一種基于石墨炔甲苯胺藍復合材料的真菌毒素免疫傳感器的制備方法及應用
【專利摘要】本發明涉及一種基于石墨炔甲苯胺藍復合材料的真菌毒素免疫傳感器的制備方法及應用，屬于新型生物傳感檢測技術領域。石墨炔的sp雜化結構，使其具有無順反異構體和高共軛等優點。同時利用甲苯胺藍與石墨炔良好的π?π共軛作用，實現了信號分子的牢固固定，減少了因結合不穩定造成的信號誤差。因此，基于石墨炔甲苯胺藍復合材料的電化學免疫傳感器實現了對真菌毒素的靈敏檢測。
【專利說明】
一種基于石墨炔甲苯胺藍復合材料的真菌毒素免疫傳感器的制備方法及應用
技術領域
[0001]本發明涉及一種基于石墨炔O甲苯胺藍GyOTB復合材料的真菌毒素免疫傳感器的制備方法及應用，采用石墨炔@甲苯胺藍GyOTB復合材料作為檢測基底材料，增強導電性的同時，又使得信號分子甲苯胺藍成功固定在傳感表面上。羥丙基殼聚糖的使用，既穩固了基底材料，又使得抗體分子通過戊二醛成功交聯在傳感表面上，實現了真菌毒素免疫傳感器的構建，屬于新型功能材料與生物傳感檢測技術領域。
【背景技術】
[0002]真菌毒素是真菌在食品或飼料里生長所產生的代謝產物，對人類和動物都有害。食用真菌毒素污染的食品，會導致白細胞缺乏病，嚴重者會導致癌變。所以，對于食品中真菌毒素的檢測，刻不容緩。
[0003]目前已有的真菌毒素的檢測方法很多，但是大多都是需要大型設備和專業的操作人員。電化學免疫傳感器，因其操作方便，簡單易行，可以實施在線檢測等特點，能夠適用于食品藥品中真菌毒素的測試。
[0004]本發明采用石墨炔與甲苯胺藍良好的31-31共軛作用形成的復合材料為基底材料，實現了信號分子的高通量負載，通過羥丙基殼聚糖的修飾，減少了因結合不穩定造成的信號誤差。實現了對真菌毒素的靈敏檢測。該方法具有成本低、特異性好、操作方便、檢測快速等優點，而且制備過程較為簡單，有效克服了目前真菌毒素檢測方法的不足。
【發明內容】
[0005]本發明的目的之一是基于石墨炔O甲苯胺藍GyOTB復合材料為基底材料，構建了一種無酶無標記，超靈敏的電化學免疫傳感器。
[0006]本發明的目的之二是將所構建的傳感器用于真菌毒素的檢測，實現了對多種真菌毒素的超靈敏檢測。
[0007]本發明的目的之三是將所構建的傳感器用于食品藥品等實際樣品中真菌毒素的檢測，實現了靈敏檢測。
[0008]本發明的技術方案如下:
1.一種基于石墨炔甲苯胺藍復合材料的真菌毒素免疫傳感器的制備方法及應用(I)用Al2O3拋光粉將直徑4 mm的玻碳電極打磨平滑，超純水清洗干凈；將5?8 yU0.4?4mg/mL石墨炔O甲苯胺藍GyOTB復合材料滴加到電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干成膜；
(2)滴加3?8uL，質量分數為0.1%?5%的羥丙基殼聚糖在電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干；
(3)滴加I?5uL，質量分數為0.1%?1%的戊二醛水溶液在電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干；
(4)依次滴加5?8UL真菌毒素抗體，5?8 UL、質量分數為0.5%?3%的牛血清白蛋白BSA溶液于電極表面，超純水沖洗，4 V冰箱中晾干；
(5)滴加5?8 yL、0.06?40 ng/mL的一系列不同濃度的真菌毒素抗原標準溶液至電極表面，超純水沖洗，4 V冰箱中晾干。
[0009]2.石墨炔@甲苯胺藍GyOTB復合材料的制備
將I?10 mg的石墨炔Gy和0.5 ~ 5 mg的甲苯胺藍TB加入0.5 ~ 5 mL的超純水中，室溫振蕩24 h，得到復合材料石墨炔O甲苯胺藍GyOTB。
[0010]3.一種基于石墨炔甲苯胺藍復合材料的真菌毒素免疫傳感器的制備方法及應用，所述的真菌毒素，選自下列之一:嘔吐霉素，玉米赤霉稀酮，伏馬毒素，黃曲霉毒素BI，赭曲霉毒素。
[0011]本發明的有益成果
(I)石墨炔的使用，實現了對傳感器底層比表面積成功放大，同時能夠很好的促進電極表面的電子傳遞。
[0012](2)石墨炔O甲苯胺藍GyOTB復合材料的使用，使得信號分子得以增加，擴展了傳感器的線性范圍，降低了檢出限。
[0013](3)羥丙基殼聚糖的使用，增強了傳感器表面GyOTB復合材料的牢固固載，同時實現了對抗體的化學鍵連接，實現了超靈敏穩定檢測。
【具體實施方式】
[0014]實施例1
一種基于石墨炔甲苯胺藍復合材料的真菌毒素免疫傳感器的制備方法及應用
(1)用Al2O3拋光粉將直徑4mm的玻碳電極打磨平滑，超純水清洗干凈；將5 yU0.4mg/mL石墨炔O甲苯胺藍GyOTB復合材料滴加到電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干成膜；
(2)滴加3nL，質量分數為0.1%的羥丙基殼聚糖在電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干；
(3)滴加IuL，質量分數為0.1%的戊二醛水溶液在電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干；
(4)依次滴加5UL真菌毒素抗體，5 uL、質量分數為0.5%的牛血清白蛋白BSA溶液于電極表面，超純水沖洗，4 0C冰箱中晾干；
(5)滴加5yL、0.06?40 ng/mL的一系列不同濃度的真菌毒素抗原標準溶液至電極表面，超純水沖洗，4 0C冰箱中晾干。
