一種環境與食品中多種內分泌干擾物的檢測分析方法
【專利摘要】本發明屬于分析化學技術領域，具體涉及一種環境與食品中多種內分泌干擾物的檢測分析方法，該檢測分析方法利用4’?碳酰氯?羅丹明作為衍生試劑，超聲輔助?原位衍生?分散液液微萃取聯合超高效液相色譜三重四極桿質譜檢測的多種內分泌干擾物進行分析。本發明首次使用含有一個分子內永久正電荷的4’?碳酰氯?羅丹明作為衍生試劑，測定23種內分泌干擾物，采用串聯質譜多反應監測模式，結合內標法定量，該方法環境友好、簡單快速、靈敏度高、選擇性好，回收率結果良好，且有效降低了實際樣品的基質干擾。本方法適用于多種環境和食品樣品中內分泌干擾物的檢測分析，對于環境和食品的監督和評價提供了一種準確、可靠的技術手段。
【專利說明】
一種環境與食品中多種內分泌干擾物的檢測分析方法
技術領域
[0001 ]本發明屬于分析化學技術領域，具體涉及一種環境與食品中多種內分泌干擾物的 檢測分析方法，尤其是涉及一種利用4'-碳酰氯-羅丹明作為衍生試劑，超聲輔助-原位衍 生-分散液液微萃取聯合超高效液相色譜三重四極桿質譜檢測的多種內分泌干擾物分析方 法。
【背景技術】
[0002] 內分泌干擾物（Endocrine disruptors chemicals，EDCs)，又稱環境雌激素，是 一類能模擬和干擾人或動物體內雌激素的正常合成、運輸、結合等過程的外源性干擾物質， 主要包括生物體內存在的雌酮(Ε1)、17β-雌二醇(E2)、雌三醇(E3)，以及人工合成的17α-乙 炔雌二醇(ΕΕ2)、己烯雌酚(DES)、烷基酚、雙酚Α(ΒΡΑ)、對羥基苯甲酸酯類、多氯聯苯、多溴 聯苯、二惡英、鄰苯二甲酸酯等相關化合物。近年來，因其分布廣泛，能在極低的濃度產生內 分泌干擾效應，已引起人們的廣泛關注和深入研究。研究結果表明，EDCs與不孕癥，性早熟， 糖尿病，肥胖癥以及前列腺癌，乳腺癌等內分泌失調相關疾病密切相關。
[0003] 但多種內分泌干擾物在環境與食品中的濃度極低，通常為ng/L甚至pg/L，且受環 境復雜基質干擾較大，因此，建立快速、高效的環境與食品前處理技術及儀器分析方法十分 必要。中國專利（CN102043028A)公開了一種利用N，0-雙(三甲基硅基）三氟乙酰胺(BSTFA) 與吡啶作為衍生試劑，通過氣相色譜-質譜聯用儀對雌酮和17β_雌二醇、乙烯雌酚、壬基酚、 辛基酚分析檢測方法，衍生時間長，且衍生試劑易水解，靈敏度低；中國專利 (CN103185762A)利用丹酰氯衍生食品中的雌酮和17β-雌二醇、乙烯雌酚、辛基酚，但該方法 衍生反應溫度高，時間長，且試劑本身及衍生產物易分解。因此，開發一種衍生反應條件溫 和、快速、靈敏度高、多種成分同時檢測的分析方法，對于環境和食品中內分泌干擾物檢測 分析具有十分重要的意義。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的在于克服現有技術存在的不足，首次使用了4'-碳酰氯-羅丹明作為 衍生試劑對內分泌干擾物進行原位衍生，通過內標法定量，建立一種簡單、快速、高靈敏、多 成分同時檢測的超聲輔助-原位衍生-分散液液微萃取聯合超高效液相色譜三重四極桿質 譜檢測的分析方法。利用溴苯作萃取劑，替代了傳統的毒性強的氯代溶劑，具有環境友好的 優點。
