一種基于氧化石墨烯固相萃取技術檢測磺胺類藥物殘留的方法
【專利摘要】本發明公布了一種基于氧化石墨烯固相萃取技術檢測磺胺類藥物殘留的方法，屬于化學檢測領域。方法包括：（1）提取：稱取試樣于50ml離心管中，加入乙腈，均質1min，再加入無水硫酸鈉，振蕩、離心后收集上清液于梨形瓶中，在40℃水浴中旋轉蒸發濃縮至干。（2）凈化：分別使用甲醇、水活化氧化石墨烯固相萃取柱，然后將樣品溶解過柱，最后用含氨乙腈洗脫，收集洗脫液；（3）檢測：將洗脫液用氮氣吹干后，加入流動相溶解，過有機相濾膜，進液相色譜?串聯質譜檢測。本發明的有益效果是，利用氧化石墨烯固相萃取技術，建立了磺胺類藥物殘留的檢測方法，凈化效果明顯，減少了基質干擾，提高了檢測效率，所建立的方法快捷、高效、實用性強。
【專利說明】
一種基于氧化石墨烯固相萃取技術檢測磺胺類藥物殘留的 方法
技術領域
[0001] 本發明涉及一種基于氧化石墨烯固相萃取技術檢測磺胺類藥物殘留的方法，尤其 是一種氧化石墨烯固相萃取結合液相色譜串聯質譜檢測食品中磺胺類藥物殘留的方法，屬 于分析化學檢測領域。
【背景技術】
[0002] 磺胺類藥物(sulfonamides，SAS)因具有廣譜抗菌、廉價方便等優點而被廣泛應用 于養殖環節，但其過量使用會在食用動物產品中殘留，危害人類健康。世界各國均有關于磺 胺類殘留的最高限量要求，我國規定磺胺類藥物在動物源性食品中的最高殘留限量總和為 100yg/kg。目前關于磺胺類藥物殘留的檢測已有較多的報道，前處理過程中使用較廣泛的 方法為固相萃取，涉及的填料主要有碳納米管、氧化鋁、PSA，C18和石墨化碳黑(GCB)。
[0003] 氧化石墨烯是一種由天然石墨制備、與碳納米管結構相似的碳納米材料，是單原 子層厚度的二維結構納米材料，其比表面積理論上可達2900m 2/g，是所有碳納米材料中比 表面積最大的材料。在氧化石墨烯制備過程中，其表面形成了大量的活性基團如羧基、羰 基、羥基、環氧基等，因此，氧化石墨稀不僅具有足夠大的比表面積，同時還擁有足夠尚的表 面功能基團密度，是一種性能優異的吸附劑。
【發明內容】
[0004] 本發明提供了一種基于氧化石墨烯固相萃取技術檢測磺胺類藥物殘留的方法。
[0005] 本發明解決其技術問題所采用的技術方案是:一種基于氧化石墨烯固相萃取技術 檢測磺胺類藥物殘留的方法，包括如下步驟。
[0006] (1)提取:稱取2-5g試樣，加入20-30mL乙腈，均質l-2min，再加入無水硫酸鈉，振蕩 提取l -3min后，8000-9000r/min條件下離心6min，收集上清液于梨形瓶中，在40°C水浴中旋 轉蒸發濃縮至干;殘渣用乙腈-水溶解，待凈化。
[0007] (2)凈化:分別使用3-5mL甲醇、3-5mL水活化氧化石墨烯固相萃取柱，然后將樣品 溶解液以每秒1滴的速度過柱，最后用含氨乙腈洗脫，收集洗脫液至15mL離心管中。
[0008] (3)檢測：將洗脫液用氮氣吹干后，加入lmL流動相溶解，過0.22μπι有機相濾膜，進 儀器檢測。
[0009] 方法中磺胺類藥物包括磺胺啼啶（s u 1 f a d i a z i n e，S D Ζ )、磺胺甲Β,惡Ρ坐 (sulfamethoxazole，SMZ)、橫胺二甲氧啼啶（sulfadimethoxine，SDM)、橫胺喹噁啉 (sulfaquinoxaline，SQX)〇
[0010] 步驟⑴所述的殘渣用乙腈-水溶解后調節pH至6。
[0011] 步驟(1)所述乙腈-水的體積比為1: 9。
[0012]步驟（2)所述的氧化石墨烯固相萃取柱的制作方法是在3mL空管柱（事先用超純 水、乙腈洗滌，晾干）內加入篩板，用玻璃棒壓平，裝入15mg氧化石墨稀后蓋上篩板。
[0013]步驟(2)所使用的含氨乙腈體積為5mL。
