mmol/L 穩定劑 6~20 g/L 助懸劑 5~45 mmol/L 表面活性劑 0.5~3.0 mL/L 抗氧化劑 1~24g/L 殺菌劑 1~24g/L 防腐劑 0.1~0.9 g/L 膠乳包被抗AKA抗體 1~8 g/L 其溶劑為純化水。2. 根據權利要求1所述的一種測定抗角蛋白抗體的試劑盒，其特征在于:包括彼此獨立 的試劑R1和試劑R2雙液體組分組成試劑盒，包括的成分及相應含量為： 試劑R1: 緩沖液 100 mmol/L 無機鹽離子 250 mmol/L 加速劑 10 g/L 表面活性劑 2.0 mL/L 穩定劑 20 g/L 整合劑 45 mmol/L 殺菌劑 1.5 g/L 抗氧化劑 15 g/L 防腐劑 5 g/L 抗免疫球蛋白G抗體 1.0 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 100 mmol/L 無機鹽離子 100 mmol/L 穩定劑 13 g/L 助懸劑 25 mmol/L 表面活性劑 2.0 mL/L 抗氧化劑 15g/L 殺菌劑 15g/L 防腐劑 0.5 g/L 膠乳包被抗AKA抗體 4g/L 其溶劑為純化水。3. 根據權利要求1或2所述的一種測定抗角蛋白抗體的試劑盒，其特征在于:所述的試 劑R1中，所述的緩沖液采用Tris緩沖液、MOPS緩沖液、PBS緩沖液、MES緩沖液、甘氨酸緩沖液 中的一種或多種的組合，所述的無機鹽離子采用氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂中的一種或多種的 組合，所述的加速劑采用聚乙二醇-2000、聚乙二醇-6000、聚乙二醇-8000、聚乙烯吡咯烷酮 中的一種或多種的組合，所述的表面活性劑采用吐溫-80、聚氧乙烯苯基醚中的一種，所述 的穩定劑采用牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖中的一種或多種的組合，所述的螯合劑采用乙二 胺四乙酸、雙硫腙、酒石酸鉀鈉、8-羥基喹啉中的一種或多種的組合，所述的殺菌劑采用青 霉素、鏈霉素、慶大霉素、四環素、土霉素中的一種或多種的組合，所述的抗氧化劑采用苯多 酚、二丁基羥基甲苯、丁基羥基茴香醚、硫代二丙酸二月桂酯中的一種或多種的組合，所述 的防腐劑采用苯酚、苯甲酸鈉、疊氮鈉中的一種或多種的組合。4. 根據權利要求1或2所述的一種測定抗角蛋白抗體的試劑盒，其特征在于:所述的試 劑R2中，所述的緩沖液采用Tri s緩沖液、MOPS緩沖液、PBS緩沖液、MES緩沖液、甘氨酸緩沖液 中的一種或多種的組合，所述的無機鹽離子采用氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂中的一種或多種的 組合，所述的穩定劑采用牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖中的一種或者多種的組合，所述的助 懸劑采用阿拉伯膠、海藻酸鈉、膠體二氧化硅、甘油中的一種或多種的組合，所述的表面活 性劑采用吐溫-80、聚氧乙烯苯基醚中的一種，所述的抗氧化劑采用苯多酚、二丁基羥基甲 苯、丁基羥基茴香醚、硫代二丙酸二月桂酯中的一種或多種的組合，所述的殺菌劑采用青霉 素、鏈霉素、慶大霉素、四環素、土霉素中的一種或多種的組合，所述的防腐劑采用苯酚、苯 甲酸鈉、疊氮鈉中的一種或多種的組合。5. 根據權利要求1或2所述的一種測定抗角蛋白抗體的試劑盒，其特征在于:所述的膠 乳包被抗AKA抗體的制備方法為：用60 mmol/L的甘氨酸緩沖液將粒徑為40-500nm的聚苯乙 烯微球稀釋成為所含的聚苯乙烯微球的質量濃度為1.5%的溶液，然后每毫升溶液中加入 1.0 mg的1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽，在20°C_37°C的條件下反應6小 時，使用離心機，在15000 rpm/min的轉速下離心30分鐘，去上清，然后將沉淀懸浮于60 mmol/L的甘氨酸緩沖液中，超聲分散，再使用離心機，在15000 rpm/min的轉速下離心30分 鐘，去上清，將沉淀懸浮于60 mmol/L的甘氨酸緩沖液中，使得溶液中的聚苯乙烯微球的最 終質量濃度為3%，超聲分散，然后邊攪拌邊加入等體積的含8mg/ml的抗抗角蛋白抗體的甘 氨酸緩沖液，混合攪拌，在20 °C_37°C的條件下反應2小時，使得聚苯乙烯微球最終質量濃度 為1.5%，使用離心機，在15000 rpm/min的轉速下離心30分鐘，去上清，將沉淀懸浮于50 mmol/L的甘氨酸緩沖液中，超聲分散，加入牛血清白蛋白，使得牛血清白蛋白的濃度為15g/ L，在4°C的條件下封閉8-16小時，即可制備得到膠乳包被抗AKA抗體。6. 根據權利要求5所述的一種測定抗角蛋白抗體的試劑盒，其特征在于:所述的抗抗角 蛋白抗體為含有能與人抗角蛋白抗體特異性結合的Fab功能部位的單克隆完整抗體或抗體 片段。7. 根據權利要求1或2所述的一種測定抗角蛋白抗體的試劑盒的制備方法和使用方法， 其特征在于:包括以下步驟： (a) 按照下列組分含量配制好試劑： 試劑R1: 緩沖液 15~185 mmol/L 無機鹽離子 150~450 mmol/L 加速劑 5~25 g/L 表面活性劑 0.5~3.0 mL/L 穩定劑 15~25 g/L 螯合劑 28~62 mmol/L 殺菌劑 0.1~3 g/L 抗氧化劑 1~24 g/L 防腐劑 1~9 g/L 抗免疫球蛋白G抗體 0.2~2.2 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 50~150 mmol/L 無機鹽離子 35~165 mmol/L 穩定劑 6~20 g/L 助懸劑 5~45 mmol/L 表面活性劑 0.5~3.0 mL/L 抗氧化劑 1~24g/L 殺菌劑 1~24g/L 防腐劑 0.1~0.9 g/L 膠乳包被抗AKA抗體 1~8 g/L 其溶劑為純化水； (b) 將待測樣本與試劑R1和試劑R2混合，使其充分反應； (c) 用全自動生化分析儀測定反應后的吸光度差值； (d) 根據吸光度變化值計算出樣本中的抗角蛋白抗體的濃度。8. 根據權利要求7所述的一種測定抗角蛋白抗體的試劑盒的制備方法和使用方法，其 特征在于:步驟(b)中，所述的試劑R1與試劑R2的體積比為3:1。9. 根據權利要求7所述的一種測定抗角蛋白抗體的試劑盒的制備方法和使用方法，其特 征在于:步驟(b)中，所述的待測樣本與試劑R1和試劑R2的總體積的體積比在1:5到1:60之間。
【文檔編號】G01N33/68GK106093425SQ201610376093
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年5月31日
【發明人】蔡曉輝, 莊慶華, 吳錚, 徐運
【申請人】安徽伊普諾康生物技術股份有限公司