膽維丁測定方法
【專利摘要】膽維丁測定方法。提供了一種測定膽維丁、膽固醇和維生素D3的混合物中膽維丁含量的方法，所述方法包括如下步驟：(1)提供不同膽維丁含量的膽維丁、膽固醇和維生素D3的標準混合物；(2)提供上述標準混合物的X衍射光譜；(3)基于上述標準混合物的膽維丁含量以及X衍射光譜中2θ＝4.0°或8.0°的衍射峰高度或面積提供線性回歸方程；(4)提供膽維丁、膽固醇和維生素D3的混合物的X衍射光譜；以及(5)基于所述線性回歸方程和膽維丁、膽固醇和維生素D3的混合物的X衍射光譜中2θ＝4.0°或8.0°的衍射峰高度或面積確定膽維丁的含量。
【專利說明】
膽維丁測定方法
技術領域
[0001] 本發明涉及膽維丁測定方法，具體涉及測定膽維丁含量的方法。
【背景技術】
[0002] 膽維丁制成的制劑適用于嬰幼兒缺維生素 D性佝僂病，也適用于防治骨質疏松 癥、腎原性骨病（腎病性佝僂病）、甲狀旁腺功能亢進（伴有骨病者）、甲狀旁腺功能減退、 營養和吸收障礙引起的佝僂病和骨軟化癥、假性缺鈣（D -依賴型I )的佝僂病和骨軟化癥 等。
[0003] 膽維丁由維生素 D3、膽固醇組成，其結構是由維生素 D3與膽固醇在羥基上形成等 摩爾非共價鍵（氫鍵）結合物。氫鍵鍵能最大約為200kJ/mol，一般為5-30kJ/mol，比一般 的共價鍵、離子鍵和金屬鍵鍵能要小，但強于靜電引力。所以膽維丁中的氫鍵不穩定。
[0004] 由于氫鍵不穩定，膽維丁也可分解成游離維生素 D3和膽固醇。已有的液相方法無 法檢測到游離的維生素 D3和游離的膽固醇。
[0005] 現有分析檢測方法無法對膽維丁和膽固醇、維生素 D3的混合物進行區分。而且國 外藥典標準和中國藥典都沒有對游離的膽固醇和維生素 D3做為雜質進行控制。現有藥典 的含量檢測方法也無法準確測出膽維丁的真正含量，含量數據還包括其中包含游離態的維 生素 D3和膽固醇。
[0006] 因此，本領域急需一種測定膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物中膽維丁及其含 量的方法。
【發明內容】
[0007] 本發明所解決的技術問題是現有的分析手段無法快速區分膽維丁和膽固醇、維生 素 D3的混合物，也無法精確檢測出膽維丁真正的含量，膽維丁在液相中出峰時間和游離態 的膽固醇、維生素 D3重合，所測的含量數據中還包括了膽固醇和維生素 D3的量。本發明的 目的是提供一種準確、穩定的檢測方法，用于檢測膽維丁及其含量。
[0008] 本發明一方面提供了一種測定膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物中膽維丁含 量的方法，所述方法包括如下步驟：
[0009] (1)提供不同膽維丁含量的膽維丁、膽固醇和維生素 D3的標準混合物；
[0010] (2)提供上述標準混合物的X衍射光譜；
[0011] (3)基于上述標準混合物的膽維丁含量以及X衍射光譜中2 Θ = 4. 0°或8. 0°的 衍射峰高度或面積提供線性回歸方程；
[0012] (4)提供膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物X衍射光譜；以及
[0013] (5)基于所述線性回歸方程測定膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物中膽維丁的 含量。
[0014] 在本發明的一個優選實例中，所述標準混合物中膽維丁含量為1-99重量％ ;優選 地，所述標準混合物中膽維丁含量為1. 5625-98. 4375重量％;優選地，所述標準混合物中膽 維丁的含量分別為1. 5625重量％、3. 125重量％、6. 25重量％、12. 5重量％、25重量％、50 重量％、75重量％、87. 5重量％、93. 75重量％、96. 875重量％、98. 4375重量％
[0015] 在本發明的一個優選實例中，所述標準混合物中膽固醇和維生素 D3重量比為1 : 1〇
[0016] 在本發明的一個優選實例中，所述方法包括如下步驟：
[0017] (1)提供不同膽維丁含量的膽維丁、膽固醇和維生素 D3的標準混合物；