[0005] 本發明為了實現上述目的所采用的技術方案為： 本發明提供了一種環境與食品中多種內分泌干擾物的檢測分析方法，所述的內分泌干 擾物通過與衍生劑4'-碳酰氯-羅丹明進行超聲輔助-原位衍生-分散液液微萃取，得到的衍 生化產物經濾膜過濾后利用超高效液相色譜三重四極桿串聯質譜系統進行分析檢測。
[0006] 上述檢測分析方法具體通過以下步驟實現的： a.超聲輔助-原位衍生-分散液液微萃取過程:取10-100 UL標準品混合溶液或待測樣 品，加入30 yL內標物溶液、800-1000 yL pH 8.0-11.5的NaHC03-Na2C03緩沖溶液，加入離 心管中，最后注入60-200 uL萃取劑和200-300 uL 4'-碳酰氯-羅丹明-分散劑溶液，搖勻后 密封，在溫度10-60 °C水浴中超聲波振蕩反應1-5分鐘；離心分離，所得沉積相取出后用乙 腈定容到200 uL，得衍生化產物溶液； 所述內標物溶液是由10 μL濃度為lX10_5mol/L雌酚酮-2,4，16，16-(14、10仙濃度為1 父10-5!11〇1/1雙酚厶-(116和10汕濃度為1\10-5111〇1/1甲基-4-羥基苯甲酸酯-2,3,5,6-(14組 成； 所述的萃取劑為1-溴-3-甲基丁烷，溴環己烷，溴苯和1-溴丁烷； 所述的分散劑為丙酮，乙腈，甲醇或乙醇； b.將步驟a中的衍生化產物溶液經濾膜過濾后利用超高效液相色譜三重四極桿質譜系 統進行定性定量分析檢測。
[0007] 進一步的，所述待測樣品中的內分泌干擾物包括雌酮、17β-雌二醇、雌三醇、17α-乙炔雌二醇、己烯雌酚、壬基酚、辛基酚、雙酚Α、2,2-二(4-羥基苯基)丁烷、4,4'_亞乙基雙 苯酚、4,4二羥基二苯基甲烷、4,4_二羥基二苯砜、六氟雙酸A、4,4'-(l-苯乙基）雙酚、4-溴 雙酚Α、及對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸異丙 酯、對羥基苯甲酸丁酯、對羥基苯甲酸異丁基酯、對羥基苯甲酸芐酯、三氯生。
[0008] 進一步的，步驟a中所述的萃取劑最優化的為溴苯;所述分散劑最優化的為乙腈。
[0009] 進一步的，步驟a所述的4'-碳酰氯-羅丹明-分散劑溶液的摩爾濃度為IX 10-2 mol/L〇
[0010] 本發明所使用的衍生試劑4'-碳酰氯-羅丹明采用以下方法制備而成：將0.922 g 4'_羧基-羅丹明加入30 mL氯化亞砜，滴入0.1 mL N，N-二甲基甲酰胺，磁力攪拌，升溫至50 ~80°C，反應5~6 h，減壓蒸除氯化亞砜，冷卻至室溫，得紫色固體，用乙醚重結晶，得紫色 針狀晶體即為4'-碳酰氯-羅丹明。
[0011]進一步的，步驟a中，所述超聲波頻率為40 KHz。
[0012]本發明所使用的超高效液相色譜三重四極桿串聯質譜系統中色譜分離使用安捷 倫SB C18色譜柱:2.1 mm X 50 mm，1.8 μπι，進樣體積為2 yL，柱溫30°C，采用梯度洗脫法。 [0013] 上述的梯度洗脫法，時間為20 min，流速為0.2 mL/min，流動相A為5%乙腈水溶液 含有0.1%甲酸，流動相B為乙腈含有0.1%甲酸，0 min流動相組成為80%A+20%B，5 min時65%A +35%B，10 min時15%A+85%B，15 min時5%A+95%B，20 min時0%A+100%B。
[0014] 進一步的，所述的超高效液相色譜三重四極桿串聯質譜系統進行分析檢測時的質 譜的條件為:干燥氣溫度300°C，流速10 L/min，噴霧器氣壓40 psi，鞘氣溫度280°C，流速11 L/min，毛細管電壓3.5 kV。
