一種hpv免疫膠體金診斷試紙條及其制備方法和檢測方法

一種hpv免疫膠體金診斷試紙條及其制備方法和檢測方法
【專利摘要】本發明公開了一種快速、準確的HPV免疫層析檢測試紙條及制備方法，目的之二是提供一種基于免疫層析技術的HPV檢測法，本發明首次將免疫層析技術應用于HPV抗原蛋白檢測，實現了高特異性、高靈敏的檢測性能。與現有文獻報道的巴氏和HPV?DNA檢測相比，其發明的優點主要包括：檢測時間短（5~20分鐘）；不需要任何特殊儀器；操作簡便，只需一步反應，操作人員無需培訓，檢測成本低；對溫度無特殊需求，無須冷凍，儲存運輸方便，室溫可保存24個月。
【專利說明】
一種HPV免疫膠體金診斷試紙條及其制備方法和檢測方法
[0001]
技術領域
[0002] 本發明涉及免疫分析檢測領域。具體而言，本發明涉及一種檢測HPV的免疫層析 檢測試紙的制備方法及應用，一種應用雙抗夾心法原理的膠體金免疫層析法。
【背景技術】
[0003] HPV感染與宮頸癌的關系最初在19世紀70年代提出，此后許多流行病學和分子學 研究均毫無疑問的證實了人乳頭瘤病毒與宮頸癌的病因學聯系。Bosch和Manos等通過收集 來自22個國家的宮頸癌活檢標本作PCR檢測，發現99.7%的腫瘤中都可以檢測到人乳頭瘤病 毒DNA，而且各國間無顯著差異。這是迄今為止所報道人類腫瘤致病因素中的最高檢出百 分數，同時表明人乳頭瘤病毒感染與宮頸癌的相關具有普遍意義。
[0004] HPV感染是宮頸上皮內瘤樣病變(CIN)和宮頸癌的明確病因。Mattheus等報道，在 99.7%的浸潤性宮頸癌中可以檢測到13種高危型HPV，來自世界各國的宮頸癌組織標本的 研究發現，人乳頭瘤病毒16和18型感染率最高，在檢出的所有型別中，人乳頭瘤病毒16占 50%，人乳頭瘤病毒18占14%，人乳頭瘤病毒45占8%，人乳頭瘤病毒31占5%，其它型別的人乳 頭瘤病毒占23%。人乳頭瘤病毒的型別與宮頸癌的病理類型有關，在宮頸鱗狀上皮細胞癌中 人乳頭瘤病毒16占主要地位(51%的鱗狀上皮細胞癌標本），而在宮頸腺狀上皮細胞癌(56% 腺狀上皮細胞癌標本)和宮頸腺鱗細胞癌(39%腺鱗細胞癌標本）中人乳頭瘤病毒18占主要 地位。人乳頭瘤病毒16、18型感染很普遍，沒有明顯的地區差異，有些人乳頭瘤病毒型別有 地理位置的差異。我國人乳頭瘤病毒感染型別中52和58型檢出率較高。在臺灣進行的一項 研究也表明，52和58型較常見。人乳頭瘤病毒45型在非洲西部宮頸癌組織中很常見，而人乳 頭瘤病毒39和59型僅在美洲的中部和南部宮頸癌組織中出現。
[0005] 宮頸癌與高危型HPV感染關系密切，其自然病程有一個從宮頸上皮不典型增生到 原位癌再到浸潤癌的一個連續發生、發展過程大約有10年的時間，所以做好癌前篩查是防 治宮頸癌的關鍵所在。高危型HPV感染可導致宮頸癌及宮頸癌前病變(CIN)，而持續性HPV感 染與CIN病變進展的關系又甚為密切，故高危型HPV檢測對宮頸癌的早期篩查、防治及在預 測CIN的自然轉歸、治療后的隨診上都有重要的作用。目前采用的HPV檢測方法都有共同的 局限：費時和操作程序復雜。