[0018] (2)提供上述標準混合物的X衍射光譜；
[0019] (3)基于上述標準混合物的膽維丁含量以及X衍射光譜中2 Θ = 4. 0°的衍射峰 高度提供線性回歸方程；
[0020] (4)提供膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物的X衍射光譜；以及
[0021] (5)基于所述線性回歸方程和膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物的X衍射光譜 中2Θ =4.0°的衍射峰高度確定膽維丁的含量；
[0022] 在本發明的一個優選實例中，所述方法包括如下步驟：
[0023] (1)提供不同膽維丁含量的膽維丁、膽固醇和維生素 D3的標準混合物；
[0024] (2)提供上述標準混合物的X衍射光譜；
[0025] (3)基于上述標準混合物的膽維丁含量以及X衍射光譜中2 Θ = 4. 0°的衍射峰 面積提供線性回歸方程；
[0026] (4)提供膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物的X衍射光譜；以及
[0027] (5)基于所述線性回歸方程和膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物的X衍射光譜 中2Θ =4.0°的衍射峰面積確定膽維丁的含量；
[0028] 在本發明的一個優選實例中，所述方法包括如下步驟：
[0029] (1)提供不同膽維丁含量的膽維丁、膽固醇和維生素 D3的標準混合物；
[0030] (2)提供上述標準混合物的X衍射光譜；
[0031] (3)基于上述標準混合物的膽維丁含量以及X衍射光譜中2 Θ = 8. 0°的衍射峰 高度提供線性回歸方程；
[0032] (4)提供膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物的X衍射光譜；以及
[0033] (5)基于所述線性回歸方程和膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物的X衍射光譜 中2Θ =8.0°的衍射峰高度確定膽維丁的含量。
[0034] 在本發明的一個優選實例中，所述方法步驟如下步驟：
[0035] (1)提供不同膽維丁含量的膽維丁、膽固醇和維生素 D3的標準混合物；
[0036] (2)提供上述標準混合物的X衍射光譜；
[0037] (3)基于上述標準混合物的膽維丁含量以及X衍射光譜中2 Θ = 8. 0°的衍射峰 面積提供線性回歸方程；
[0038] (4)提供膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物的X衍射光譜；以及
[0039] (5)基于所述線性回歸方程和膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物的X衍射光譜 中2Θ =8.0°的衍射峰面積確定膽維丁的含量。
[0040] 在本發明的一個優選實例中，所述方法還可以包括如下步驟：
[0041] 提供膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物的拉曼光譜的預檢測步驟。
[0042] 本發明還有一方面提供了一種定性檢測膽維丁的方法，所述方法包括如下步驟：
[0043] (1)提供樣品；
[0044] (2)提供樣品的拉曼光譜；以及
[0045] (3)以及基于拉曼光譜中是否存在1640cm 1的特征峰來判斷是否存在膽維丁。
[0046] 在本發明的一個優選實例中，所述拉曼光譜是在掃描光線的強度為1-100、優選為 100的條件下得到的；或者，所述拉曼光譜是在掃描時間為500毫秒-30秒、優選為6-10秒 的條件下得到的。
[0047] 本發明的檢測方法相比現有檢測方法來說可以準確、穩定的檢測膽維丁及其含 量。
【附圖說明】
[0048] 圖1為衍射峰的選擇。
[0049] 圖2為膽維丁含量與峰高線性回歸方程圖（2 Θ~4. 0° )-方程A。
