一種舒肝丸中川楝子的含量測定方法
【專利摘要】本發明提供了一種舒肝丸中川楝子的含量測定方法。該方法采用UPLC?MS/MS法測定舒肝丸中川楝子的含量，方法靈敏，準確，可用于舒肝丸的質量控制。
【專利說明】
一種舒肝丸中川楝子的含量測定方法
技術領域
[0001] 本發明涉及到一種舒肝丸中川楝子的含量測定方法，屬中藥技術領域，具體的，涉 及一種UPLC-MS/MS法測定舒肝丸中川楝子含量的測定方法。
【背景技術】
[0002] 舒肝丸為理氣劑，具有舒肝和胃，理氣止痛之功效。主治肝郁氣滯，胸肋脹滿，胃脘 疼痛，嘈雜嘔吐，噯氣泛酸。該藥物由川楝子、醋延胡索、片姜黃、白芍（酒炒）、沉香、枳殼 (炒）、木香、砂仁、陳皮、豆蔻仁、茯苓、姜厚樸、朱砂組成，藥效明確。舒肝丸(大蜜丸)標準最 早收錄在《中國藥典》1985年版，2000年版中增加水蜜丸規格，2005年版增加水丸規格，并對 標準進行修訂，檢驗內容同現行標準，2010年版第二增補本中增加小蜜丸規格，檢驗內容同 《中國藥典》2005年版，未作修定。該藥物現行標準為《中國藥典》2015年版，記載了該藥物的 組方、制法及質量控制方法。該藥物所含藥味多，《中國藥典》2015年版中的含量測定項中， 樣品經過復雜的處理過程后，僅對白芍中芍藥苷進行了含量測定，舒肝丸處方中川楝子并 未進行含量測定。
【發明內容】
[0003] 本發明的目的在于提供了一種測定舒肝丸中川楝子的含量測定方法，本發明采用 超高效液相色譜-質譜聯用(UPLC-MS/MS)法測定舒肝丸中川楝子的含量，該方法如下：
[0004] -種舒肝丸中川楝子的含量測定方法，該方法采用超高效液相色譜質譜聯用法， 其特征在于該含量測定方法如下：
[0005] 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動相為乙腈-0.01 %至0.02%甲酸溶液，體 積比為31:69;流速為0.351111/1^11;采用三重串聯四極桿質譜檢測器，電噴霧離子化負離子 模式下選擇質荷比573離子進行檢測;理論板數按川楝素峰計算應不低于6000-8000。
[0006] 對照品溶液的制備取川楝素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含0.001-1 yg的溶液，即得。
[0007] 供試品溶液的制備取舒肝丸水丸或水蜜丸適量，研細，取0.8g;或取小蜜丸、大蜜 丸適量，剪碎，取lg;或取濃縮丸適量，研細，取〇. 4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入 甲醇50ml，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾 過，取續濾液，即得。
[0008] 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各liil，注入液相色譜儀，測定，即 得。
[0009] 本發明含量測定方法中，流動相優選為乙腈-0.01 %甲酸溶液，體積比為31:69。
[0010] 本發明含量測定方法中，理論板數優選為按川楝素峰計算應不低于8000。
[0011] 本發明含量測定方法中，對照品溶液的制備優選為取川楝素對照品適量，精密稱 定，加甲醇制成每lml含lyg的溶液，即得。
[0012] 本發明含量測定方法還優選為：
[0013] 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動相為乙腈-o .01 %甲酸溶液，體積比為31 :69;流速:0.35ml/min;采用三重串聯四極桿質譜檢測器，電噴霧離子化負離子模式下選擇 質荷比573離子進行檢測;理論板數按川楝素峰計算應不低于8000。
[0014] 對照品溶液的制備取川楝素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含Uxg的溶 液，即得。
[0015] 供試品溶液的制備取舒肝丸水丸或水蜜丸適量，研細，取0.8g;或取小蜜丸、大蜜 丸適量，剪碎，取lg;或取濃縮丸適量，研細，取〇. 4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入 甲醇50ml，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾 過，取續濾液，即得；
[0016] 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各liil，注入液相色譜儀，測定，即 得。
[0017] 《中國藥典》2010年版第一增補本中川楝素的含量測定方法采用單級四極桿質譜 檢測器，"舒肝丸"中除川楝子另有12味藥材，若采用單級四極桿質譜檢測器，其他藥味可能 對測定結果產生影響，而采用多反應檢測可以較好地排除其他因素對川楝素的干擾，從而 得到制劑中川楝素的準確含量。
[0018] 為了驗證測定含量方法的穩定性、準確性、專屬性及系統適應性，對方法進行了以 下方法學驗證實驗，以確保該含量測定方法可以作為舒肝丸的質量控制。
[0019] 1儀器與試藥
[0020] Waters公司XEVO TQ-S超高效液相色譜質譜聯用儀，Millipore公司Milli-Q超純 水機。川楝素對照品（中檢院，批號= 111842-201102)，甲醇、乙腈均為色譜純。
[0021] 2、色譜條件與系統適用性試驗
[0022] 色譜柱為ACQUITY UPLC BEH (：18(2.1\50臟，1.7_)，流動相為乙腈-0.01%甲酸 水，體積比為36:64;流速:0.35ml/min。