[0014] 步驟(3)儀器檢測所使用的液相色譜-串聯質譜配有電噴霧離子源(ESI)。
[0015] 檢測時的色譜條件為： 色譜柱:Poroshel 1 120 EC-C18，3 · 0 X 100mm，2 · 7μL?;柱溫：30°C ;進樣體積：5yL;流動 相:A為甲醇;B為0.1%甲酸水;流速:0.3mL/min。
[0016] 流動相梯度洗脫程序：0-lmin，10-30%A; l-3min，30-80%A; 3-7min，80%A; 7-9min， 80-10%A;9-10min，10%A。
[0017] 檢測時的質譜條件為： 離子源：噴射流離子聚焦電噴霧離子源；掃描模式：正離子模式;檢測方式：多反應監 測;干燥氣溫度:350°C ;干燥氣流速：10L/min;霧化氣壓力:45psi ;鞘氣溫度:350°C ;鞘氣流 速:1 lL/min;毛細管電壓:4000V;碰撞氣:高純氮;各離子對駐留時間均為60ms。
[0018] 表1磺胺類藥物的質譜參數。
[0019] 本發明的有益效果是，利用氧化石墨烯固相萃取技術，建立了簡便、快速的磺胺類 藥物殘留檢測方法，方法具有良好的線性關系和精密度，回收率高，檢出限和定量限均能滿 足檢測需要;通過優化固相萃取條件、質譜條件和液相色譜條件，凈化效果明顯，減少了基 質干擾，回收率高，提高了檢測效率，所建立的方法快捷、高效、實用性強。
【具體實施方式】
[0020] 以豬肉檢測為例來說明本發明。
[0021] 儀器設備： 美國Agilent公司1290-6460液相色譜-串聯質譜儀，配有噴射流離子聚焦電噴霧離子 源(AJS-ESI);德國IKA公司GM200型高速均質機；日本東京理化MMV-1000W型振蕩器；日本 Hitachi公司CR22GIII型高速冷凍離心機;瑞士 Buchi公司R215型旋轉蒸發儀;德國IKA公司 MS3型渦旋混勻器。
[0022]材料與試劑： 氧化石墨烯由濟寧利特納米技術有限責任公司提供;3mL空柱管、篩板(孔徑<20μπι)購 于天津博納艾杰爾公司；甲醇、乙腈、丙酮、甲酸均為色譜純;無水硫酸鈉(650°C灼燒4h，冷 卻后貯存于干燥器中，備用）、氨水為分析純;實驗用水為超純水。
[0023]標準品：磺胺嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉，均購自德國Dr公 司，純度均在98%以上。
[0024]固相萃取柱制作 取準備好的3mL的空管柱(事先用超純水、乙腈洗滌，晾干)加入篩板，用玻璃棒壓平，裝 入15mg氧化石墨烯后蓋上篩板，備用。
[0025] 樣品前處理。
[0026] 提取:稱取5g試樣(精確至0.01 g)于50ml離心管中，加入15ml乙腈，均質lmin，再加 入l〇g無水硫酸鈉，振蕩提取lmin后，在4°C，9000r/min條件下離心8min，重復操作一次，合 并提取液，加入10mL乙腈飽和的正己烷，振蕩，靜置分層，將乙腈層轉移至梨形瓶中，在40°C 水浴中旋轉蒸發濃縮至干。殘渣用3ml乙腈-水溶液（10+90,體積比）溶解，調節pH至6,待凈 化。
[0027]凈化:分別使用3mL甲醇、3mL水活化事先準備好的氧化石墨烯固相萃取柱，然后將 樣品溶解液以lmL/min的速度過柱，最后用5mL含氨乙腈洗脫，收集洗脫液至15mL離心管中， 氮氣吹干后用lmL流動相溶解，過0.22μπι有機相濾膜，上機檢測。
[0028]液相色譜條件。
[0029] 色譜柱：P〇roshell 120 EC-C18,3.0X100mm，2.7ym。
[0030] 柱溫：30 °C。
[0031] 進樣體積：5yL。
[0032] 流動相:A為甲醇、B為0 · 1%甲酸水。