[0050] 圖3為膽維丁含量與峰面積線性回歸方程圖（2 Θ~4.0° )-方程B。
[0051] 圖4為膽維丁含量與峰高線性回歸方程圖（2 Θ~8.0° )-方程C。
[0052] 圖5為膽維丁含量與峰面積線性回歸方程圖（2 Θ~8.0° )-方程D。
【具體實施方式】
[0053] 在本發明中，如果沒有特別的說明，百分數（％)或者份都指相對于組合物的重量 百分數或者重量份。
[0054] 在本發明中，如果沒有特別的說明，所涉及的各組分或其優選組分可以相互組合 形成新的技術方案。
[0055] 在本發明中，如果沒有特別的說明，本文所提到的所有實施方式以及優選實施方 式可以相互組合形成新的技術方案。
[0056] 在本發明中，如果沒有特別的說明，本文所提到的所有技術特征以及優選特征可 以相互組合形成新的技術方案。
[0057] 在本發明中，如果沒有相反的說明，組合物中各組分的含量之和為100%。
[0058] 在本發明中，如果沒有相反的說明，組合物中各組分的份數之和可以為100重量 份。
[0059] 在本發明中，除非有其他說明，數值范圍"a-b"表示a到b之間的任意實數組合的 縮略表示，其中a和b都是實數。例如數值范圍"0-5"表示本文中已經全部列出了 "0-5" 之間的全部實數，" 0-5 "只是這些數值組合的縮略表示。
[0060] 在本發明中，除非有其他說明，整數數值范圍"a-b"表示a到b之間的任意整數組 合的縮略表示，其中a和b都是整數。例如整數數值范圍"1-N"表示1、2……N，其中N是 整數。
[0061] 在本發明中，除非有其他說明，"其組合"表示所述各元件的多組分混合物，例如兩 種、三種、四種以及直到最大可能的多組分混合物。
[0062] 如果沒有特別指出，本說明書所用的術語"一種"指"至少一種"。
[0063] 如果沒有特別指出，本發明所述的百分數（包括重量百分數）的基準都是所述組 合物的總重量。
[0064] 本文所公開的"范圍"以下限和上限的形式。可以分別為一個或多個下限，和一個 或多個上限。給定范圍是通過選定一個下限和一個上限進行限定的。選定的下限和上限限 定了特別范圍的邊界。所有可以這種方式進行限定的范圍是包含和可組合的，即任何下限 可以與任何上限組合形成一個范圍。例如，針對特定參數列出了 60 - 120和80 - 110的 范圍，理解為60 - 110和80 - 120的范圍也是預料到的。此外，如果列出的最小范圍值1 和2,和如果列出了最大范圍值3,4和5,則下面的范圍可全郃預料到：1 一 3、1 一 4、1 一 5、 2 - 3、2 - 4、和 2 - 5〇
[0065] 在本文中，除非另有說明，各步驟都在常溫常壓下進行。
[0066] 在本文中，除非另有說明，各個反應步驟可以順序進行，也可以不按順序進行。例 如，各個步驟之間可以包含其他步驟，而且步驟之間也可以調換順序。優選地，本文中的反 應方法是順序進行的。
[0067] 本發明的發明人將膽維丁（DWD)、膽固醇（DGC)、維生素 D3 (WSS-D3)的XRPD圖譜 放在一起進行比較，如圖1所示。結果發現膽維丁的衍射峰中未與膽固醇、維生素 D3的 衍射峰未發生重疊的衍射峰有主要有2Θ~4.0°的衍射峰和2Θ~8.0°的衍射峰，且 2Θ~4.0°的衍射峰為膽維丁的最強衍射峰，2Θ~8.0°的衍射峰為膽維丁的較強衍射 峰，故可以選擇2 Θ~4.0°和2 Θ~8.0°的衍射峰作為膽維丁的特征衍射峰對其進行含 量分析。基于上述發現，發明人提出了下述發明。
[0068] 本發明一方面提供了一種測定膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物中膽維丁含 量的方法，所述方法包括如下步驟：
[0069] (1)提供不同膽維丁含量的膽維丁、膽固醇和維生素 D3的標準混合物；
[0070] (2)提供上述標準混合物的X衍射光譜；
[0071] (3)基于上述標準混合物的膽維丁含量以及X衍射光譜中2 Θ = 4. 0°或8. 0°的 衍射峰高度或面積提供線性回歸方程；
[0072] (4)提供膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物的X衍射光譜；以及