[0006] 病例-對照研究是檢驗病因假說的一種分析流行病學方法。不論是在拉丁美洲采 用準確性較低的檢測技術(FISH)進行的大規模流行病學研究，還是采用較高靈敏度檢測技 術(PCR，HC-II)的研究，所有的結果均顯示人乳頭瘤病毒感染與宮頸癌有明顯的相關性(0R =3.6-254.2)，尤其是人乳頭瘤病毒16型和18型。Mufioz等在哥倫比亞和西班牙（宮頸癌發病 率前者比后者高8倍)進行的人群基礎上的病例-對照研究中，包括436例組織學確診的病例 和隨機抽取的387例來自病例所在人群的對照，同時采用了三種人乳頭瘤病毒DNA檢測技 術(ViraPap、SH和PCR)。這一研究避免了人群和地區的選擇性偏移，同時又考慮到檢測技 術間的差異，在調整了一些混雜因素后三種檢測方法都得出相同的結論:在兩個國家中人 乳頭瘤病毒16，18,31，33和35型與宮頸癌均呈強相關性，提示人乳頭瘤病毒與宮頸癌具有 病因關系。隊列研究是用來驗證疾病病因假說另一種重要的分析流行病學方法，它能夠直 接體現人乳頭瘤病毒感染與宮頸癌發生的時序性，更有力地驗證病因假說。Campion對100 例輕度宮頸上皮內病變(CIN I)隨訪了兩年多，56%的人乳頭瘤病毒16,18陽性者進展為重 度宮頸上皮內病變(CIN III)，而人乳頭瘤病毒6陽性的對象僅20%發生進展。Murthy等用原 位雜交方法的研究顯示，63例宮頸不典型增生發展為原位癌，對組織標本檢測人乳頭瘤病 毒16/18,陽性率為68.3%，而44例非進展性不典型增生其陽性率為27.3%，相對危險度為5.9 (95%CI:2.5-14.1)，具有顯著的統計學意義。此外，在細胞學和分子生物學方面也獲得了人 乳頭狀瘤病毒致癌的有力證據。1995年WHO和IARC已將人乳頭瘤病毒確定為是宮頸癌的病 因。
[0007] 文獻報道HPV檢測方法有兩種，巴氏涂片(Pap Smear)及HPV-DNA檢測技術。巴氏涂 片指宮頸脫落細胞涂片，是指從子宮頸部取少量的細胞樣品，放在玻璃片上，然后在顯微 鏡下研究是否異常。巴氏涂片雖然造價比較低，但靈敏度低，特異度不高，而且需要評估細 胞學片子的病理學家。
[0008] HPV-DNA檢測技術是取病變組織和局部組織粘液、分泌物通過PCR技術進行HPV-DNA檢測，該技術具有高靈敏度，但特異度低，檢測費用昂貴，且造成高昂的過度治療費用。 [0009] 免疫層析法（Immunochromatography)是近幾年來興起的一種快速診斷技術，其原 理是將特異的抗體先固定于硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜的某一區帶，當干燥的纖維素一 端浸入樣品（尿液或血清)后，由于毛細管作用，樣品將沿著該膜向前移動，當移動至固定有 抗體的區域時，樣品中相應的抗原即與該抗體發生特異性結合，型成肉眼可見的檢測帶。現 有的免疫層析試紙條產品常用的示蹤標記粒子有納米金、納米硒、彩色膠乳等等，其中納米 金應用最為廣泛，納米金也稱為膠體金。
[0010] 以膠體金作為示蹤標記物的免疫層析技術特稱為免疫膠體金技術 (Immunecolloidal gold technique，GICT)。膠體金是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑如白磷、 抗環血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，聚合成為特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一 種穩定的膠體狀態而得名。