[0023] 采用三重串聯四級桿質譜檢測器，電噴霧離子化(ESI)負離子模式進行檢測，毛細 管電壓2.8kV，去溶劑氣溫度500°C。
[0024] 川楝素質譜條件如下表：
[0026] 3、對照品溶液的制備
[0027]精密稱取川楝素對照品適量，加甲醇溶解制成每lml含川楝素為lng、5ng、20ng、 40ng、80ng、160ng、1 OOOng 的溶液，即得。
[0028] 4、供試品溶液的制備
[0029] 取舒肝丸約lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，加熱回 流1小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。
[0030] 5線性范圍考察
[0031 ]分別精密吸取對照品溶液（1 ? 115ng/ml，5 ? 575ng/ml，22 ? 3ng/ml，44 ? 6ng/ml， 89.2ng/ml，178.4ng/ml，1115ng/ml)各lyl注入液相色譜質譜聯用儀，按上述條件測定峰面 積，以川楝素峰面積積分值為縱坐標，以進樣濃度(ng/mL)為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸 方程為Y = 778.74X+629.44(r = 0.9999)。結果表明，川楝素在1.115~1115ng/ml范圍內，線 性關系良好。
[0032]表1標準曲線測定結果
[0033]
[0034] 6重復性試驗
[0035]取同一批樣品（批號1204071)，研細，取0.58、1.(^、1.58各三份，精密稱定，按正文 方法進行測定。結果表明，本方法重復性良好(結果見表2)。
[0036] 表2重復性試驗結果
[0039] 取已知含量的樣品（批號20151877,川楝素:0.0083mg/g)9份，每份約0.5g，精密稱 定，每三份為一組，分別加入用甲醇配制的低、中、高三個濃度的混合對照品溶液，按供試品 溶液制備項下方法制備供試品溶液。按擬定的色譜條件測定，計算回收率。結果見表3,表明 本方法回收率較好。
[0040]表3回收率試驗的結果
[0042] 8樣品測定
[0043] 對全部135批樣品進行測定，典型樣品色譜圖見圖1，
[0044] 表4樣品測定結果
【附圖說明】
[0047] 圖1:川楝素負離子模式掃描一級質譜圖。
[0048] 圖2:川楝素負離子模式掃描二級質譜圖。
[0049] 圖3:川楝素對照品溶液總離子流圖。
[0050] 圖4:舒肝丸的總離子流圖。
【具體實施方式】 [0051 ] 實施例1
[0052]以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動相為乙腈-0.01 %甲酸溶液，體積比為31 :69;流速:0.35ml/min;采用三重串聯四極桿質譜檢測器，電噴霧離子化負離子模式下選擇 質荷比573離子進行檢測;理論板數按川楝素峰計算應不低于8000;
[0053]對照品溶液的制備取川楝素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含liig的溶 液，即得；
[0054] 供試品溶液的制備取舒肝丸水丸或水蜜丸適量，研細，取0.8g;或取小蜜丸、大蜜 丸適量，剪碎，取lg;或取濃縮丸適量，研細，取〇. 4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入 甲醇50ml，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾 過，取續濾液，即得；
[0055] 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各liil，注入液相色譜儀，測定，即 得。
[0056] 實施例2
[0057]以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動相為乙腈-0.02 %甲酸溶液，體積比為31 :69;流速:0.35ml/min;采用三重串聯四極桿質譜檢測器，電噴霧離子化負離子模式下選擇 質荷比573離子進行檢測;理論板數按川楝素峰計算應不低于6000;
[0058]對照品溶液的制備取川楝素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含liig的溶 液，即得；
[0059] 供試品溶液的制備取舒肝丸水丸或水蜜丸適量，研細，取0.8g;或取小蜜丸、大蜜 丸適量，剪碎，取lg;或取濃縮丸適量，研細，取〇. 4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入 甲醇50ml，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾 過，取續濾液，即得；
[0060] 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各liil，注入液相色譜儀，測定，即 得。
[0061 ] 實施例3
[0062]以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動相為乙腈-0.01 %甲酸溶液，體積比為31 :69;流速:0.35ml/min;采用三重串聯四極桿質譜檢測器，電噴霧離子化負離子模式下選擇 質荷比573離子進行檢測;理論板數按川楝素峰計算應不低于8000;
