一種新型組織切片的免疫組化操作方法
【專利摘要】本發明公開了一種新型組織切片的免疫組化操作方法，包括以下步驟：1）封閉內源性過氧化氫酶：采用0.3%過氧化氫甲醇浸泡30分鐘；2）染色：采用蘇木素染色2分鐘；3）滴加I抗：滴加I抗50ul，室溫靜置40分鐘?1小時；4）滴加II抗：滴加II抗40—50ul，室溫下靜置或37℃1小時。本發明所采用的技術方案改變了常規操作步驟為在滴加I抗、II抗之前采用蘇木素染色，利于滴加I抗、II抗后抗體顯色。本發明操作步驟簡單，僅對現有操作步驟的操作順序及采用的試劑、操作的時間進行改變，即可實現現有操作效果的改變，染色后滴入抗體，便于把握組織的大小和位置。
【專利說明】
一種新型組織切片的免疫組化操作方法
技術領域
[0001]本發明涉及實驗室檢驗分析方法，具體涉及一種新型組織切片的免疫組化操作方法。【背景技術】
[0002]免疫組化是應用免疫學抗原抗體反應原理，即抗原與抗體特異性反應原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑如熒光素、酶、金屬離子、同位素等顯色來確定反應組織細胞內抗原，對其進行定位、定性及定量的研究。
[0003]而對于免疫組化操作，實驗人員在操作過程中經常遇到組織切片修復處理后沒有顏色，在進行滴加I抗、II抗時，不知道具體滴加的位置和組織，只能采取大面積滴加，從而導致滴加的結果不準確，不能對組織細胞內的抗原進行定位，也無法開展后續的定性、定量研究操作。
[0004]因此，一個免疫組化實驗要經過多次操作，并且對整個實驗操作可能影響實驗結構的環節進行一一排除，工作量大，極大的降低了工作效率。
[0005]基于此，實驗室研發人員在多次問題的實踐操作中設計了一種新型組織切片的免疫組化操作方法。
【發明內容】
[0006]本發明所要解決的技術問題是:操作人員采用現有組織切片的操作方法，在滴加抗體時無法把握滴加的位置。現提供一種新型組織切片的免疫組化操作方法，通過調整現有操作方法的操作步驟，解決了免疫組化操作滴加抗體時，工作效率低，滴加結果不準確等技術問題。
[0007]本發明的通過下述技術方案實現:一種新型組織切片的免疫組化操作方法，包括以下操作步驟:。
[0008]1)封閉內源性過氧化氫酶:采用0.3%過氧化氫甲醇浸泡30分鐘；2)染色:采用蘇木素染色2分鐘；3 )滴加I抗:滴加I抗50u 1，室溫靜置40分鐘-1小時；4)滴加II抗:滴加II抗40—50ul，室溫下靜置或37 °C下靜置1小時。
[0009]現有實驗室進行免疫組化操作方法的步驟一般包括切片、拷片、脫蠟、修復、內源性酶阻斷、滴I抗、滴II抗、顯色、復染、封片，而采用該操作方法滴加抗體，結果組織切片幾乎透明，難以肉眼觀察，且很難把握滴加抗體時的的位置和抗體的量，需要使用更多的試劑，同時導致整個操作過程的結構不準確。
[0010]發明人針對現有的操作方法進行反復試驗操作，發現采用本發明技術方案，改變操作步驟在內源性酶阻斷操作與滴加I抗、II抗之間增加染色操作步驟，可消除內源性酶的活性，同時便于后續滴加I抗、II抗后抗體顯色，從而確定組織細胞內抗原，對抗原進行定位、定性及定量研究。
[0011]進一步地，步驟1)在對組織切片進行封閉內源性過氧化氫酶的操作前還包括對組織切片進行切片、拷片、脫蠟、水化操作。所述切片、拷片、脫蠟、水化操作步驟均為對組織切片進行封閉內源性過氧化氫酶操作前需進行的操作。
[0012]進一步地，所述拷片具體操作方法為將組織切片在60°C下烘烤10—15分鐘。
[0013]進一步地，所述水化的具體操作方法為:將組織切片置于二甲苯中浸泡8分鐘，更換二甲苯后再浸泡8分鐘，然后依次在無水乙醇、95%乙醇、70%乙醇中分別浸泡10分鐘。