膠體金在弱堿環境下帶負電荷，可與蛋白質分子的正電荷基團 型成牢固結合，由于這種結合式靜電結合，所以不影響蛋白質的生物特性。膠體金除了與蛋 白質結合以外，還可以與許多其他生物大分子結合，如3?六、？撤、0)1^。根據膠體金的一些物 理性狀，如高電子密度、顆粒大小、型狀及顏色反應，加上結合物的免疫和生物學特性，因而 使膠體金廣泛地應用于免疫學、組織學、病理學和細胞生物學等領域。
[0011] 與現有技術巴氏涂片和HPV-DNA檢測相比，免疫層析法檢測的優點主要包括： (1) 使用方便快速，便于基層使用和現場使用，所有反應能在20分鐘內完成； (2) 成本低，不需要特殊的儀器設備； (3) 應用范圍廣，可適應多種檢測條件； (4) 可以進行多項檢測，弱陽性樣本比較難獲得，多項檢測可以減省樣品，降低成本； (5) 標記物穩定，標記樣品在4 °C儲存兩年以上，無信號衰減現； (6) 膠體金本身為紅色，不需要加入發色試劑，省卻了酶標的致癌性底物及終止液的步 驟，對人體無毒害； 在自體免疫性疾病診斷方面，已出現較多的免疫層析試紙，但基于HPV檢測的免疫層析 試紙在國內外市場上仍沒有問市。
[0012]

【發明內容】

[0013] 本發明所要解決的技術問題是為了克服現有方法的不足，將免疫層析法應用到 HPV的檢測中，通過把抗HPV抗體蛋白包被在結合墊或分析膜的檢測帶上，實現對樣品中HPV 的高特異、高靈敏度、高準確性的檢測，快速篩查HPV陽性標本，為宮頸癌的篩查和治療提供 快速的輔助診斷。
[0014] 本發明的目的之一在于提供一種快速、準確的HPV免疫層析檢測試紙條及制備方 法，目的之二是提供一種基于免疫層析技術的HPV檢測法。
[0015] 作為本發明的一種HPV免疫層析檢測試紙條，包括樣品墊、結合墊、分析膜、吸水墊 和底板，分析膜上設置檢測帶和質控帶，所述底板的上部貼合有分析膜，分析膜上部的兩端 分別貼合有結合墊和吸水墊，結合墊上部的一端貼合有樣品墊。
[0016] 所述的結合墊結合納米金標記物，結合墊為一層。
[0017] 所述HPV免疫層析檢測試紙條的制備方法，包括以下步驟： 步驟1:結合墊(2)的制備 (1) 納米金標記物的制備:用納米金溶液標記HPV單克隆抗體 (2) 結合墊(2)的制備:玻璃纖維膜或聚脂膜作為結合墊，將步驟(1)制備的納米金標記 物，用噴涂儀噴涂在預處理的玻璃纖維膜或聚脂膜上，干燥備用。
[0018]步驟2.分析膜(3)制備 A.檢測帶T線(4)制備:根據結合墊標記蛋白類型選擇檢測帶T線包被抗體，如結合墊上 的結合蛋白含HPV單克隆抗體，檢測帶T線包被蛋白是抗人HPV IgG抗體。
[0019] B.質控帶C線(5)制備:根據結合墊標記蛋白類型選擇質控帶C線包被抗體，如結合 墊上的標記蛋白是抗人HPV IgG抗體，質控帶C線的標記蛋白為對應的抗人IgG抗體的抗體。
[0020] 步驟3.樣品墊制備 將玻璃纖維膜或聚脂膜經處理液浸漬烘干備用，或者直接使用。
[0021] 步驟4.試紙條組裝 把步驟1~3所制做完成的材料，按圖1搭接，根據底版的規格切割成一定的長度和寬 度，安裝在底板和卡殼里。優選地，試紙條長度為6 ? 5mm，寬度為3mm或4mm〇 [0022]所述的抗HPV的抗體是以HPV為免疫源，鼠源、兔源、羊源、馬源、駱駝源或豚鼠源中 的一種或多種單克隆伉體或多克隆抗體。