[0063] 對照品溶液的制備取川楝素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含0.0 Olyg 的溶液，即得；
[0064] 供試品溶液的制備取舒肝丸水丸或水蜜丸適量，研細，取0.8g;或取小蜜丸、大蜜 丸適量，剪碎，取lg;或取濃縮丸適量，研細，取〇. 4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入 甲醇50ml，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾 過，取續濾液，即得；
[0065] 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各liil，注入液相色譜儀，測定，即 得。
[0066] 實施例4
[0067]以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動相為乙腈_0.15%甲酸溶液，體積比為31 :69;流速:0.35ml/min;采用三重串聯四極桿質譜檢測器，電噴霧離子化負離子模式下選擇 質荷比573離子進行檢測;理論板數按川楝素峰計算應不低于7000;
[0068] 對照品溶液的制備取川楝素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.05yg 的溶液，即得；
[0069] 供試品溶液的制備取舒肝丸水丸或水蜜丸適量，研細，取0.8g;或取小蜜丸、大蜜 丸適量，剪碎，取lg;或取濃縮丸適量，研細，取〇. 4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入 甲醇50ml，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾 過，取續濾液，即得；
[0070] 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各liil，注入液相色譜儀，測定，即 得。
[0071] 上述實施例均按照藥典要求進行方法學驗證，結果顯示方法準確可靠、靈敏、專 屬，各項指標均符合質量控制的要求。
【主權項】
1. 一種舒肝丸中川楝子的含量測定方法，該方法采用超高效液相色譜-質譜聯用色譜 法，其特征在于該含量測定方法如下： 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動相為乙腈-ο. 01 %至0.02%甲酸溶液，體積比 為31:69;流速為0.35ml/min;采用三重串聯四極桿質譜檢測器，電噴霧離子化負離子模式 下選擇質荷比573離子進行檢測;理論板數按川楝素峰計算應不低于6000-8000; 對照品溶液的制備取川楝素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含0.001-Uig的 溶液，即得； 供試品溶液的制備取舒肝丸水丸或水蜜丸適量，研細，取〇.8g;或取小蜜丸、大蜜丸適 量，剪碎，取1 g;或取濃縮丸適量，研細，取〇. 4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 50ml，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取 續濾液，即得； 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各2μ1，注入液相色譜儀，測定，即得。2. 根據權利要求1所述含量測定方法，其特征在于所述流動相為乙腈-0.01 %甲酸溶 液，體積比為31:69。3. 根據權利要求1所述含量測定方法，其特征在于所述理論板數為按川楝素峰計算應 不低于8000。4. 根據權利要求1所述含量測定方法，其特征在于所述對照品溶液的制備為取川楝素 對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含Uig的溶液，即得。5. 根據權利要求1-4所述含量測定方法，其特征在于該含量測定方法如下： 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動相為乙腈-〇. 01 %甲酸溶液，體積比為31:69; 流速:0.35ml/min;采用三重串聯四極桿質譜檢測器，電噴霧離子化負離子模式下選擇質荷 比573離子進行檢測;理論板數按川楝素峰計算應不低于8000; 對照品溶液的制備取川楝素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含lyg的溶液， 即得； 供試品溶液的制備取舒肝丸水丸或水蜜丸適量，研細，取〇.8g;或取小蜜丸、大蜜丸適 量，剪碎，取1 g;或取濃縮丸適量，研細，取〇. 4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 50ml，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取 續濾液，即得； 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各?μL，注入液相色譜儀，測定，即得。
【文檔編號】G01N30/02GK106053661SQ201610527135
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年6月29日
【發明人】馬永青, 王敏, 劉永利, 趙振霞
【申請人】河北省藥品檢驗研究院