[0015]實施例2
一種基于石墨炔甲苯胺藍復合材料的真菌毒素免疫傳感器的制備方法及應用
(1)用Al2O3拋光粉將直徑4mm的玻碳電極打磨平滑，超純水清洗干凈;將7 pL,3 mg/mL石墨炔O甲苯胺藍GyOTB復合材料滴加到電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干成膜；
(2)滴加6nL，質量分數為2.5%的羥丙基殼聚糖在電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干；
(3)滴加4uL，質量分數為0.7%的戊二醛水溶液在電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干；
(4)依次滴加7yL真菌毒素抗體，7 yL、質量分數為2%的牛血清白蛋白BSA溶液于電極表面，超純水沖洗，4 0C冰箱中晾干；
(5)滴加7yL、0.06?40 ng/mL的一系列不同濃度的真菌毒素抗原標準溶液至電極表面，超純水沖洗，4 0C冰箱中晾干。
[0016]實施例3 一種基于石墨炔甲苯胺藍復合材料的真菌毒素免疫傳感器的制備方法及應用
(1)用Al2O3拋光粉將直徑4mm的玻碳電極打磨平滑，超純水清洗干凈;將8 pL,4 mg/mL石墨炔O甲苯胺藍GyOTB復合材料滴加到電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干成膜；
(2)滴加8nL，質量分數為5%的羥丙基殼聚糖在電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干；
(3)滴加5uL，質量分數為1%的戊二醛水溶液在電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干；
(4)依次滴加8yL真菌毒素抗體，8 yL、質量分數為3%的牛血清白蛋白BSA溶液于電極表面，超純水沖洗，4 0C冰箱中晾干；
(5)滴加8yL、0.06?40 ng/mL的一系列不同濃度的真菌毒素抗原標準溶液至電極表面，超純水沖洗，4 0C冰箱中晾干。
[0017]實施例4
石墨炔@甲苯胺藍GyOTB復合材料的制備
將I mg的石墨炔Gy和0.5 mg的甲苯胺藍TB加入0.5 mL的超純水中，室溫振蕩24 h，得到復合材料石墨炔@甲苯胺藍GyOTB。
[0018]實施例5
石墨炔@甲苯胺藍GyOTB復合材料的制備
將5 mg的石墨炔Gy和2 mg的甲苯胺藍TB加入3 mL的超純水中，室溫振蕩24 h，得到復合材料石墨炔@甲苯胺藍GyOTB。
[0019]實施例6
石墨炔@甲苯胺藍GyOTB復合材料的制備
將10 mg的石墨炔Gy和5 mg的甲苯胺藍TB加入5 mL的超純水中，室溫振蕩24 h，得到復合材料石墨炔@甲苯胺藍GyOTB。
[0020]實施例7
一種基于石墨炔甲苯胺藍復合材料的真菌毒素免疫傳感器的制備方法及應用，所述的真菌毒素為嘔吐霉素。
[0021 ] 實施例8
一種基于石墨炔甲苯胺藍復合材料的真菌毒素免疫傳感器的制備方法及應用，所述的真菌毒素為伏馬毒素。
[0022]實施例9
一種基于石墨炔甲苯胺藍復合材料的真菌毒素免疫傳感器的制備方法及應用，所述的真菌毒素為赭曲霉毒素。
【主權項】
1.一種基于石墨炔甲苯胺藍復合材料的真菌毒素免疫傳感器的制備方法及應用，其特征在于，包括以下步驟: (1)用Al2O3拋光粉將直徑4mm的玻碳電極打磨平滑，超純水清洗干凈;將5?8汕、0.4?4 mg/mL石墨炔O甲苯胺藍GyOTB復合材料滴加到電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干成膜； (2)滴加3?8uL，質量分數為0.1%?5%的羥丙基殼聚糖在電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干； (3)滴加I?5uL，質量分數為0.1%?1%的戊二醛水溶液在電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干； (4)依次滴加5?8UL真菌毒素抗體，5?8 uL、質量分數為0.5%?3%的牛血清白蛋白BSA溶液于電極表面，超純水沖洗，4 0C冰箱中晾干； (5)滴加5?8yL、0.06?40 ng/mL的一系列不同濃度的真菌毒素抗原標準溶液至電極表面，超純水沖洗，4 V冰箱中晾干。2.如權利要求1所述的一種基于石墨炔甲苯胺藍復合材料的真菌毒素免疫傳感器的制備方法及應用，所述的石墨炔@甲苯胺藍GyOTB復合材料，其特征在于，包括以下步驟: 將I?10 mg的石墨炔Gy和0.5 ~ 5 mg的甲苯胺藍TB加入0.5 ~ 5 mL的超純水中，室溫振蕩24 h，得到復合材料石墨炔O甲苯胺藍GyOTB。3.如權利要求1所述的一種基于石墨炔甲苯胺藍復合材料的真菌毒素免疫傳感器的制備方法及應用，所述的真菌毒素，選自下列之一:嘔吐霉素，玉米赤霉烯酮，伏馬毒素，黃曲霉毒素BI，赭曲霉毒素。
【文檔編號】G01N33/543GK106053789SQ201610342904
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年5月23日
【發明人】任祥, 魏琴, 杜斌, 王耀光, 張勇, 孫旭, 范大偉
【申請人】濟南大學