[0023]所述的抗人IgG抗體的抗體是指能與該抗體形成免疫復合物的抗體，比如該抗人 IgG抗體是鼠抗人IgG，它的抗體是羊抗鼠IgG的抗體或其他非鼠源的鼠IgG抗體。
[0024]在本發明的另一方面，提供一種HPV檢測方法，用本發明第一方面方法及步驟所制 備的HPV免疫層析試紙條，對待檢樣品進行檢測，具體步驟： (1) 樣本處理:取血清、血漿或全血樣本； (2) 把上述處理過的樣品滴加到試紙條的樣品墊上，靜置5~20分鐘，觀察T線和C線； (3) 結果判讀:T線和C線均顯現，結果為陽性;T線不顯現，C線顯現，結果為陰性;T線和 C線均不顯現，提示試紙失效。
[0025] 本發明的檢測原理： 選用金標標記抗HPV抗體，噴涂在結合墊上，制呈結合墊;在檢測帶上包被能與標記抗 體，目的物蛋白復合物發生免疫反應的抗體，當把待檢樣本加樣到樣品墊上后，樣本中的 HPV蛋白與結合墊上的標記抗體形成免疫復合物，由于毛細管效應，該復合物向吸水墊方向 泳動，此復合物與包被與檢測帶T線上的抗體發生特異性免疫結合反應，形成金標抗HPV抗 體-HPV抗原蛋白-抗HPV抗體三聯體復合物而被截留在檢測在線，逐漸富集形成較深的紫 紅色條帶；由于毛細效應繼續泳動向前，金標標記抗HPV抗體與包被在質控線上的IgG多抗 發生特異性的免疫反應被截留，逐漸富集在質控線上形成較深的紫紅色條帶，多余的未結 合的物質繼續層析到吸水墊上，因此在檢測線和質控線都出線條帶的判為陽性結果;若血 清樣品中不含有HPV，標記抗體到達檢測線時，不與包被在檢測線上的相應抗體發生免疫反 應，因此在檢測線處沒有出現顯色帶，而金標標記HPV抗體繼續泳動向前與包被于質控線處 的相應包被IgG多抗發生特異的免疫反應而被截留，逐漸富集在質控線上形成紫紅色條帶， 因此僅在質控上出現條帶判為陰性結果。
[0026] 本發明的有益效果:本發明首次將免疫層析技術應用于HPV抗原蛋白檢測，實現了 高特異性、高靈敏的檢測性能。與現有文獻報道的巴氏和HPV-DNA檢測相比，其發明的優點 主要包括:檢測時間短(5~20分鐘）;不需要任何特殊儀器，；操作簡便，只需一步反應，操作 人員無需培訓，檢測成本低;對溫度無特殊需求，無須冷凍，儲存運輸方便，室溫可保存24個 月。
【附圖說明】
[0027]圖1本發明的側面結構示意圖1。
[0028] 圖2為本發明檢測帶為1條時陽性和陰性結果示意圖。
[0029] 圖2中a是條帶示意圖;b為陽性結果;c為陰性結果;d和e表示試紙條失效。
[0030]
【具體實施方式】
[0031] 本發明所述的HPV檢測免疫層析試紙，如圖1所示，該試紙是在底板7上由一側向另 一側順次相互搭接地粘貼分析膜3、結合墊2、樣品墊1、吸水墊6。
[0032] 結合墊2上噴涂有金標標記蛋白，分析膜3上設置檢測帶4和質控帶5,根據結合墊 上標記蛋白的不同，選用相應的檢測帶包被蛋白和質控帶包被蛋白。優選地，在結合墊上噴 涂的標記蛋白為鼠抗人HPV抗體，則檢測帶上的包被蛋白為抗人HPV單克隆抗體，質控帶上 的包被蛋白為抗鼠IgG多克隆抗體。
[0033]下面結合具體實施例和附圖，進一步闡述本發明。
