一種基于片狀黑磷的人成纖維細胞生長因子免疫傳感器的制備方法
【專利摘要】本發明涉及一種基于片狀黑磷的人成纖維細胞生長因子免疫傳感器的制備方法，屬于新型生物傳感檢測技術領域。片狀黑磷具有類似石墨烯性質的結構，具有良好的導電性。同時離子液體作為片狀黑磷的分散劑，將其應用在免疫傳感器的基底。同時，利用鉑納米片將底層材料和抗體牢牢地結合起來，增強傳感器的穩定性。利用底液中性紅為信號，實現了對人成纖維細胞生長因子的超靈敏檢測。
【專利說明】
一種基于片狀黑磷的人成纖維細胞生長因子免疫傳感器的制備方法
技術領域
[0001]本發明涉及一種基于片狀黑磷的人成纖維細胞生長因子免疫傳感器的制備方法，采用黑磷@離子液體復合材料作為檢測基底材料，增強導電性的同時，又能增加信號分子在傳感表面的固載量上，通過鉑納米片的交聯作用，制備一種檢測人成纖維細胞生長因子的電化學免疫傳感器，屬于新型功能材料與生物傳感檢測技術領域。
技術背景
[0002]人成纖維細胞生長因子可以由內皮細胞、平滑肌細胞、巨噬細胞分泌。它的作用是促進內皮細胞的游走和平滑肌細胞的增殖，能夠促進新血管形成，修復損害的內皮細胞。同時，它能加強胃腸功能，促進消化酶的分解，增進食欲，治療慢性胃炎。
[0003]目前對于人成纖維細胞生長因子的檢測方法不是很多，主要以酶聯免疫法為主。但是酶聯免疫法存在著來自代謝物的干擾，其交叉反應性能顯著干擾生物利用度的測定；也可影響蛋白多肽類藥物的清除和藥理作用，并對其定量測定產生影響。免疫傳感器是將免疫學方法與分析化學方法相結合的一種生物傳感器，通過抗原與抗體之間的特異性結合，構建了操作簡便、結構簡單、選擇性好、靈敏度高的免疫傳感器。本發明制備了一種基于片狀黑磷的人成纖維細胞生長因子免疫傳感器。
[0004]本發明采用黑磷與離子液體作用形成的復合材料為基底材料，實現了信號分子的高通量負載。同時，鉑納米片在免疫傳感器中的使用，既保證了穩定性，又增加了人成纖維細胞生長因子抗體的負載，實現了人成纖維細胞生長因子的靈敏檢測。該方法具有成本低、特異性好、檢測快速等優點，而且制備過程較為簡單，有效克服了目前人成纖維細胞生長因子檢測方法的不足。
【發明內容】
[0005]本發明的目的之一是基于黑磷@離子液體POIL復合材料為基底材料，構建了一種無酶，超靈敏的電化學免疫傳感器。
[0006]本發明的目的之二是通過一鍋法合成鉑納米片。
[0007]本發明的目的之三是將鉑納米片作為檢測抗體的負載物，實現了對人成纖維細胞生長因子的超靈敏檢測。
[0008]本發明的技術方案如下
I.一種基于片狀黑磷的人成纖維細胞生長因子免疫傳感器的制備方法
(1)將直徑4mm的玻碳電極用Al2O3拋光粉打磨，超純水洗凈;將5?8 yU0.5?3.5mg/mL黑磷O離子液體POIL復合材料滴加到電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干成膜；
(2)滴加5?8HL的鉑納米片在電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干；
(3)滴加5?8UL人成纖維細胞生長因子FGF抗體標準溶液于電極表面，超純水沖洗，4°C冰箱中晾干； (4)滴加5?8uL質量分數為0.5%?1.5%的牛血清白蛋白BSA溶液于電極表面，超純水沖洗，4 °C冰箱中晾干；
(5)滴加5?8HU0.006?10 ng/mL的一系列不同濃度的人成纖維細胞生長因子FGF抗原標準溶液至電極表面，超純水沖洗，4 V冰箱中晾干。
[0009]2.黑磷@離子液體POIL復合材料的制備
取0.1 ~ 1.0 mg的片狀黑磷加入到0.5?5 mL的離子液體1-丁基-3-甲基咪卩坐四氟硼酸鹽BM頂.BF4中，振蕩2?24 h，得到復合材料黑磷O離子液體P0IL。
[0010]3.鉑納米片的制備
