一種高效毛細管電泳拆分外消旋托品酸的方法
【專利摘要】本發明屬于拆分和檢測技術領域，具體公開了一種高效毛細管電泳拆分外消旋托品酸的方法。本發明以添加了手性選擇試劑的Tris?磷酸鹽作為緩沖液體系，在一定的高效毛細管電泳參數，包括分離電壓、分離溫度、壓力進樣和紫外檢測波長下，成功的外消旋托品酸進行了拆分，實現了基線分離，這為外消旋托品酸及其單體的研究打下了基礎。
【專利說明】一種高效毛細管電泳拆分外消旋托品酸的方法 【技術領域】
[0001] 本發明涉及拆分和檢測技術領域，具體涉及一種外消旋托品酸的拆分方法。 【【背景技術】】
[0002] 含有手性中心的化合物，其對映體通常具有極為相近的理化性質，但藥理和毒理 作用卻存在很大差異，往往一種立體異構體有藥效而它的鏡像分子卻很小，甚至完全沒有 藥效或具有副作用。美國食品和藥物管理局早在1992年就規定，今后凡開發具有不對稱中 心的藥物，必須給出手性拆分的結果。
[0003] 托品酸是一種重要的藥物中間體，可用于合成抗膽堿藥山莨菪堿和托吡卡胺等。 獲得光學純的托品酸也是藥物合成的必然要求。因此，對外消旋托品酸進行手性拆分研究， 建立快速、有效的拆分方法是一個具有理論及實際意義的課題。
[0004] 目前，拆分方法主要有高效液相色譜固定相法、毛細管色譜法、離子對色譜法和酶 催化拆分等。現在，已存在使用高速逆流色譜法對外消旋托品酸進行拆分的專利，但還沒有 用高效毛細管電泳對外消旋托品酸進行拆分的相關文獻，且與其他拆分方法相比，HPCE具 有可靈活選擇操作模式和手性選擇劑、試劑及樣品用量少且對環境污染小、分析速度快、應 用范圍廣等許多優點。 【
【發明內容】
】
[0005] 本發明的發明目的在于:針對上述存在的問題，提供一種高效毛細管電泳拆分外 消旋托品酸的方法。該方法具有可靈活選擇操作模式和手性選擇劑、試劑及樣品用量少且 對環境污染小、分析速度快、應用范圍廣等許多優點，且本發明建立了一種拆分外消旋托品 酸的新方法，補充完善了對外消旋托品酸進行拆分的方法，為外消旋托品酸的研究提供了 幫助。
[0006] 為了實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：
[0007] -種高效毛細管電泳拆分外消旋托品酸的方法，包括以下具體步驟：
[0008] (1)以Tris-磷酸鹽為緩沖液，在該緩沖液中添加手性選擇試劑作為緩沖液體系， 攪拌至混合均勾后，超聲脫氣lOmin并用0.20M1的微孔濾膜過濾；
[0009] (2)用有機溶劑配制外消旋托品酸樣品，樣品濃度為2-5mg/mL;
[0010] (3)調節毛細管電泳參數為：分離電壓為23-28KV，毛細管溫度為22-27°C，壓力進 樣為0.1 psiXIOs，紫外檢測波長為180-300nm;正極進外消旋托品酸樣品，負極檢測；
[0011] (4)在(3)設定的毛細管電泳參數下運行毛細管電泳儀，待基線平穩且基線波動在 0.15mAu范圍內時進樣，實現了外消旋托品酸的基線分離。
[0012] 進一步的，步驟（1)中，所述手性選擇試劑為羥丙基-0-環糊精、乙基-0-環糊精或 鹽酸化-0-環糊精中的一種。
[0013] 進一步的，步驟（1)中，所述手性選擇試劑的濃度為3-8mmol/L，添加量為18-23% 的體積。
[0014] 進一步的，步驟(1)中，所述Tris-磷酸鹽的濃度為25-38mmol/L，pH為2 ? 2-2 ? 9。 [0015]進一步的，步驟(2)中，所述有機溶劑為正己烷、正庚烷、正戊烷或乙醚中的一種。 [0016]進一步的，步驟(2)中，所述樣品濃度為3mg/mL。
[0017]進一步的，步驟(3)中，所述分離電壓為26KV。
[0018]進一步的，步驟(3)中，所述毛細管溫度為24°C。
[0019]進一步的，步驟⑶中，所述紫外檢測波長為195nm。