[0034]實施例1金標試紙各組分制備： 1膠體金液制備：將〇 . 01%的HAuCl4溶液加熱至沸騰，迅速加入每100mL HAuCl4溶液加 入適量的還原劑溶液，顏色從藍色，然后淺藍、藍色，再加熱出現紅色，煮沸7~lOmin出現透 明的橙紅色。再用超濾或微孔濾膜(〇.45uM)過濾，以除去其中的聚合物和其它可能混入的 雜質。制備好的膠體金外觀應純凈、透亮、無沉淀和漂浮物，液面出現油狀物和大量黑色顆 粒狀沉淀物雜質時棄用。
[0035]其中所使用的還原劑可以為檸檬酸三鈉、鞣酸-檸檬酸三鈉、白磷，優選使用檸檬 酸三鈉，更優選地使用1%檸檬酸三鈉。其中所用的玻璃容器應絕對清潔，用前需經酸洗。其 水應為去離子超純水。
[0036]膠體金溶液制備過程中，各溶液的配制方法如下:HAuC14的配制：用超純水溶解氯 金酸，配成1%溶液，置4°C備用，有效期三個月；lOOOmLl% HAuCl4溶液配方：10g HAuCl4、超純 水定容至lOOOmL; 1%梓檬酸三鈉（Sodium Citrate)的配制：用超純水溶解Sodium Citrate， 配成1 %溶液，0.22uM膜濾過，現配現用。
[0037]金標蛋白制備:本發明待標記金標蛋白包括但不限于鼠抗人HPV IgG抗體、兔抗人 冊￥186抗體、羊抗人冊￥186抗體。用0.謂碳酸鈉調節膠體金?117.0~8.5，按每毫升膠體金 溶液緩慢加入5~25ug待標記蛋白，混勻，靜置10~30min，然后加入BSA至終濃度0.5~1%，混 勾，靜置5~10min，3000rpm離心5min，去沉淀，將上層溶液轉至新管，9000rpm離心30min，去 上清，加入重懸液至原量，將溶液移至新管，9000rpm再次離心30min，加入用十分之一初始 體積的保存液將沉淀重懸，置4 °C備用。
[0038] 3分析膜制備：分析膜選擇：分析膜的材質可選硝酸纖維素膜(NC)或醋酸纖維素 膜，商品化的硝酸纖維素膜包括3&54￡99、'\￥11&1：1]1&11811111、111；[111。0代]\1135、8&1'1:〇1'；[1130附40 等。使用哪種規格的具體NC膜或醋酸纖維素膜不是本發明的關鍵，但是在每次測定中，上述 幾種NC膜可以作為優選。不同廠家使用的含不同表面活性劑的不同緩沖液處理的膜，與所 用檢測線抗體溶液親和力有不同程度的差距，也會很大程度造成線條不均勻，拖帶或是彌 散的現象，因此運用組裝試紙來選擇優選的NC膜。
[0039]分析膜制備：用包被緩沖液稀釋檢測待包被蛋白至0.5~1.5mg/mL濃度，用劃膜噴 金儀，距離結合墊lcm處，以0.5~1.5uL/cm噴涂于膜上，構成檢測帶4，質控帶5，檢測帶與質 控帶距離約5mm，質控帶同時距離吸水墊約1 cm。分析膜37 °C烘干，封裝備用。
[0040] 所使用的包被緩沖液可以是硼酸鹽、碳酸鹽、磷酸鹽、Tris-HCl或Tris-磷酸鹽等， 緩沖液的作用是提供一定pH和離子強度使蛋白牢固包被于NC膜，緩沖液pH值一般約為6~ 9.5范圍內，優選為6.5~7.5的中性緩沖范圍內，且最優選緩沖液的pH值為7.0~7.4范圍內。 [0041 ] A分析膜1: 檢測帶T線:將鼠抗人HPV單克隆抗體與pH為7.2的10mM PB緩沖溶液混合配制成為濃度 為0.4mg/mL混合溶液，噴在硝酸纖維素膜上，涂布量為luL/cm。
[0042]質控帶C線:將羊抗鼠IgG多克隆抗體與pH為7.5的10mM PB緩沖溶液混合配制成為 濃度為〇. 5mg/mL混合溶液，噴在硝酸纖維素膜上，涂布量為luL/cm。
