一種高效液相色譜拆分氨氯地平對映體的方法
【專利摘要】本發明屬于檢測和拆分技術領域，具體公開了一種高效液相色譜拆分氨氯地平對映體的方法，該方法采用正相流動相系統和C18色譜柱，以環糊精衍生物作為固定相，以磷酸二氫鉀、甲醇和異丙醇作為流動相，在一定的紫外檢測波長、檢測溫度和流動相流速下，對氨氯地平對映體進行拆分。本發明具有分離效率高、選擇性好、檢測靈敏度高、操作自動化和應用范圍廣的優點，可以更好的對氨氯地平對映體進行拆分，增加了氨氯地平對映體拆分方法的多樣化。
【專利說明】一種高效液相色譜拆分氨氯地平對映體的方法 【技術領域】
[0001] 本發明涉及對映體拆分和檢測技術領域，具體涉及一種氨氯地平對映體的拆分方 法。 【【背景技術】】
[0002] 左旋氨氯地平，是長效鈣離子拮抗藥，臨床上用于治療各種類型高血壓和心絞痛， 尤其是自發性心絞痛，且在心腦血管領域具有非常重要的用途。與通常的鈣拮抗劑相比，具 有不影響心肌收縮率、不引起反射性心動過速和副作用發生率低等優點。
[0003] 與左旋氨氯地平相比，其右旋體雖然缺乏鈣通道阻斷活性，但它是有效的平滑肌 細胞移動抑制劑，可用于治療動脈粥樣硬化，血管成型術后再狹窄和子宮內膜異位。
[0004] 由于氨氯地平的兩個異構體均有良好的藥理活性，其在不同的適應癥治療方面發 揮著獨特的作用，因此，氨氯地平對映體的手性拆分非常重要。
[0005] 近年來，已經公開了很多關于氨氯地平對映體拆分的方法，有以各種溶劑作為拆 分劑的結晶拆分法，但是具有使用拆分溶劑量大、成本高，拆分方法繁瑣、收率低和易有溶 劑殘留等缺點；也有使用高效毛細管電泳對氨氯地平對映體進行拆分。目前，還沒有采用高 效液相色譜對氨氯地平對映體進行拆分的報道，因此，本發明采用高效液相色譜對氨氯地 平對映體進行了拆分，建立了一種分離效率高、選擇性好、檢測靈敏度高、操作自動化和應 用范圍廣的新方法來對高效毛細管電泳對氨氯地平對映體進行拆分進行拆分，這對于氨氯 地平兩個對映體在醫藥和臨床上的應用具有十分重要的意義。 【
【發明內容】
】
[0006] 本發明的發明目的在于:針對上述存在的問題，提供一種高效液相色譜拆分氨氯 地平對映體的方法，該方法具有分離效率高、選擇性好、檢測靈敏度高、操作自動化和應用 范圍廣的優點，可以更好的對氨氯地平對映體進行拆分，增加了氨氯地平對映體拆分方法 的多樣化。
[0007] 為了實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：
[0008] -種高效液相色譜拆分氨氯地平對映體的方法，包括以下步驟：
[0009] (1)采用正相流動相系統和C18色譜柱，以環糊精衍生物作為固定相，以磷酸二氫 鉀、甲醇和異丙醇作為流動相，且磷酸二氫鉀、甲醇和異丙醇在使用前使用0.22M1的有機過 濾膜進行抽濾，并用超聲波進行5min的脫氣處理；
[001 0 ] (2)用蒸餾水配制氨氯地平對映體樣品，樣品的濃度為1 ? 15x 10-4mo 1 /L，并用0 ? 22y L的微孔濾膜過濾；
[0011] (3)調節色譜條件為：紫外檢測波長為230-240nm，檢測溫度為20-25°C，流動相流 速為 0.5-0.8mL/min;
[0012] (4)在(3)設定好的色譜條件下，運行高效液相色譜儀，待基線平穩且基線波動在 0.05mAu范圍內時進樣lOyL，實現了氨氯地平對映體的基線分離。
[0013] 進一步的，步驟（1)中，所述環糊精衍生物為磺丁基醚-0-環糊精或羧甲基-0-環糊 精。
[0014] 進一步的，步驟(1)中，所述磷酸二氫鉀、甲醇和異丙醇的體積比為65:25:10。
[0015] 進一步的，步驟(1)中，所述磷酸二氫鉀的濃度為3-6mmol/L，pH為2.3-2.7。