[0014]進一步地，所述步驟1)封閉內源性過氧化氫酶操作中，對組織切片依次采用蒸餾水清洗6分鐘，PBS漂洗6分鐘。[〇〇15]進一步地，所述步驟4)中所加入的II抗為生物素化II抗，在37°C下靜置40分鐘。 進一步地，所述步驟7)加入II抗后用PBS漂洗6分鐘。[〇〇16]進一步地，所述步驟4)中所加入的II抗為生物素化II抗，在37°C下靜置40分鐘。 [〇〇17] 進一步地，所述步驟4)滴加II抗后還包括滴加III抗，滴加溫度為37°C，滴入后靜置40分鐘。[〇〇18]進一步地，所述步驟4)滴加II抗與滴加III抗的操作步驟之間還包括采用PBS緩沖液對組織切片沖洗，共清洗3次，每次4分鐘。[〇〇19] 進一步地，所述的組織切片滴加III抗后還包括采用DAB顯色劑顯色操作步驟。 [〇〇2〇] 進一步地，所述DAB顯色劑的濃度為25mg/ml，其由250mgDAB和lOmlPBS配制而成。
[0021]本發明與現有技術相比，具有如下的優點和有益效果:(1)本發明所采用的技術方案改變了常規操作步驟在滴加I抗、II抗之前采用蘇木素染色，利于滴加I抗、II抗后抗體顯色。[〇〇22](2)本發明操作步驟簡單，僅對現有操作步驟的操作順序及采用的試劑、操作的時間進行改變，即可實現現有操作效果的改變，染色后滴入抗體，便于把握組織的大小和位置。[〇〇23](3)本發明方法簡單，操作方便，且能有效的解決實驗檢驗分析中一些技術細節問題，利于實驗規范操作，具有較強的實際應用價值，且能夠避免實驗試劑的浪費，也盡量減少了實驗中的一些誤差。【具體實施方式】[〇〇24]為使本發明的目的、技術方案和優點更加清楚明白，下面結合實施例，對本發明作進一步的詳細說明，本發明的示意性實施方式及其說明僅用于解釋本發明，并不作為對本發明的限定。[〇〇25] 實施例1:一種新型組織切片的免疫組化操作方法，包括以下操作步驟:1)封閉內源性過氧化氫酶:采用〇.3%過氧化氫甲醇浸泡30分鐘；2)染色:采用蘇木素染色2分鐘；3)滴加I抗:滴加I抗50ul，室溫靜置40分鐘；4)滴加II抗:滴加II抗40—50ul，室溫下靜置。
[0026]本實施例中所未涉及的對組織切片的切片、拷片、脫蠟、水化、抗原修復、顯色、封片等其他常規實驗操作步驟內容為本領域的公知常識，不再贅述。
[0027] 實施例2:一種新型組織切片的免疫組化操作方法，包括以下操作步驟:1)切片、拷片:將組織切片在60°C下烘烤20min;2)脫蠟和水化:將組織切片置于二甲苯中浸泡10分鐘，更換二甲苯后再浸泡10分鐘，然后依次在無水乙醇、95%乙醇、70%乙醇中分別浸泡5分鐘；3)封閉內源性過氧化氫酶:采用0.3%過氧化氫甲醇浸泡30分鐘，然后依次采用蒸餾水清洗6分鐘，PBS漂洗6分鐘；4)染色:采用蘇木素染色2分鐘后用鹽酸酒精分化；5 )滴加I抗:滴加I抗50u 1，室溫靜置1小時或4 °C過夜或37 °C 1小時；6)滴加II抗:滴加II抗50u 1，37°C 1小時；7)滴加III抗，滴加溫度為37°C，滴入后靜置40分鐘。[〇〇28] 實施例3:一種新型組織切片的免疫組化操作方法，包括以下操作步驟:1)切片、拷片:將組織切片在60°C下烘烤20min;2)脫蠟和水化:將組織切片置于二甲苯中浸泡10分鐘，更換二甲苯后再浸泡10分鐘，然后依次在無水乙醇、95%乙醇、70%乙醇中分別浸泡5分鐘；3)封閉內源性過氧化氫酶:采用0.3%過氧化氫甲醇浸泡30分鐘，然后依次采用蒸餾水清洗6分鐘，PBS漂洗6分鐘；4)染色:采用蘇木素染色2分鐘后用鹽酸酒精分化；5 )滴加I抗:滴加I抗50u 1，室溫靜置1小時或4 °C過夜或37 °C 1小時；6)滴加II抗:滴加II抗50u 1，37°C 1小時；7)采用PBS緩沖液對組織切片沖洗，共清洗3次，每次4分鐘。[〇〇29]8)滴加III抗，滴加溫度為37°C，滴入后靜置40分鐘。