[0073] (5)基于所述線性回歸方程和膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物的X衍射光譜 中2 Θ = 4. 0°或8. 0°的衍射峰高度或面積確定膽維丁的含量。
[0074] 在本發明的一個優選實例中，所述標準混合物中膽維丁含量為1-99重量％。優選 地，所述標準混合物中膽維丁含量為1. 5625-98. 4375重量％。在本發明的另一個優選實 例中，所述標準混合物中膽維丁的含量分別為1. 5625重量％、3. 125重量％、6. 25重量％、 12. 5重量％、25重量％、50重量％、75重量％、87. 5重量％、93. 75重量％、96. 875重量％、 98. 4375 重量 ％
[0075] 在本發明的一個優選實例中，所述標準混合物中膽固醇和維生素 D3重量比為1 : 1〇
[0076] 在本發明的一個優選實例中，基于X衍射光譜中2 Θ = 4.0°或8.0°的衍射峰高 度或面積提供線性回歸方程。優選地，基于X衍射光譜中2Θ =4.0°的衍射峰高度提供 線性回歸方程。優選地，基于X衍射光譜中2Θ =4.0°的衍射峰面積提供線性回歸方程。 優選地，基于X衍射光譜中2Θ =8.0°的衍射峰高度提供線性回歸方程。優選地，基于X 衍射光譜中2Θ =8.0°的衍射峰面積提供線性回歸方程。
[0077] 在本發明中，所述步驟（5)中選取的衍射峰與線性回歸方程中選取的衍射峰相 同。優選地，所述步驟（5)中選取的衍射峰高度或面積與線性回歸方程中選取的衍射峰高 度或面積相同。
[0078] 在本發明的一個優選實例中，所述方法包括如下步驟：
[0079] (1)提供不同膽維丁含量的膽維丁、膽固醇和維生素 D3的標準混合物；
[0080] (2)提供上述標準混合物的X衍射光譜；
[0081] (3)基于上述標準混合物的膽維丁含量以及X衍射光譜中2 Θ = 4. 0°的衍射峰 高度提供線性回歸方程；
[0082] (4)提供膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物的X衍射光譜；以及
[0083] (5)基于所述線性回歸方程和膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物的X衍射光譜 中2Θ =4.0°的衍射峰高度確定膽維丁的含量。
[0084] 在本發明的另一個優選實例中，所述方法包括如下步驟：
[0085] (1)提供不同膽維丁含量的膽維丁、膽固醇和維生素 D3的標準混合物；
[0086] (2)提供上述標準混合物的X衍射光譜；
[0087] (3)基于上述標準混合物的膽維丁含量以及X衍射光譜中2 Θ = 4. 0°的衍射峰 面積提供線性回歸方程；
[0088] (4)提供膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物的X衍射光譜；以及
[0089] (5)基于所述線性回歸方程和膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物的X衍射光譜 中2Θ =4.0°的衍射峰面積確定膽維丁的含量。
[0090] 在本發明的另一個優選實例中，所述方法包括如下步驟：
[0091] (1)提供不同膽維丁含量的膽維丁、膽固醇和維生素 D3的標準混合物；
[0092] (2)提供上述標準混合物的X衍射光譜；
[0093] (3)基于上述標準混合物的膽維丁含量以及X衍射光譜中2 Θ = 8. 0°的衍射峰 高度提供線性回歸方程；
[0094] (4)提供膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物的X衍射光譜；以及
[0095] (5)基于所述線性回歸方程和膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物的X衍射光譜 中2Θ =8.0°的衍射峰高度確定膽維丁的含量。
[0096] 在本發明的另一個優選實例中，所述方法步驟如下步驟：
