一種檢測腦卒中發病風險以及發病的生物標志物的檢測方法及其應用
【專利摘要】本發明提供了一種基于體液中酪氨酸水平作為檢測腦卒中發病風險以及腦卒中發病的生物標志物的檢測方法及其應用，包括以下步驟：（1）檢測樣本中外泌體中酪氨酸濃度；（2）將步驟（1）的酪氨酸濃度與已知的腦卒中患者、腦卒中高危人群和健康人群的酪氨酸濃度結果進行對比；（3）根據上述對比結果，完成基于體液中酪氨酸水平作為檢測腦卒中發病風險以及發病的生物標志物的檢測方法。通過檢測腦卒中發病或者高危人群的體液外泌體，如尿液，汗液，唾液等中酪氨酸的含量，從而預測和檢測腦卒中的發病。酪氨酸的水平，和腦卒中的發病以及腦卒中發病的風險成正相關。
【專利說明】
一種檢測腦卒中發病風險以及發病的生物標志物的檢測方法 及其應用
技術領域
[0001] 本發明涉及檢測腦卒中發病風險以及發病的生物標志物，具體是基于檢測體液中 酪氨酸水平，作為檢測腦卒中發病風險以及發病的生物標志物的檢測方法及其應用。
【背景技術】
[0002] 在我國以及世界各國，腦卒中是造成死亡和終生殘疾的最重大疾病之一。缺血性 腦卒中是腦卒中中發病率最高的一類疾病。目前診斷的主要手段是通過核磁共振技術，進 行影像學分析。這種方法，只能去醫院檢測，對于患者很不方便，耗時相對較長、費用較高。 因此，發明一種新型、簡便、快速、可以家用的腦卒中檢測方法，具有重大的社會經濟意義以 及臨床價值。
[0003] 酪氨酸是一種芳香族氨基酸，亦是20種用來合成蛋白質的蛋白氨基酸之一。目前 發現，酪氨酸是某些蛋白磷酸化的重要位點，其磷酸化，去磷酸化的程度與腫瘤細胞密切相 關。酪氨酸的濃度與腦卒中的關系，至今尚未有報道。
【發明內容】
[0004] 本發明人的目的是突破現有技術的難題，提出一種可以用于預測，檢測腦卒中并 且對人體無損傷的新型檢測方法和應用。
[0005] 本發明以腦卒中患者或者腦卒中高危人群其尿液中酪氨酸濃度經生化方法檢測 后顯著高于正常人群，依次作為檢測腦卒中發病風險以及發病的生物標志物的檢測方法和 應用。
[0006] 本發明的具體技術方案是： 一種基于體液中酪氨酸水平作為檢測腦卒中發病風險以及發病的生物標志物的檢測 方法，包括以下步驟： (1) 檢測樣本中體液中酪氨酸濃度； (2) 將步驟(1)的酪氨酸濃度與已知的腦卒中患者、腦卒中高危人群和健康人群的酪氨 酸濃度結果進行對比； (3) 根據上述對比結果，完成基于體液中酪氨酸水平作為檢測腦卒中發病風險以及發 病的生物標志物的檢測方法。
[0007] 進一步的，所述體液檢測樣本是尿液、唾液、汗液、或血液的一種。優選清晨尿液。
[0008] 進一步的，所述檢測方法是通過檢測酪氨酸的各種性質，從而判斷酪氨酸濃度，從 而預測、檢測腦卒中。
[0009] 進一步的，所述檢測方法是通過酪氨酸的特征顯色反應，通過沉淀物顏色變化，判 斷酪氨酸濃度，從而實現腦卒中預測、檢測。
[0010]進一步的，所述檢測方法是通過HPLC(高效夜效色譜法），判斷酪氨酸濃度，從而實 現腦卒中預測、檢測。
[0011] 進一步的，所述檢測方法是通過檢測體液光譜，通過酪氨酸的自熒光，判斷酪氨酸 濃度，從而實現腦卒中預測、檢測。
[0012] 本發明還提供了一種基于體液中酪氨酸水平作為檢測腦卒中發病風險以及發病 的生物標志物的應用。
[0013] 本發明利用體液中酪氨酸濃度，預測高危人群得腦卒中的風險，檢測腦卒中患者 腦卒中，為臨床預測，檢測腦卒中疾病建立基礎，可以極大的降低腦卒中檢測的時間，使患 者或者高危人群可以在家里自行檢測，得到及時治療。同時，本發明提供了檢測方法，作為 一種簡化的酪氨酸濃度檢測方法。既可以在高端精密外泌體酪氨酸的醫學診斷或研究等情 況下得到應用、也可以在便捷尿醫學診斷、家庭用簡易腦卒中檢測等情況下得到應用，具有 性價比高、結果精確并且應用廣泛等良好效果，非常有利于普及。