[〇〇3〇] 實施例4:一種新型組織切片的免疫組化操作方法，包括以下操作步驟:1)切片、拷片:將組織切片在60 °C下烘烤20min;2)脫蠟和水化:將組織切片置于二甲苯中浸泡10分鐘，更換二甲苯后再浸泡10分鐘，然后依次在無水乙醇、95%乙醇、70%乙醇中分別浸泡5分鐘；3)封閉內源性過氧化氫酶:采用0.3%過氧化氫甲醇浸泡30分鐘，然后依次采用蒸餾水清洗6分鐘，PBS漂洗6分鐘；4)染色:采用蘇木素染色2分鐘后用鹽酸酒精分化；5 )滴加I抗:滴加I抗50u 1，室溫靜置1小時或4 °C過夜或37 °C 1小時；6)滴加II抗:滴加II抗50u 1，37°C 1小時；7)采用PBS緩沖液對組織切片沖洗，共清洗3次，每次4分鐘。[〇〇31]8)滴加III抗，滴加溫度為37 °C，滴入后靜置40分鐘；9)顯色:采用DAB顯色劑，常溫下顯色。[〇〇32] 其中DAB顯色劑的濃度為25mg/ml，其由250mgDAB和lOmlPBS配制而成。
[0033]以上所述的【具體實施方式】，對本發明的目的、技術方案和有益效果進行了進一步詳細說明，所應理解的是，以上所述僅為本發明的【具體實施方式】而已，并不用于限定本發明的保護范圍，凡在本發明的精神和原則之內，所做的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。
【主權項】
1.一種新型組織切片的免疫組化操作方法，其特征在于，包括以下步驟:1)封閉內源性過氧化氫酶:采用0.3%過氧化氫甲醇浸泡30分鐘；2)染色:采用蘇木素染色2分鐘；3)滴加I抗:滴加I抗50ul，室溫靜置40分鐘-1小時；4 )滴加II抗:滴加II抗40—50u 1，室溫下靜置或37 °C 1小時。2.根據權利要求1所述的一種新型組織切片的免疫組化操作方法，其特征在于:所述步 驟1)在對組織切片進行封閉內源性過氧化氫酶的操作前還包括對組織切片進行切片、拷 片、脫蠟、水化操作。3.根據權利要求2所述的一種新型組織切片的免疫組化操作方法，其特征在于:所述 拷片具體操作方法為將組織切片在60°C下烘烤10—15分鐘。4.根據權利要求2所述的一種新型組織切片的免疫組化操作方法，其特征在于:所述水 化的具體操作方法為:將組織切片置于二甲苯中浸泡8分鐘，更換二甲苯后再浸泡8分鐘，然 后依次在無水乙醇、95%乙醇、70%乙醇中分別浸泡10分鐘。5.根據權利要求1所述的一種新型組織切片的免疫組化操作方法，其特征在于:所述步 驟1)封閉內源性過氧化氫酶操作中，對組織切片依次采用蒸餾水清洗6分鐘，PBS漂洗6分 鐘。6.根據權利要求1所述的一種新型組織切片的免疫組化操作方法，其特征在于:所述步 驟4)中所加入的II抗為生物素化II抗，在37°C下靜置40分鐘。7.根據權利要求1所述的一種新型組織切片的免疫組化操作方法，其特征在于:所述步 驟4)滴加II抗后還包括滴加III抗，滴加溫度為37°C，滴入后靜置40分鐘。8.根據權利要求7所述的一種新型組織切片的免疫組化操作方法，其特征在于:所述步 驟4)滴加II抗與滴加III抗的操作步驟之間還包括采用PBS緩沖液對組織切片沖洗，共清洗 3次，每次4分鐘。9.根據權利要求8所述的一種新型組織切片的免疫組化操作方法，其特征在于:所述的 組織切片滴加III抗后還包括采用DAB顯色劑顯色操作步驟。10.根據權利要求9所述的一種新型組織切片的免疫組化操作方法，其特征在于:所述 DAB顯色劑的濃度為25mg/ml，其由250mgDAB和lOmlPBS配制而成。
【文檔編號】G01N33/53GK106018781SQ201610334537
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月19日
【發明人】歐陽小峰, 劉葉, 谷和林, 李軍秀
【申請人】四川金域醫學檢驗中心有限公司