[0097] (1)提供不同膽維丁含量的膽維丁、膽固醇和維生素 D3的標準混合物；
[0098] (2)提供上述標準混合物的X衍射光譜；
[0099] (3)基于上述標準混合物的膽維丁含量以及X衍射光譜中2 Θ = 8. 0°的衍射峰 面積提供線性回歸方程；
[0100] (4)提供膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物的X衍射光譜；以及
[0101] (5)基于所述線性回歸方程和膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物的X衍射光譜 中2Θ =8.0°的衍射峰面積確定膽維丁的含量。
[0102] 本發明的發明人還發現維生素 D3在拉曼位移1650cm1位置明顯出峰，膽固醇在 拉曼位移1440cm1、1675cm 1位置明顯出峰，膽維丁在拉曼位移1640cm 1位置明顯出峰。因 此，通過觀察拉曼圖譜可以快速鑒定膽維丁。當拉曼圖譜中拉曼位移1640cm1位置出峰明 顯，而在1650cm 1位置和1440cm \l675cm1位置沒有出峰，可以鑒定樣品為膽維丁。當在 1650cm1位置和1440cm \l675cm1位置出峰明顯，而在拉曼位移1640cm 1位置沒有明顯出 峰，就是樣品中不含有膽維丁，樣品為膽固醇和維生素 D3的混合物。
[0103] 因此，本發明的上述方法還可以包括如下步驟：
[0104] 提供膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物的拉曼光譜的預檢測步驟。
[0105] 本發明還有一方面提供了一種定性檢測膽維丁的方法，所述方法包括如下步驟：
[0106] (1)提供樣品；
[0107] ⑵提供樣品的拉曼光譜；以及
[0108] (3)以及基于拉曼光譜中是否存在1640cm 1的特征峰來判斷是否存在膽維丁。
[0109] 在本發明的一個優選實例中，所述提供樣品的步驟如下：平鋪樣品厚度為0. 3毫 米-3厘米，較好1-2厘米，最好1厘米。
[0110] 在本發明的一個優選實例中，所述提供樣品的步驟如下：平鋪面積至少為〇. 5平 方厘米。最好為1平方厘米左右。
[0111] 在本發明的一個優選實例中，所述拉曼光譜是在掃描光線的強度為1-1〇〇、優選為 100的條件下得到的。
[0112] 在本發明的一個優選實例中，所述拉曼光譜是在掃描時間為500毫秒-30秒、優選 為6-10秒的條件下得到的。
[0113] 下面結合實施例進一步說明本發明，它們對本發明提供說明但本發明并不限于 此。
[0114] 實施例
[0115] 樣品與試劑：膽維丁（批號：20131016生產企業：上海信誼藥廠有限公司藥物研 究所）；
[0116] 維生素 D3(批號：20130104生產企業：四川玉馨）
[0117] 膽固醇（批號：20131010,上海信誼藥廠有限公司）；
[0118] 儀器與設備：粉末X射線衍射儀德國Bruker AXS儀器有限公司，儀器型號： D8ADVANCE。
[0119] 實施例1 :線性關系考察
[0120] 取相同質量的膽固醇和維生素 D3混合均勻，制成DSC:WSS_D3 = 1:1的混合物 ⑴。
[0121] 按制劑混合規則，將膽維丁與混合物（1)配制成膽維丁含量分別為1. 5625%、 3.125%、6.25%、12.5%、25%、50%、75%、87.5%、93.75%、96.875%、98.4375%的混合 樣品。
[0122] 取上述混合樣品各50mg(每個含量平行3次），進行XRPD實驗，記錄XRPD圖譜。
[0123] 1方程A(膽維丁含量與2 Θ~4. 0°處的峰高值線性回歸方程）
[0124] 以膽維丁含量為橫坐標（X)，2 Θ~4. 0°的衍射峰峰高度（Y)為縱坐標進行線性 回歸，得方程A，結果見表1，圖2。
[0125] 表1膽維丁含量與峰高線性考察結果（2 Θ~4. 0° )-方程A
[0126]
[0127]
[0128] 2方程B(膽維丁含量與2 Θ~4. 0°處的峰面積值線性回歸方程）