[0020] 綜上所述，由于采用了上述技術方案，本發明的有益效果是：
[0021] (1)本發明采用的拆分方法是高效毛細管電泳法，與其他拆分方法相比，具有可靈 活選擇操作模式和手性選擇劑、試劑及樣品用量少且對環境污染小、分析速度快、應用范圍 廣等許多優點，用該方法對外消旋雷諾嗪進行拆分的分離效果好且靈敏度高。
[0022] (2)目前，并沒有用高效毛細管電泳來對外消旋托品酸進行拆分的文獻，現有技術 中公布的對外消旋托品酸的拆分方法比較單一，不全面，而本發明利用高效毛細管電泳來 拆分外消旋托品酸，為外消旋托品酸的拆分建立了一種新的、優選的方法，可以使研究人員 更方便的對外消旋托品酸及其單體進行研究。 【【具體實施方式】】
[0023]以下給出具體實施例，對本發明作進一步說明。
[0024] 實施例1
[0025] 1.電泳參數的設定
[0026]分離電壓為23KV;分離溫度為22°C ;紫外檢測波長為180nm;壓力進樣為 0.lpsiX10s〇
[0027] 2.樣品及緩沖液體系的制備
[0028] a.用正己烷配制外消旋托品酸樣品，樣品濃度為2mg/mL，待用；
[0029] b.緩沖液體系為加入18%(V)3mmol/L羥丙基-0-環糊精的Tris-磷酸鹽，濃度為 25mmo 1/L，pH為2 ? 2，并用0 ? 20mi的水性濾膜過濾，待用。
[0030] 3.進樣拆分
[0031 ]按設定的電泳參數運行高效毛細管電泳儀，先用0.20mi水性濾膜過濾過的蒸餾水 走30min，再用緩沖液體系走30min，再加電場30min，如此循環，直到基線平穩且基線波動在 0.15mV以內時，正極進外消旋雷諾嗪樣品，負極檢測。
[0032] 實施例2 [0033] 1.電泳參數的設定
[0034]分離電壓為25KV;分離溫度為24°C ;紫外檢測波長為195nm;壓力進樣為 0.lpsiX10s〇
[0035] 2.樣品及緩沖液體系的制備
[0036] a.用正庚烷配制外消旋托品酸樣品，樣品濃度為3mg/mL，待用；
[0037] b.緩沖液體系為加入20%(V)5mmol/L乙基-0-環糊精的Tris-磷酸鹽，濃度為 29mmo 1 /L，pH為2 ? 5，并用0 ? 20mi的水性濾膜過濾，待用。
[0038] 3.進樣拆分
[0039] 按設定的電泳參數運行高效毛細管電泳儀，先用0.20mi水性濾膜過濾過的蒸餾水 走30min，再用緩沖液體系走30min，再加電場30min，如此循環，直到基線平穩且基線波動在 0.15mV以內時，正極進外消旋雷諾嗪樣品，負極檢測。
[0040] 實施例3
[0041] 1.電泳參數的設定
[0042] 分離電壓為26KV;分離溫度為26°C ;紫外檢測波長為250nm;壓力進樣為 0.lpsiX10s〇
[0043] 2.樣品及緩沖液體系的制備
[0044] a.用正戊烷配制外消旋托品酸樣品，樣品濃度為4mg/mL，待用；
[0045] b.緩沖液體系為加入22%(V)6mmol/L乙基-0-環糊精的Tris-磷酸鹽，濃度為 33mmo 1/L，pH為2 ? 7，并用0 ? 20mi的水性濾膜過濾，待用。
[0046] 3 ?進樣拆分
[0047]按設定的電泳參數運行高效毛細管電泳儀，先用0.20mi水性濾膜過濾過的蒸餾水 走30min，再用緩沖液體系走30min，再加電場30min，如此循環，直到基線平穩且基線波動在 0.15mV以內時，正極進外消旋雷諾嗪樣品，負極檢測。
[0048] 實施例4
[0049] 1.電泳參數的設定
[0050] 分離電壓為28KV;分離溫度為27°C ;紫外檢測波長為300nm;壓力進樣為 0.lpsiX10s〇
[0051 ] 2.樣品及緩沖液體系的制備
[0052] a.用乙醚配制外消旋托品酸樣品，樣品濃度為4mg/mL，待用；