將30?100 mg乙酰丙酮鉑，100?500 mg聚乙烯吡咯烷酮，100?500 mg的十六烷基三甲基溴化銨加入到10?100 mL的N，N-二甲基丙酰胺中。將所得到的溶液在120°C，⑶氣氛中下反應3?48 h。反應結束后將得到的黑色固體用丙酮洗滌，離心分離，干燥后得到鉑納米片。
[0011]本發明有益成果
(I)黑磷的使用，實現了對傳感器底層比表面積成功放大，同時能夠很好的促進電極表面的電子傳遞，實現了高通量負載。
[0012](2)黑磷O離子液體POIL復合材料的使用，使得生物分子的負載量大大提升，擴展了傳感器的線性范圍，降低了檢出限。
[0013](3)鉑納米片的使用，增加了傳感器表面的電子傳輸能力，增強了傳感器的穩定性，實現了超靈敏穩定檢測。
【具體實施方式】
[0014]實施例1
一種基于片狀黑磷的人成纖維細胞生長因子免疫傳感器的制備方法
(1)將直徑4mm的玻碳電極用Al2O3拋光粉打磨，超純水洗凈;將5 yU0.5 mg/mL黑磷O離子液體POIL復合材料滴加到電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干成膜；
(2)滴加5HL的鉑納米片在電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干；
(3)滴加5UL人成纖維細胞生長因子FGF抗體標準溶液于電極表面，超純水沖洗，4°C冰箱中晾干；
(4)滴加5UL質量分數為0.5%的牛血清白蛋白BSA溶液于電極表面，超純水沖洗，4°C冰箱中晾干；
(5)滴加5UU0.006?10 ng/mL的一系列不同濃度的人成纖維細胞生長因子FGF抗原標準溶液至電極表面，超純水沖洗，4 V冰箱中晾干。
[0015]實施例2
一種基于片狀黑磷的人成纖維細胞生長因子免疫傳感器的制備方法
(1)將直徑4mm的玻碳電極用Al2O3拋光粉打磨，超純水洗凈;將6.5 yUl.5 mg/mL黑磷@離子液體POIL復合材料滴加到電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干成膜；
(2)滴加6.5HL的鉑納米片在電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干；
(3)滴加6.5UL人成纖維細胞生長因子FGF抗體標準溶液于電極表面，超純水沖洗，4°C冰箱中晾干； (4)滴加6.5uL質量分數為1.0%的牛血清白蛋白BSA溶液于電極表面，超純水沖洗，4°C冰箱中晾干；
(5)滴加6.5UU0.006?10 ng/mL的一系列不同濃度的人成纖維細胞生長因子FGF抗原標準溶液至電極表面，超純水沖洗，4 V冰箱中晾干。
[0016]實施例3
一種基于片狀黑磷的人成纖維細胞生長因子免疫傳感器的制備方法
(1)將直徑4mm的玻碳電極用Al2O3拋光粉打磨，超純水洗凈;將8 pL,3.5 mg/mL黑磷O離子液體POIL復合材料滴加到電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干成膜；
(2)滴加8HL的鉑納米片在電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干；
(3)滴加8UL人成纖維細胞生長因子FGF抗體標準溶液于電極表面，超純水沖洗，4°C冰箱中晾干；
(4)滴加8UL質量分數為1.5%的牛血清白蛋白BSA溶液于電極表面，超純水沖洗，4°C冰箱中晾干；
(5)滴加8UU0.006?10 ng/mL的一系列不同濃度的人成纖維細胞生長因子FGF抗原標準溶液至電極表面，超純水沖洗，4 V冰箱中晾干。
[0017]實施例4
黑磷@離子液體PO IL復合材料的制備
取0.1 mg的片狀黑磷加入到0.5 mL的離子液體1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸鹽BMIM.BF4中，振蕩2 h，得到復合材料黑磷O離子液體P0IL。
[0018]實施例5
黑磷@離子液體PO IL復合材料的制備