[0129] 以膽維丁含量為橫坐標（X)，2 Θ~4. 0°的衍射峰峰面積（Y)為縱坐標進行線性 回歸，得方程B，結果見表2,圖3。
[0130] 表2膽維丁含量與峰面積線性考察結果（2 Θ~4. 0° )-方程B
[0131]
[0132]
[0133] 3方程C(膽維丁含量與2Θ~8.0°處的峰高值線性回歸方程）
[0134] 以膽維丁含量為橫坐標（X)，2 Θ~8. 0°的衍射峰峰高度（Υ)為縱坐標進行線性 回歸，得方程C，結果見表3,圖4。
[0135] 表3膽維丁含量與峰高線性考察結果（2 Θ~8. 0° )-方程C
[0136]
[0137]
[0138] 4方程D(膽維丁含量與2 Θ~8. 0°處的峰面積值線性回歸方程）
[0139] 以膽維丁含量為橫坐標（X)，2 Θ~8. 0°的衍射峰峰面積（Y)為縱坐標進行線性 回歸，得方程D，結果見表4,圖5。
[0140] 表4膽維丁含量與峰面積線性考察結果（2 Θ~8. 0° )-方程D
[0141]
[0142]
[0143] 實施例2 :精密度
[0144] 低含量（25% )樣品：配置膽維丁含量為25%的樣品，從中取6份50mg的樣品進 行XRH)實驗。
[0145] 中含量（50% )樣品：配置膽維丁含量為50%的樣品，從中取6份50mg的樣品進 行XRH)實驗。
[0146] 高含量（75% )樣品：配置膽維丁含量為75%的樣品，從中取6份50mg的樣品進 行XRH)實驗。
[0147] 1.方程A的精密度
[0148] 讀取2 Θ~4.0°的衍射峰峰高值進行精密度考察結果見表5.
[0149] 表5.方程A的精密度實驗結果
[0150]
[0151]
[0152] 2.方程B的精密度
[0153] 讀取2 Θ~4.0°的衍射峰峰面積值進行精密度考察結果見表6.
[0154] 表6.方程B的精密度實驗結果
[0155]
[0156]
[0157] 3.方程C的精密度
[0158] 讀取2 Θ~8.0°的衍射峰峰高值進行精密度考察結果見表7.
[0159] 表7.方程C的精密度實驗結果
[0160]
[0161] 4.方程D的精密度
[0162] 讀取2 Θ~8.0°的衍射峰峰面積值進行精密度考察結果見表8.
[0163] 表8.方程D的精密度實驗結果
[0164]
[0165]
[0166] 實施例3:準確度
[0167] 低含量（25% )樣品：平行配置膽維丁含量為25%的樣品6份，每份各取50mg的 樣品進彳丁 XRPD實驗。
[0168] 中含量（50% )樣品：平行配置膽維丁含量為50%的樣品6份，每份各取50mg的 樣品進彳丁 XRPD實驗。
[0169] 高含量（75% )樣品：平行配置膽維丁含量為75%的樣品6份，每份各取50mg的 樣品進彳丁 XRPD實驗。
[0170] 1.方程A的準確度
[0171] 讀取2 Θ~4.0°的衍射峰峰高值進行準確度考察結果見表9。
[0172] 表9.方程A的準確度實驗結果
[0173]
[0174]
[0175] 2.方程B的準確度
[0176] 讀取2 Θ~4.0°的衍射峰峰面積值進行準確度考察結果見表10。
[0177] 表10.方程B的準確度實驗結果
[0178]
[0179]
[0180] 3.方程C的準確度
[0181] 讀取2 Θ~8.0°的衍射峰峰高值進行準確度考察結果見表11。
[0182] 表11.方程C的重復性實驗結果
[0183]
[0184] 4.方程D的準確度
[0185] 讀取2 Θ~8.0°的衍射峰峰面積值進行準確度考察結果見表11。
[0186] 表11.方程D的準確度實驗結果
[0187]
[0188]
[0189] 實施例4:穩定性
[0190] 配置膽維丁含量為95%的樣品1份，取50mg，分別于0h、3h、6h、12h、24h進行XRPD 試驗。
[0191] 1.方程A的穩定性
[0192] 讀取2 Θ~4.0°的衍射峰峰高值進行方程A的樣品穩定性考察，結果見表12。
[0193] 表12.方程A的穩定性實驗結果
[0194]
[0195] 2.方程B的穩定性
[0196] 讀取2 Θ~4.0°的衍射峰峰面積值進行方程B的樣品穩定性考察，結果見表13.