[0033] 流動相梯度洗脫程序：0-lmin，10-30%A; l-3min，30-80%A; 3-7min，80%A; 7-9min， 80-10%A;9-10min，10%A。
[0034] 流速：0.3mL/min。
[0035] 質譜條件。
[0036] 離子源:噴射流離子聚焦電噴霧離子源。
[0037]掃描模式:正離子模式。
[0038] 檢測方式:多反應監測。
[0039] 干燥氣溫度：325Γ。
[0040] 干燥氣流速:10L/min。
[0041 ] 霧化氣壓力：45psi。
[0042] 鞘氣溫度：350°C。
[0043] 鞘氣流速：llL/min。
[0044] 毛細管電壓:4000V。
[0045] 碰撞氣:高純氮。
[0046] 各離子對駐留時間均為60ms。
[0047] 表2磺胺類藥物的質譜參數。
[0048] 方法評價。
[0049] 為避免基質效應的影響，采用基質加標的方式配制標準溶液進行上機測定，濃度 分別為10、20、50、100、200、50(^8/1。實驗結果表明，在10~50(^8/1濃度范圍內，4種磺胺的 線性關系良好，相關系數為0.9965~0.9990。以10倍信噪比確定磺胺定量限，均為10yg/kg。
[0050] 準確稱取5 g(精確至O.Olg)樣品，分別準確添加50yL、100yL、150yL 1.00 mg/L三 個水平的4種磺胺混合標準品溶液，在優化實驗條件下進行前處理并上機測定，每個水平平 行測定6次，計算回收率和精密度。其平均回收率為72%~86%，精密度均小于12%。
[0051] 所述實施例僅僅是本發明的一個優選的實施例，并不是對本發明的范圍進行限 定。基于本發明實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動的前提下，對本發明的 技術方案進行的各種改進、優化，進而獲得的所有其他實施例，均屬于本發明權利要求書所 聲明的保護范圍。
【主權項】
1. 一種基于氧化石墨烯固相萃取技術檢測磺胺類藥物殘留的方法，其特征在于，所述 方法包括以下步驟： (1) 提取:稱取2-5g試樣，加入20-30mL乙腈，均質l-2min，再加入無水硫酸鈉、氯化鈉， 振蕩提取l-3min后，8000-9000r/min條件下離心6min，收集上清液于梨形瓶中，在40°C水浴 中旋轉蒸發濃縮至干;殘渣用乙腈-水溶解，待凈化； (2) 凈化:分別使用3-5mL甲醇、3-5mL水活化氧化石墨烯固相萃取柱，然后將樣品溶解 液以每秒1滴的速度過柱，最后用含氨乙腈洗脫，收集洗脫液至15mL離心管中； (3) 檢測：將洗脫液用氮氣吹干后，加入lmL流動相溶解，過0.22μπι有機相濾膜，進儀器 檢測。2. 根據權利要求1所述的一種基于氧化石墨烯固相萃取技術檢測磺胺類藥物殘留的方 法，其特征是:步驟(1)所述的殘渣用乙腈-水溶解后調節pH至6。3. 根據權利要求1所述的一種基于氧化石墨烯固相萃取技術檢測磺胺類藥物殘留的方 法，其特征是:步驟(1)所述乙腈-水的體積比為1:9。4. 根據權利要求1所述的一種基于氧化石墨烯固相萃取技術檢測磺胺類藥物殘留的方 法，其特征是:步驟(2)所述的氧化石墨烯固相萃取柱的制作方法是在3mL空管柱(事先用超 純水、乙腈洗滌，晾干）內加入篩板，用玻璃棒壓平，裝入15mg氧化石墨稀后蓋上篩板。5. 根據權利要求1所述的一種基于氧化石墨烯固相萃取技術檢測磺胺類藥物殘留的方 法，其特征是:步驟(2)所使用的含氨乙腈體積為5mL。
【文檔編號】G01N30/06GK106018585SQ201610315261
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月14日
【發明人】倪永付
【申請人】中華人民共和國濟寧出入境檢驗檢疫局