[0016]進一步的，步驟(3)中，所述紫外檢測波長為237nm。
[0017]進一步的，步驟⑶中，所述檢測溫度為23°C。
[0018] 進一步的，步驟(3)中，所述流動相流速為0.6mL/min。
[0019]綜上所述，由于采用了上述技術方案，本發明的有益效果是：
[0020] (1)采用的拆分方法為高效液相色譜法，與其他拆分方法相比，高效液相色譜法具 有分離效率高，選擇性好，檢測靈敏度高，操作自動化，應用范圍廣的優點，能夠快速準確的 對氨氯地平對映體進行拆分。
[0021] (2)目前，大多是采用結晶拆分法對氨氯地平對映體進行拆分，也有用高效毛細管 電泳對氨氯地平對映體進行拆分的，但是并沒有關于使用高效液相色譜法對氨氯地平對映 體進行拆分的報道，因此，本發明為氨氯地平對映體的拆分提供了一種新方法，增加了氨氯 地平對映體拆分方法的多樣性，為這方面的研究者提供了更多的選擇。 【【具體實施方式】】
[0022] 以下給出實施例，對本發明作進一步說明。
[0023] 實施例1
[0024] 1.色譜條件的設定
[0025] 紫外檢測波長:230nm;檢測溫度：20°C ;流動相流速0.5mL/min。
[0026] 2 ?藥品前處理
[0027] a.樣品：用蒸餾水配制氨氯地平對映體樣品，樣品的濃度為1.15xl(T4m 〇l/L，并用 0.22yL的微孔濾膜過濾，備用。
[0028] b.流動相:配制濃度為3mmol/L且pH為2.3的磷酸二氫鉀，且與甲醇和異丙醇之間 的體積比為65 :25:10，并使用0.22wii的有機過濾膜進行抽濾，后用超聲波進行5min的脫氣 處理，備用。
[0029] 3 ?進樣拆分
[0030]采用正相流動相系統和C18色譜柱，以磺丁基醚環糊精作為固定相，按上述設定 好的的色譜條件運行高效液相色譜儀，待基線平穩且基線波動在0.05mAu范圍內時，進樣10 yL，實現了氨氯地平對映體的基線分離。
[0031] 實施例2 [0032] 1.色譜條件的設定
[0033] 紫外檢測波長:234nm;檢測溫度:22°C ;流動相流速0.6mL/min。
[0034] 2.藥品前處理
[0035] a.樣品：用蒸餾水配制氨氯地平對映體樣品，樣品的濃度為1.15xl(T4m 〇l/L，并用 0.22yL的微孔濾膜過濾，備用。
[0036] b.流動相:配制濃度為4mmol/L且pH為2.4的磷酸二氫鉀，且與甲醇和異丙醇之間 的體積比為65 :25:10，并使用0.22wii的有機過濾膜進行抽濾，后用超聲波進行5min的脫氣 處理，備用。
[0037] 3.進樣拆分
[0038]采用正相流動相系統和C18色譜柱，以磺丁基醚-0-環糊精作為固定相，按上述設定 好的的色譜條件運行高效液相色譜儀，待基線平穩且基線波動在0.05mAu范圍內時，進樣10 yL，實現了氨氯地平對映體的基線分離。
[0039] 實施例3
[0040] 1.色譜條件的設定
[00411 紫外檢測波長:237nm;檢測溫度:23°C ;流動相流速0.7mL/min。
[0042] 2.藥品前處理
[0043] a.樣品：用蒸餾水配制氨氯地平對映體樣品，樣品的濃度為1.15xl(T4m 〇l/L，并用 0.22yL的微孔濾膜過濾，備用。
[0044] b.流動相:配制濃度為5mmol/L且pH為2.5的磷酸二氫鉀，且與甲醇和異丙醇之間 的體積比為65 :25:10，并使用0.22wii的有機過濾膜進行抽濾，后用超聲波進行5min的脫氣 處理，備用。
[0045] 3.進樣拆分
[0046] 采用正相流動相系統和C18色譜柱，以羧甲基-0-環糊精作為固定相，按上述設定好 的的色譜條件運行高效液相色譜儀，待基線平穩且基線波動在0.05mAu范圍內時，進樣10y L，實現了氨氯地平對映體的基線分離。