[0015] 本發明流動相中各分數均指體積分數。
[0016] 所述的目標分析物結構式如下所示：
本發明首次使用含有一個分子內永久正電荷的4'-碳酰氯-羅丹明衍生化試劑，因此， 內分泌干擾物通過衍生化反應得到的衍生物進行檢測時能夠特異性的產生含有羅丹明結 構的子離子，帶來顯著的質譜增敏檢測效果。以特征離子對及保留時間進行定性和定量，結 合內標法，帶來了該檢測方法極好的靈敏度、選擇性和準確度，并且大大降低了基質效應。 23種內分泌干擾物和3種內標物中都含有酚羥基，能夠與衍生化試劑4'-碳酰氯-羅丹明迅 速皮應，以雌酮為例，4 碳酰氳-眾丹明作為衍牛化試劑的衍牛化皮應忖趕如下所示：
本發明采用超聲輔助-原位衍生-分散液液微萃取技術提取富集生活廢水、河流沉積 物、魚肉等實際樣品中的內分泌干擾物，具有簡單、快速、高效、綠色等優點。原位衍生化聯 合超聲輔助-分散液液微萃取是一種良好的富集痕量組分、降低基質干擾、提高方法靈敏度 的前處理技術，聯合超高效液相色譜三重四極桿質譜檢測多種內分泌干擾物，具有顯著優 勢。
[0017] 本發明的優點及有益效果： 1.本發明首次使用環境友好的4'-碳酰氯-羅丹明為衍生化試劑，衍生化反應條件溫 和，反應速度快，衍生產物穩定，顯著提高了分析物的色譜分離度和檢測靈敏度。
[0018] 2.本發明所提供的超聲輔助-原位衍生-分散液液微萃取的前處理技術，聯合超 高效液相色譜三重四極桿質譜檢測手段，具有簡單、快速、準確、高靈敏、環境友好的優點。
[0019] 3.本發明的檢測分析方法成功應用于可能含有內分泌干擾物的生活廢水、河流 沉積物、魚肉等多種實際樣品，分析方法適用性好。
【附圖說明】
[0020] 圖1為實施例1中23種內分泌干擾物和3種內標物衍生物的質譜檢測分離圖。
[0021] 圖2為實施例1中雌酮衍生物質譜裂解機理示意圖。
[0022] 圖3為實施例2廢水中內分泌干擾物和內標物的衍生物質譜檢測分離圖譜。
[0023]
【具體實施方式】
[0024] 下面通過實施例對本發明進行進一步的闡述，下述說明僅為了解釋本發明，并不 對其內容進行限定。
[0025]本發明中衍生化萃取物經0.45 μπι濾膜過濾后利用超高效液相色譜三重四極桿串 聯質譜系統進行分析檢測。
[0026]本發明所使用的衍生化試劑4'-碳酰氯-羅丹明合成方法如下:將0.922 g 4'-羧 基-羅丹明（2 mmol，合成方法參考
【申請人】發表的論文Journal of Chromatography A, 2016, 1437: 49-57. ),30.0 mL氯化亞砜加入100 mL單口燒瓶中，滴入0.1 mL Ν,Ν-二甲基 甲酰胺，磁力攪拌，升溫至50~80°C，反應5~6 h，減壓蒸除氯化亞砜，冷卻至室溫，得紫色 固體。用乙醚重結晶，得到0.42 g紫色針狀晶體即為4'-碳酰氯-羅丹明，收率45.5%。