[0043] B分析膜2 檢測帶T線:將兔抗人HPV單克隆抗體與pH為7.2的10mM碳酸鹽緩沖溶液混合配制成為 濃度為〇. 4mg/mL混合溶液，噴在硝酸纖維素膜上，涂布量為luL/cm。
[0044] 質控帶C線：用pH為7.5的10mM碳酸鹽緩沖溶液配制羊抗兔IgG多克隆抗體，濃度為 0 ? 5mg/mL，噴在NC膜上，涂布量為luL/cm。
[0045] C分析膜3 檢測帶T線：用pH為7.2的10mM PB緩沖溶液配制羊抗人HPV單克隆抗體，濃度為0.4mg/ mL，噴在硝酸纖維素膜上，涂布量為1.2uL/cm。
[0046]質控帶C線：用pH為7.5的lOmM TO緩沖溶液配制馬抗羊IgG多克隆抗體，濃度分別 為0.5mG/mL和0.6mG/mL，1:1混合，噴在硝酸纖維素膜上，涂布量為luL/cm。
[0047] 4結合墊的制備 結合墊的處理:結合墊材質為玻璃纖維紙或聚酯膜，用配制好的結合墊處理液浸泡結 合墊，在37°C下lh烘干后，將抗體或者蛋白以4uL/cm的用量噴涂在預處理的聚酯膜上，37°C 干燥lh后得結合墊，結合墊置于2~8 °C的環境下備用;結合墊處理液的組成為:pH為7.0~9.0 的10mM TO緩沖溶液，含1%BSA，10~20%蔗糖，0.1% Tween-20。結合墊也可不做預處理，直接 使用，本次所用結合墊材質為聚酯膜。
[0048] A結合墊1聚酯膜，單層，鼠抗人HPV單抗； B結合墊2聚酯膜，單層，兔抗人HPV單抗； C結合墊3聚酯膜，單層，羊抗人HPV單抗。
[0049] 5樣品塾的制備： 樣品墊材質為玻璃纖維紙或聚酯膜，用配制好的樣品墊處理液浸泡樣品墊，在37°C下 lh烘干，樣品墊緩沖液的組成為:pH為7.0~9.0的10mM TO緩沖溶液，含1%BSA，10~20%蔗糖， 0.1%TWeen-20。樣品墊也可不做預處理，直接使用，此次所用樣品墊材質為玻璃纖維素膜。
[0050] 實施例2膠體金標記抗HPV抗體蛋白檢測試紙1~3制備 用裁切機將實施例1制備的并干燥的樣品墊、結合墊、分析膜、吸水紙分別剪切1.7cm、 0.8cm、2.5cm和1.5cm寬的窄條，按圖1方式搭接成大板，用切條機將大板切成單人份，每人 份寬度根據底板卡殼的不同而異，本發明優選3_寬度。將單人份已切好的試紙組裝在備好 的試紙卡里，使加樣窗對應試紙的樣品墊，結果顯示窗對應檢測區和質控區，組裝時溫度控 制在25~37 °C，濕度20~30%。
[0051 ]金標試紙條1~3的各組分如下表：
實施例3樣本處理 血清樣本:取全血1~5mL于血清米集管中，靜置30min~2h，3000~5000g離心5~10min，取 上清即得。根據試紙條的檢測精度，把樣本用加樣緩沖液稀釋〇~100倍，取50~100uL滴加到 試紙條的加樣孔中，靜置5~20min后觀察結果。
[0052] 血漿樣本：取全血1~5mL于枸櫞酸鈉或肝素鈉抗凝管中混勻，1000~3000g離心5~ lOmin，取上清即得到血漿樣本。根據試紙條的檢測精度，把樣本用加樣緩沖液稀釋0~100 倍，取50~100uL滴加到試紙條的加樣孔中，靜置5~20min后觀察結果。
[0053] 全血標本:取指尖或耳垂新鮮血約50uL，滴加到加樣孔中，馬上用50uL加樣緩沖液 滴加到加樣孔中稀釋，靜置5~20min后觀察結果。