[0197] 表13.方程B的穩定性實驗結果
[0198]
[0199] 3.方程C的穩定性
[0200] 讀取2 Θ~8.0°的衍射峰峰高值進行方程A的樣品穩定性考察，結果見表14。
[0201] 表14.方程C的穩定性實驗結果
[0202]
[0203] 4.方程D的穩定性
[0204] 讀取2 Θ~8. 0°的衍射峰峰面積值進行方程D的樣品穩定性考察，結果見表15。
[0205] 表15.方程D的穩定性實驗結果
[0206]
[0207] 實施例5 :方向學驗證信息匯總
[0208] 本實施例按制劑混合規則，制備了膽維丁含量分別為1. 5625%、3. 125%、6. 25%、 12. 5 %、25 %、50 %、75 %、87· 5 %、93· 75 %、96· 875 %、98· 4375 % 的混合樣品。選取 2 Θ~4. 0°和2 Θ~8. 0°兩個衍射峰作為膽維丁的特征峰，分別以其峰高值和峰面積值 進行線性方程考察，得到了 A、B、C、D4個回歸方程，并對四個方程進行了精密度、準確度、樣 品穩定性考察，結果見表16。
[0209] 表16.方法學驗證信息匯總表
[0210]
[0211] 經上述比較發現，方程A的線性相關系數為R2 = 0. 997,為四個方程中最又，方程 C的線性相關系數為R2 = 0. 991為4個方程中最差。在精密度、準確度、穩定性的方面，方 程A和方程C的RSD值最大值均小于4 %，方程B的RSD值最大值為4. 23 %、方程D的RSD 值最大值達到8. 31 %。穩定性方面，4個方程的RSD值均小于2 %。綜上所述，最終采用方 程A(即：橫坐標為膽維丁含量，縱坐標為2Θ~4.0°處衍射峰的峰高值的線性回歸方程） 對混合樣品中膽維丁含量進行分析。
[0212] 實施例6 :樣品檢測結果（回收率）
[0213] 20%含量樣品：平行配置膽維丁含量為20%的樣品5份，每份各取50mg的樣品進 行XRH)實驗。
[0214] 75%含量樣品：平行配置膽維丁含量為75%的樣品5份，每份各取50mg的樣品進 行XRH)實驗。
[0215] 90%含量樣品：平行配置膽維丁含量為90%的樣品5份，每份各取50mg的樣品進 行XRH)實驗。
[0216] 讀取2 Θ~4.0°的衍射峰峰高值進行代入線性回歸方程A，計算混合樣品總膽維 丁的含量及回收率，見表17。
[0217] 表17.方程A的樣品測試（回收率）實驗結果
[0218]
[0219] 實驗結果表明：采用方程A對膽維丁含量為20%、75%、90%的樣品進行測試時， 含量為20%的樣品回收率最小值為92. 65%、最大值為100. 37%，RSD值為4. 56% ;含量為 75%的樣品回收率最小值為101. 88%、最大值為107. 23%，RSD值為2.03% ;含量為90% 的樣品回收率最小值為97. 25%、最大值為102. 28%，RSD值為2. 07% ;同一含量的RSD值 均小于5%。
[0220] 實施例7 :測定膽維丁穩定性樣品的含量
[0221] 分別取待測膽維丁樣品1、樣品2、樣品3、樣品4、樣品5、樣品6適量，分別研磨 過100目篩，稱取過篩后的樣品50mg，儀器參數調到測角儀半徑為600_，數據收集范圍為 2Θ = 3.0-45.0°，掃描速度為每分鐘8.0°，進行粉末X射線衍射測定，讀取2Θ~4.0° 處的衍射峰峰高值，乘以儀器校正因子后，代入線性回歸方程：Y = 20435X-23. 87,即X = (Υ+23. 87)/20435,計算待測樣品中膽維丁含量，每個待測樣品平行測定2次，取平均值。
[0222] 為了方便結果比較，將上述結果列表比較如下表所示：
[0223]
【主權項】
1. 一種測定膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物中膽維丁含量的方法，所述方法包括 如下步驟： (1) 提供不同膽維丁含量的膽維丁、膽固醇和維生素 D3的標準混合物； (2) 提供上述標準混合物的X衍射光譜； (3) 基于上述標準混合物的膽維丁含量以及X衍射光譜中2 Θ = 4.0°或8.0°的衍射 峰高度或面積提供線性回歸方程； (4) 提供膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物的X衍射光譜；以及 (5) 基于所述線性回歸方程和膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物的X衍射光譜中 2Θ =4.0°或8.0°的衍射峰高度或面積確定膽維丁的含量。2. 如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述標準混合物中膽維丁含量為1-99重 量％ ;優選地，所述標準混合物中膽維丁含量為1. 