[0027] 實施例1 23種內分泌干擾物和3種內標物的色譜分離和質譜定性定量分析： 23種內分泌干擾物和3種內標物標準品（購自Sigma和Aladdin試劑公司）用乙腈配制 得到濃度為1.0 X ΠΓ5 mol/L的內分泌干擾物標準品溶液，從每個單標儲備液中各取0.2 mL定容至10 mL得到內分泌干擾物的混標儲備液。4'-碳酰氯-羅丹明溶于乙腈得到1.0 X 1(T2 mol/L衍生試劑乙腈溶液;取70 uL標準品溶液置于1.5 mL的離心管中，加入30 uL內標 物溶液（內標物溶液為10 μL濃度為1X10_5 mol/L雌酚酮-2,4，16，16-(14、10燦濃度為1\ 10-5111〇1/1雙酚八-(1 16、10汕濃度為1\10-5111〇1/1甲基-4-羥基苯甲酸酯-2,3,5,6-(14)，加 入1000 1^似!10)3-似20)3(?!19.5)緩沖溶液，隨后立即加入90 1^溴苯(作為萃取劑，當該 處萃取劑改用1-溴-3-甲基丁烷，溴環己烷或1-溴丁烷時，分析物萃取效率處于溴苯做萃取 劑時的40-92%之間）和200 uL摩爾濃度為IX 1(T2 mol/L 4'-碳酰氯-羅丹明-乙腈溶液（乙 腈作為分散劑，當該處分散劑改用丙酮，甲醇或乙醇時，分析物萃取效率處于乙腈做分散劑 時的45-89%之間），漩渦混勻器震蕩5 s使溶液混合均勻。在25 °C超聲振蕩1 min后，高速離 心2 min，轉速12000 r/min。有機相沉積在離心管底部，用微量注射器吸取沉積相轉移至另 一小瓶中，用乙腈定容至200 yL。衍生化產物溶液經有機系濾膜過濾后進樣2 yL，進行 UHPLC-MS/MS(MRM)分析檢測，所述的梯度洗脫法，時間為20 min，流速為0.2 mL/min，流動 相A為5%乙腈水溶液含有0.1%甲酸，流動相B為乙腈含有0.1%甲酸，0 min流動相組成為80%A +20%B，5 min時65%A+35%B，10 min時15%A+85%B，15 min時5%A+95%B，20 min時0%A+100%B; 質譜的條件為:干燥氣溫度300°C，流速10 L/min，噴霧器氣壓40 psi，鞘氣溫度280°C，流速 11 L/min，毛細管電壓3.5 kV。
[0028] 按照上述梯度洗脫程序能得到較好的分離度，圖1為23種內分泌干擾物和3種內標 物衍生物的質譜檢測分離圖，26種分析物之間分離度良好。質譜分析實驗結果表明，23種內 分泌干擾物和3種內標物多反應監測模式(MRM)下產生相同的主要子離子《/z 443.10和《/z 398.10398.10用作定量子離子，ffi/z 443.10用作定性子離子。以雌酮衍生物為例，圖2 為雌酮衍生物質譜裂解機理示意圖，母離子為[M]+聲么695.38能夠產生兩個特異性子離 子ffi/z 443.10和ffi/z 398.10。對11?1模式的參數進行了優化，23種內分泌干擾物和3種內 標物衍生物的定量離子對、定性離子對、最優化碎裂電壓(V)和電離能(V)，以及分析方法的 線性范圍、相關系數、檢出限、定量限見表1。
[0029] 表 1
實施例2 生活廢水中內分泌干擾物的檢測分析，包括以下操作步驟： 取1000 UL生活廢水用0.45 μπι水系濾膜過濾，加HC1調節pH至6.0,然后取100 uL水樣 置于1.5 mL離心管中，加入30 uL內標物溶液（10 uL濃度為lXl(T5m〇l/L雌酚酮_2,4，16， 16-(14、10口1濃度為1\10- 5111〇1/1雙酸厶-(116、10仙濃度為1\10-5111〇1/1甲基-4-羥基苯甲 酸酯-2,3,5,6-(14)，加入800仙恥!10)3-恥20)3(?!111.5)緩沖溶液，并快速注入含200燦 溴苯及300 uL摩爾濃度為1 X l(r2m〇l/L的4'-碳酰氯-羅丹明-乙腈溶液，漩渦混勻器震蕩5 s使溶液混合均勾。