取0.8 mg的片狀黑磷加入到3.2 mL的離子液體1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸鹽BMIM.BF4中，振蕩8 h，得到復合材料黑磷O離子液體P0IL。
[0019]實施例6
黑磷@離子液體PO IL復合材料的制備
取1.0 mg的片狀黑磷加入到5 mL的離子液體1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸鹽BM頂.BF4中，振蕩24 h，得到復合材料黑磷O離子液體P0IL。
[0020]實施例7
鉬納米片的制備
將30 mg乙酰丙酮鉑，100 mg聚乙烯吡咯烷酮，100 mg的十六烷基三甲基溴化銨加入到10 mL的N，N-二甲基丙酰胺中。將所得到的溶液在120°C，⑶氣氛中下反應3 h。反應結束后將得到的黑色固體用丙酮洗滌，離心分離，干燥后得到鉑納米片。
[0021 ] 實施例8
鉬納米片的制備
將80 mg乙酰丙酮鉑，200 mg聚乙烯吡咯烷酮，300 mg的十六烷基三甲基溴化銨加入到70 mL的N，N-二甲基丙酰胺中。將所得到的溶液在120°C，C0氣氛中下反應18 h。反應結束后將得到的黑色固體用丙酮洗滌，離心分離，干燥后得到鉑納米片。
[0022] 實施例9
鉬納米片的制備將100 mg乙酰丙酮鉑，500 mg聚乙烯吡咯烷酮，500 mg的十六烷基三甲基溴化銨加入至Ij 100 mL的N，N-二甲基丙酰胺中。將所得到的溶液在120 °C，⑶氣氛中下反應48 h。反應結束后將得到的黑色固體用丙酮洗滌，離心分離，干燥后得到鉑納米片。
【主權項】
1.一種基于片狀黑磷的人成纖維細胞生長因子免疫傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)將直徑4mm的玻碳電極用Al2O3拋光粉打磨，超純水洗凈;將5?8 yU0.5?3.5mg/mL黑磷O離子液體POIL復合材料滴加到電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干成膜； (2)滴加5?8HL的鉑納米片在電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干； (3)滴加5?8UL人成纖維細胞生長因子FGF抗體標準溶液于電極表面，超純水沖洗，4°C冰箱中晾干； (4)滴加5?8UL質量分數為0.5%?1.5%的牛血清白蛋白BSA溶液于電極表面，超純水沖洗，4 °C冰箱中晾干； (5)滴加5?8HU0.006?10 ng/mL的一系列不同濃度的人成纖維細胞生長因子FGF抗原標準溶液至電極表面，超純水沖洗，4 V冰箱中晾干。2.如權利要求1所述的一種基于片狀黑磷的人成纖維細胞生長因子免疫傳感器的制備方法，所述的黑磷@離子液體POIL復合材料，其特征在于，包括以下步驟: 取0.1?1.0 mg的片狀黑磷加入到0.5?5 mL的離子液體1-丁基-3-甲基咪卩坐四氟硼酸鹽BM頂.BF4中，振蕩2?24 h，得到復合材料黑磷O離子液體P0IL。3.如權利要求1所述的一種基于片狀黑磷的人成纖維細胞生長因子免疫傳感器的制備方法，所述的鉑納米片，其特征在于，包括以下步驟: 將30?100 mg乙酰丙酮鉑，100?500 mg聚乙烯吡咯烷酮，100?500 mg的十六烷基三甲基溴化銨加入到10?100 mL的N，N-二甲基丙酰胺中，將所得到的溶液在120°C，⑶氣氛中下反應3?48 h，反應結束后將得到的黑色固體用丙酮洗滌，離心分離，干燥后得到鉑納米片。
【文檔編號】G01N27/26GK106053557SQ201610339989
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年5月23日
【發明人】魏琴, 任祥, 閆濤, 王耀光, 吳丹, 孫旭, 李悅源, 李燕
【申請人】濟南大學