[0047] 實施例4
[0048] 1.色譜條件的設定
[0049] 紫外檢測波長:240nm;檢測溫度:25°C ;流動相流速0.8mL/min。
[0050] 2.藥品前處理
[0051] a.樣品：用蒸餾水配制氨氯地平對映體樣品，樣品的濃度為1.15xl(T4m 〇l/L，并用 0.22yL的微孔濾膜過濾，備用。
[0052] b.流動相:配制濃度為6mmol/L且pH為2.7的磷酸二氫鉀，且與甲醇和異丙醇之間 的體積比為65 :25:10，并使用0.22wii的有機過濾膜進行抽濾，后用超聲波進行5min的脫氣 處理，備用。
[0053] 3.進樣拆分
[0054]采用正相流動相系統和C18色譜柱，以羧甲基-0-環糊精作為固定相，按上述設定好 的的色譜條件運行高效液相色譜儀，待基線平穩且基線波動在0.05mAu范圍內時，進樣10y L，實現了氨氯地平對映體的基線分離。
[0055] 對比實驗:對4個實施例得到的色譜圖進行分析計算，得到分離度，作為實驗組;將 文獻中，以高效毛細管電泳拆分氨氯地平對映體，優化分離條件后得到的最佳分離度，作為 對照組，結果見表1:
[0056] 表 1
[0058]由表可以看出，4個實施例得到的分離度均優于對照組，且實驗組的最佳分離度 3.79比對照組的3.40高11.5%。因此，本發明氨氯地平對映體的拆分方法，不僅為氨氯地平 對映體的拆分提供了更多的選擇，還具有更高的靈敏度，分離效果更好。
【主權項】
1. 一種高效液相色譜拆分氨氯地平對映體的方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 采用正相流動相系統和c18色譜柱，以環糊精衍生物作為固定相，以磷酸二氫鉀、甲 醇和異丙醇作為流動相，且磷酸二氫鉀、甲醇和異丙醇在使用前使用0.22μπι的有機過濾膜 進行抽濾，并用超聲波進行5min的脫氣處理； (2) 用蒸餾水配制氨氯地平對映體樣品，樣品的濃度為1.15xlO_4mol/L，并用0.22yL的 微孔濾膜過濾； (3) 調節色譜條件為：紫外檢測波長為230-240nm，檢測溫度為20-25°C，流動相流速為 0.5-〇.8mL/min； (4) 在（3)設定好的色譜條件下，運行高效液相色譜儀，待基線平穩且基線波動在 0.05mAu范圍內時進樣10yL,實現了氨氯地平對映體的基線分離。2. 根據權利要求1所述一種高效液相色譜拆分氨氯地平對映體的方法，其特征在于，步 驟(1)中，所述環糊精衍生物為磺丁基醚-β-環糊精或羧甲基-β-環糊精。3. 根據權利要求1所述一種高效液相色譜拆分氨氯地平對映體的方法，其特征在于，步 驟(1)中，所述磷酸二氫鉀、甲醇和異丙醇的體積比為65:25:10。4. 根據權利要求1所述一種高效液相色譜拆分氨氯地平對映體的方法，其特征在于，步 驟(1)中，所述磷酸二氫鉀的濃度為3_6mmol/L，pH為2.3-2.7。5. 根據權利要求1所述一種高效液相色譜拆分氨氯地平對映體的方法，其特征在于，步 驟(3)中，所述紫外檢測波長為237nm〇6. 根據權利要求1所述一種高效液相色譜拆分氨氯地平對映體的方法，其特征在于，步 驟(3)中，所述檢測溫度為23°C。7. 根據權利要求1所述一種高效液相色譜拆分氨氯地平對映體的方法，其特征在于，步 驟(3)中，所述流動相流速為0.6mL/min。
【文檔編號】G01N30/74GK106053692SQ201610615473
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年7月29日
【發明人】顏海
【申請人】顏海