在25 °C超聲振蕩1 min后，高速離心2 min，轉速12000 r/min。有機相沉 積在離心管底部，用微量注射器吸取沉積相轉移至另一小瓶中，用乙腈定容至200 uL，按照 上述液相、質譜條件進行UHPLC-MS/MS(MRM)分析。檢測到某生活廢水中內分泌干擾物含量 (n=3)分別為：E1 7.6 ng/L、E2 5.5 ng/L、0P 4.0 ng/L、NP 5.8 ng/L、BPA 21 ng/L、 BPF1.15 ng/L、BPS 0.51 ng/L、BPAF 23.2 ng/L、MeP 1.1 ng/L、iPrP 3.4 ng/L、BuP 62.5 ng/L、iBuP 50.2 ng/L、TCS 72 ng/L，該樣品質譜檢測圖見圖3。
[0030] 實施例3 河流沉積物中內分泌干擾物的檢測，包括以下操作步驟： 參考文獻(Jot/r/jai 〇/ CAroffiaiograjPAj 兒2013，1305: 17-26)，取河流沉積物樣品 0.8 g置于20 mL離心管中，加入3 mL甲醇，進行30 min超聲波提取，離心10 min，過濾，并轉 移上清液到小瓶中，如上所述，殘留物再次萃取;上清液合并旋轉蒸發至1 mL左右，用超純 水定容至10 mL，取90 yL置于1.5 mL離心管中，加入30 yL內標物溶液（10 yL濃度為1X10 -5πιο1/??·_-2,4，16，16-(?4、10μυ^?5*1Χ10- 5πιο1/Ι4Χ·Α-(116、10μυ^?5*1Χ10-5 mol/L甲基-4 -羥基苯甲酸酯-2,3,5,6-d4)，加入900 yL pH 8.0的NaHC03-Na2⑶3緩沖溶 液，并快速注入含120 yLl-溴-3-甲基丁烷及200 uL摩爾濃度為lXl(T2m〇l/L的4'-碳酰 氯-羅丹明-乙腈溶液，漩渦混勻器震蕩5 s使溶液混合均勻；在60 °C超聲振蕩1 min后，高 速離心2 min，轉速12000 r/min。有機相沉積在離心管底部，用微量注射器吸取沉積相轉移 至另一小瓶中，用乙腈定容至200 uL，按照上述液相、質譜條件進行UHPLC-MS/MS(MRM)分 析。檢測到某河底污泥中11種內分泌干擾物含量(n=3)分別為：EE2 0.08 ng/g、0P 1.0 ng/g、NP 2.7 ng/g、BPA 17.6 ng/g、BPF 5.84 ng/g、BPS 2.1 ng/g、BPAF 74.7 ng/g、 TBBPA 1.2 ng/g、MeP 0.19 ng/g、PrP 0.47 ng/g、TCS 2.93 ng/g。
[0031] 實施例4 魚肉中內分泌干擾物的檢測，包括以下操作步驟： 參考文獻兒2013，1305: 17-26)，0.8 g魚肉樣品放入 一個5 mL離心管中，加入1 mL超純水混合，放在在微波爐30 s，之后加入3 mL甲醇，將混合 物超聲萃取30 min。然后在4C高速冷凍離心10 min，在冰箱4C放置1 h后將上清液通過0.45 μπι有機系濾膜過濾去除懸浮脂質。提取物旋轉蒸發至近干，并用超純水稀釋到40 mL。然后 取10 UL倒入1.5 mL離心管中，加入30 yL內標物溶液（10 yL濃度為lX10_5mol/L雌酚酮-2,4，16，16-d4、10 yL濃度為 1X10-5mol/L雙酚A-di6、10 yL濃度為 1X10-5mol/L甲基-4 -羥基苯甲酸酯-2,3,5,6-d4)，加入1000 yL pH 9.5的NaHC03-Na2C03緩沖溶液，并快速注入 含60 uL溴苯及200 uL摩爾濃度為1ΧΠΓ2 mol/L的4'-碳酰氯-羅丹明-乙腈溶液，漩渦混勻 器震蕩5 s使溶液混合均勻。