【附圖說明】
[0014] 圖1:健康人群以及腦卒中病人的尿液酪氨酸濃度。腦卒中病人尿液酪氨酸濃度顯 著高于健康人群。
[0015] 圖2:腦卒中高危人群以及健康人群的尿液酪氨酸濃度。腦卒中高危人群的尿液酪 氨酸濃度顯著高于健康人群。
【具體實施方式】
[0016] -、實驗方法： 1.樣本采集采取腦卒中患者，腦卒中高危人群以及正常人的尿液3ml。
[0017] 2.加入裝有0.5ml顯色液的反應瓶中，瓶中具體反應如下： a. 硫酸汞完全離子化作為汞源用于反應中，酪氨酸被汞化，反應式：
b. 汞離子被亞硝基取代成3-亞硝基-4-羥基苯丙氨酸，游離出汞離子，反應式：
c. 汞離子與3-亞硝基-4-羥基苯丙氨酸發生螯合作用，生成磚紅色螯合物(顯色物質）， 根據該螯合物顏色判定酪氨酸含量。反應式： 3.稍震蕩后靜放5分鐘。
[0018] 4.將沉淀物顏色與標準色板對照以判定結果。
[0019] 5.健康人群的標準色板讀數平均值是3,但是腦卒中人群以及腦卒中高危人群的 讀數平均值在4.5附近。
[0020] 6.統計分析，所有數據按照平均值+標準差的方式給出。數據使用單因素方差分析 進行評估。P值小于〇. 05認為是統計學顯著的。
[0021] 二、實驗結果和討論 圖1腦卒中人群尿液酪氨酸含量顯著高于健康人群。
[0022] 圖2腦卒中高危人群尿液酪氨酸含量顯著高于健康人群。
[0023] 本發明公開了一種基于體液中酪氨酸水平作為檢測腦卒中發病風險以及發病的 生物標志物的檢測方法及其應用。腦卒中高危人群以及腦卒中人群相較于健康人群，尿液 中酪氨酸濃度顯著高于健康人群。本發明首次提出用酪氨酸濃度來檢測預測腦卒中的方法 和應用，解決了目前檢測腦卒中只能在醫院用影像手段的局限性。為家庭用腦卒中檢測提 供了很大的便利。
【主權項】
1. 一種基于體液中酪氨酸水平作為檢測腦卒中發病風險以及發病的生物標志物的檢 測方法，包括以下步驟： (1) 檢測樣本中外泌體中酪氨酸濃度； (2) 將步驟(1)的酪氨酸濃度與已知的腦卒中患者、腦卒中高危人群和健康人群的酪氨 酸濃度結果進行對比； (2)根據上述對比結果，完成基于體液中酪氨酸水平作為檢測腦卒中發病風險以及發 病的生物標志物的檢測方法。2. 如權利要求1所述的方法，其特征在于:所述體液是尿液、唾液、汗液、或血液的一種。3. 如權利要求2所述的方法，其特征在于:所述體液的尿液取自清晨尿液。4. 如權利要求1所述的方法，其特征在于:所述檢測樣本中體液中酪氨酸濃度，是通過 酪氨酸的特征顯色反應，通過沉淀物顏色變化，判斷酪氨酸濃度。5. 如權利要求1所述的方法，其特征在于:所述檢測樣本中體液中酪氨酸濃度，是通過 HPLC、生化反應、自熒光檢測等所有方法，判斷酪氨酸濃度。6. 如權利要求1所述的方法，其特征在于:所述檢測樣本中體液中酪氨酸濃度，是通過 HPLC、生化反應、自熒光檢測等所有方法，判斷酪氨酸濃度。7. -種基于體液中酪氨酸水平作為檢測腦卒中發病風險以及發病的生物標志物的應 用。
【文檔編號】G01N33/68GK106093024SQ201610411494
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月12日 公開號201610411494.1, CN 106093024 A, CN 106093024A, CN 201610411494, CN-A-106093024, CN106093024 A, CN106093024A, CN201610411494, CN201610411494.1
【發明人】殷衛海, 吳丹紅, 蔡林衛, 張銘超
【申請人】昂朗生物科技（上海）有限公司