[0053] b.緩沖液體系為加入23%(V)8mmol/L鹽酸化-0-環糊精的Tris-磷酸鹽，濃度為 38mmo 1 /L，pH為2 ? 7，并用0 ? 20mi的水性濾膜過濾，待用。
[0054] 3.進樣拆分
[0055]按設定的電泳參數運行高效毛細管電泳儀，先用0.20mi水性濾膜過濾過的蒸餾水 走30min，再用緩沖液體系走30min，再加電場30min，如此循環，直到基線平穩且基線波動在 0.15mV以內時，正極進外消旋雷諾嗪樣品，負極檢測。
[0056] 采集上述4個實施例的電泳圖，經過計算得到分離度，作為實驗組;按將文獻中，采 用高速逆流色譜法對外消旋托品酸進行拆分，經過計算得到選出最佳分離度，作為對照組， 結果見表1:
[0057] 表 1
[0059] 由上表可知，在上述4個實施例中，均可以實現對外消旋托品酸的基線分離，且拆 分得到的分離度均優于對照組，其中，實施例的最佳分離度比對照組高45%。因此，本發明 的拆分方法不僅為外消旋托品酸建立了一種新的拆分方法，且本發明的方法具有更高的靈 敏度和更好的分離效果。
[0060] 上述說明是針對本發明較佳可行實施例的詳細說明，但實施例并非用以限定本發 明的專利申請范圍，凡本發明所提示的技術精神下所完成的同等變化或修飾變更，均應屬 于本發明所涵蓋專利范圍。
【主權項】
1. 一種高效毛細管電泳拆分外消旋托品酸的方法，其特征在于，包括以下具體步驟： (1) 以Tris-磷酸鹽為緩沖液，在該緩沖液中添加手性選擇試劑作為緩沖液體系，攪拌 至混合均勾后，超聲脫氣lOmin并用0.20μηι的微孔濾膜過濾； (2) 用有機溶劑配制外消旋托品酸樣品，樣品濃度為2-5mg/mL; (3) 調節毛細管電泳參數為：分離電壓為23-28KV，毛細管溫度為22-27°C，壓力進樣為 0.1 psiXIOs，紫外檢測波長為180-300nm;正極進外消旋托品酸樣品，負極檢測； (4) 在（3)設定的毛細管電泳參數下運行毛細管電泳儀，待基線平穩且基線波動在 0.15mAu范圍內時進樣，實現了外消旋托品酸的基線分離。2. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（1)中，所述手性選擇試劑為羥丙基-β-環糊精、乙基-β-環糊精或鹽酸化-β-環糊精中的一種。3. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（1)中，所述手性選擇試劑的濃度為3-8mmo 1 /L，添加量為18-23 %的體積。4. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（1)中，所述Tris-磷酸鹽的濃度為25-38mmol/L，pH為2·2-2·9。5. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述有機溶劑為正己烷、正庚 烷、正戊烷或乙醚中的一種。6. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述樣品濃度為3mg/mL。7. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中，所述分離電壓為26KV。8. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中，所述毛細管溫度為24°C。9. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中，所述紫外檢測波長為195nm。
【文檔編號】G01N27/447GK106053579SQ201610615495
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年7月29日
【發明人】顏海
【申請人】顏海