在室溫10 °C下超聲輔助反應5 min后，形成均勻的乳濁液體 系，高速離心2 min，轉速12000 r/min。有機相沉積在離心管底部，用微量注射器吸取沉積 相轉移至另一小瓶中，用乙腈定容至200 nL，按照上述液相、質譜條件進行UHPLC-MS/MS (MRM)分析檢測，未檢測到某魚肉中含有內分泌干擾物。
[0032] 對比例1 該對比例過程與實施例2相同，不同在于衍生化反應過程中，衍生化試劑與衍生條件采 用中國專利(CN103185762A)公開的丹酰氯作為衍生試劑。 對比例2 該對比例過程與實施例2相同，不同在于衍生化反應過程中，衍生化試劑與衍生條件采 用中國專利（CN102043028A)公開的N，0-雙（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺作為衍生化試 劑。
[0033] 對比例3 該對比例操作步驟與實施例2相同，不同在于樣品前處理過程中，采用中國專利（CN 105334282A)公開的未使用衍生試劑衍生和未進行超聲輔助-分散液液微萃取。
[0034] 對比例4 該對比例過程與實施例2相同，不同在于樣品前處理過程中，采用中國專利（CN 105334282A)公開的未使用衍生試劑衍生和未進行超聲輔助-分散液液微萃取。
[0035]下表2為實施例2同對比例1-4的試驗結果對比。
[0036]表2
從表2中可以看出，與相關報道相比，本發明利用4'-碳酰氯-羅丹明進行衍生化方法， 衍生條件溫和、快速，靈敏度高，4'-碳酰氯-羅丹明衍生化方法的檢出限比對比例低10-100 倍左右。超聲輔助-原位衍生-分散液液微萃取技術的回收率結果良好，對分析方法的準確 度提供了保障。
[0037]為了驗證所建立的分析方法的適用性，對準確度、精密度，以及實施例2-4三類實 際樣品中的回收率和基質效應都進行了詳細考察，結果見表3。
[0038]表3
由表2和表3可知，對于實際樣品中23種內分泌干擾物，其線性范圍在0.007-200 ng/L， 檢出限分布于0.002-0.015 ng/L之間，定量限分布于0.007-0.059 ng ml/1之間。結果表明， 所建立的分析方法靈敏度高，回收率好，有效降低了基質干擾，能夠很好地應用于檢測上述 三種實際樣品中的多種內分泌干擾物的含量。
[0039]上述實施例為本發明較佳的實施方式，但本發明的實施方式并不受實施例的限 制，其它任何未背離本發明的精神實質與原理下所做的改變、修飾、組合、替代、簡化均應為 等效替換方式，都包含在本發明的保護范圍之內。
【主權項】
1. 一種環境與食品中多種內分泌干擾物的檢測分析方法，其特征在于:所述的內分泌 干擾物通過與衍生劑4'-碳酰氯-羅丹明進行超聲輔助-原位衍生-分散液液微萃取，得到的 衍生化產物經濾膜過濾后利用超高效液相色譜三重四極桿串聯質譜系統進行分析檢測。2. 根據權利要求1所述的檢測分析方法，其特征在于，具體包括以下步驟： a. 