5625-98. 4375重量％ ;優選地，所述標準 混合物中膽維丁的含量分別為1. 5625重量％、3. 125重量％、6. 25重量％、12. 5重量％、25 重量％、50重量％、75重量％、87.5重量％、93.75重量％、96.875重量％、98.4375重量％。3. 如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述標準混合物中膽固醇和維生素 D3重量 比為1 :1。4. 如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟： (1) 提供不同膽維丁含量的膽維丁、膽固醇和維生素 D3的標準混合物； (2) 提供上述標準混合物的X衍射光譜； (3) 基于上述標準混合物的膽維丁含量以及X衍射光譜中2Θ =4.0°的衍射峰高度 提供線性回歸方程； (4) 提供膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物的X衍射光譜；以及 (5) 基于所述線性回歸方程和膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物的X衍射光譜中 2Θ =4.0°的衍射峰高度確定膽維丁的含量。5. 如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟： (1) 提供不同膽維丁含量的膽維丁、膽固醇和維生素 D3的標準混合物； (2) 提供上述標準混合物的X衍射光譜； (3) 基于上述標準混合物的膽維丁含量以及X衍射光譜中2Θ =4.0°的衍射峰面積 提供線性回歸方程； (4) 提供膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物的X衍射光譜；以及 (5) 基于所述線性回歸方程和膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物的X衍射光譜中 2Θ =4.0°的衍射峰面積確定膽維丁的含量。6. 如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟： (1) 提供不同膽維丁含量的膽維丁、膽固醇和維生素 D3的標準混合物； (2) 提供上述標準混合物的X衍射光譜； (3) 基于上述標準混合物的膽維丁含量以及X衍射光譜中2Θ =8.0°的衍射峰高度 提供線性回歸方程； (4) 提供膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物的X衍射光譜；以及 (5) 基于所述線性回歸方程和膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物的X衍射光譜中 2Θ =8.0°的衍射峰高度確定膽維丁的含量。7. 如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法步驟如下步驟： (1) 提供不同膽維丁含量的膽維丁、膽固醇和維生素 D3的標準混合物； (2) 提供上述標準混合物的X衍射光譜； (3) 基于上述標準混合物的膽維丁含量以及X衍射光譜中2Θ =8.0°的衍射峰面積 提供線性回歸方程； (4) 提供膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物的X衍射光譜；以及 (5) 基于所述線性回歸方程和膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物的X衍射光譜中 2Θ =8.0°的衍射峰面積確定膽維丁的含量。8. 如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法還可以包括如下步驟： 提供膽維丁、膽固醇和維生素 D3的混合物的拉曼光譜的預檢測步驟。9. 一種定性檢測膽維丁的方法，所述方法包括如下步驟： (1) 提供樣品； (2) 提供樣品的拉曼光譜；以及 (3) 以及基于拉曼光譜中是否存在1640cm1的特征峰來判斷是否存在膽維丁。10. 如權利要求9所述的方法，其特征在于，所述拉曼光譜是在掃描光線的強度為 1-100、優選為100的條件下得到的；或者，所述拉曼光譜是在掃描時間為500毫秒-30秒、 優選為6-10秒的條件下得到的。
【文檔編號】G01N21/65GK106033064SQ201510106721
【公開日】2016年10月19日
【申請日】2015年3月10日
【發明人】戴健, 孫寧云, 沈康寧, 陳磊, 姜玲
【申請人】上海信誼藥廠有限公司