【主權項】
1. 一種HPV免疫層析檢測試紙條，包括樣品墊（1)、結合墊(2)、分析膜(3)、吸水墊(6)、 底板(7)、檢測帶T線(4)和質控帶C線(5)，所述底板(7)的上部貼合有分析膜(3)，所述分析 膜(3)上部的兩端分別貼合有結合墊(2)和吸水墊(6)，結合墊(2)上部的一端貼合有樣品墊 (1)，所述檢測帶T線(4)和質控帶C線（5)設置在分析膜(3)上，其特征在于:HPV IgG單克隆 抗體結合在結合墊(2)上或包被在檢測帶T線(4)上。2. 根據權利要求1所述的HPV免疫層析檢測試紙條，其特征在于:所述的結合墊(2)包被 膠體金標記物或膠乳標記物。3. 根據權利要求1所述的HPV免疫層析檢測試紙條，其特征在于:所述的結合墊(2)為一 層，且與分析膜搭接。4. 一種HPV免疫層析檢測試紙條的制備方法，包括如下步驟： 步驟1:結合墊(2)的制備： (1) 納米金標記物的制備:用納米金溶液標記HPV單克隆抗體； (2) 結合墊(2)的制備:玻璃纖維膜或聚脂膜作為結合墊，將步驟（1)制備的納米金標 記物，用噴涂儀噴涂在預處理的玻璃纖維膜或聚脂膜上，干燥備用； 步驟2:分析膜(3)的制備： A、 檢測帶T線(4)制備:根據結合墊標記蛋白類型選擇檢測帶T線包被抗體，如結合墊上 的結合蛋白含HPV單克隆抗體，檢測帶T線包被蛋白是抗人HPV IgG抗體； B、 質控帶C線(5)制備:根據結合墊標記蛋白類型選擇質控帶C線包被抗體，如結合墊上 的標記蛋白是抗人HPV IgG抗體，質控帶C線的標記蛋白為對應的抗人IgG抗體的抗體； 步驟3:樣品墊（1)制備：將玻璃纖維膜或聚脂膜經處理液浸漬烘干備用；或者直接使 用； 步驟4:把步驟1~3所制作完成材料，根據底板的規格切割成一定的長度和寬度，安裝 在底板和卡殼里。5. 根據權利要求4所述的一種HPV免疫層析檢測試紙條的制備方法，其特征在于:所述 的抗人IgG抗體為鼠源、兔源、羊源、馬源、駱駝源或豚鼠源中的一種或多種單克隆抗體。6. 根據權利要求4所述的一種HPV免疫層析檢測試紙條的制備方法，其特征在于:所述 的抗人IgG抗體的抗體是指能與該抗體形成免疫復合物的抗體。7. -種HPV免疫層析檢測方法，其特征在于：用根據權利要求1~3所述的免疫層析試紙 條對待檢樣品進行檢測，具體步驟包括： (1) 樣本處理:取血清、血漿、或全血樣本，用加樣緩沖液稀釋1~100倍； (2) 把上述處理過的樣品滴加到試紙條的樣品墊上，靜置5~30分鐘，觀察T線和C線； (3) 結果判讀:T線和C線均顯現結果為陽性;T線不顯現，C線顯現，結果為陽性;T線和C 線均不顯現或其他現象，提示試紙失效。
【文檔編號】G01N33/569GK106053806SQ201610583623
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年7月23日 公開號201610583623.5, CN 106053806 A, CN 106053806A, CN 201610583623, CN-A-106053806, CN106053806 A, CN106053806A, CN201610583623, CN201610583623.5
【發明人】王峰, 王玉立, 包媛, 張建華
【申請人】蘇州東尼生物技術有限公司