超聲輔助-原位衍生-分散液液微萃取過程:取10-100 uL標準品混合溶液或待測樣 品，加入30 yL內標物溶液、800-1000 yL pH 8.0-11.5的NaHC03-Na2C03緩沖溶液，加入離 心管中，最后注入60-200 uL萃取劑和200-300 uL 4'-碳酰氯-羅丹明-分散劑溶液，搖勻后 密封，在溫度10-60 °C水浴中超聲波振蕩反應1-5分鐘；離心分離，所得沉積相取出后用乙 腈定容到200 uL，得衍生化產物溶液； 所述內標物溶液是由10 μL濃度為lX10_5mol/L雌酚酮-2,4，16，16-(14、10仙濃度為1 父10-5!11〇1/1雙酚厶-(116和10汕濃度為1\10-5111〇1/1甲基-4-羥基苯甲酸酯-2,3,5,6-(14組 成； 所述的萃取劑為1-溴-3-甲基丁烷，溴環己烷，溴苯和1-溴丁烷； 所述的分散劑為丙酮，乙腈，甲醇或乙醇； b. 將步驟a中的衍生化產物溶液經濾膜過濾后利用超高效液相色譜三重四極桿質譜系 統進行定性定量分析檢測。3. 根據權利要求2所述的檢測分析方法，其特征在于，所述待測樣品中的內分泌干擾物 包括雌酮、17β_雌二醇、雌三醇、17α-乙炔雌二醇、己烯雌酚、壬基酚、辛基酚、雙酸A、2,2_二 (4-羥基苯基）丁烷、4，4 亞乙基雙苯酚、4，4二羥基二苯基甲烷、4，4-二羥基二苯砜、六氟 雙酸A、4,4'-(l-苯乙基）雙酚、4-溴雙酸A、及對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥 基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸異丙酯、對羥基苯甲酸丁酯、對羥基苯甲酸異丁基酯、對羥基 苯甲酸芐酯、三氯生。4. 根據權利要求2或3所述的檢測分析方法，其特征在于，步驟a中所述的萃取劑為溴 苯;所述分散劑為乙腈。5. 根據權利要求2或3所述的檢測分析方法，其特征在于:步驟a所述的4碳酰氯-羅丹 明-分散劑溶液的摩爾濃度為1 X ΠΓ2 mol/L。6. 根據權利要求5所述的檢測分析方法，其特征在于，所述4'-碳酰氯-羅丹明采用以下 方法制備而成:將0.922 g 4'-羧基-羅丹明加入30 mL氯化亞砜，滴入0.1 mL N，N-二甲基 甲酰胺，磁力攪拌，升溫至50~80°C，反應5~6 h，減壓蒸除氯化亞砜，冷卻至室溫，得紫色 固體，用乙醚重結晶，得紫色針狀晶體即為4'-碳酰氯-羅丹明。7. 根據權利要求2所述的檢測分析方法，其特征在于：步驟a中，所述超聲波頻率為40 KHz〇8. 根據權利要求1-7任一項所述的檢測分析方法，其特征在于:所述的超高效液相色譜 三重四極桿串聯質譜系統中色譜分離使用安捷倫SB C18色譜柱:2.1 mm X 50 mm，1.8 μ m，進樣體積為2 yL，柱溫30°C，采用梯度洗脫法。9. 根據權利要求8所述的檢測分析方法，其特征在于：所述的梯度洗脫法，時間為20 min，流速為0.2 mL/min，流動相A為5%乙腈水溶液含有0.1%甲酸，流動相B為乙腈含有0.1% 甲酸，0 min流動相組成為80%A+20%B，5 min時65%A+35%B，10 min時 15%A+85%B，15 min時5% A+95%B，20 min時0%A+100%B。
【文檔編號】G01N30/02GK106018612SQ201610466428
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年6月24日
【發明人】趙先恩, 魏娜, 王仁君, 顏平, 王玉花, 和永瑞, 宋翠華, 朱樹蕓, 尤進茂
【申請人】曲阜師范大學