對多肽或蛋白混合物進行簡易快速離子交換分餾裝置的制造方法
【專利摘要】本發明提供一種制作成本低，但能取得跟相應商業化產品同樣的分餾效果的對多肽或蛋白混合物進行簡易快速離子交換分餾裝置，包括A部件、B部件和C部件，所述B部件為色譜柱，是在兩個空心螺釘中心貫穿一根導管，導管伸進左、右兩邊的二通內，二通左、右兩頭有內螺紋，兩個空心螺釘有外螺紋，分別與左、右兩個二通螺接，兩個空心螺釘前頭依次有密封鐵套圈、篩板；所述A部件也是在兩個空心螺釘中心貫穿一根導管，其中一個螺釘與B部件的左邊二通螺接，A部件的螺釘前頭有密封鐵套圈；所述C部件是用一個空心螺釘通過密封鐵套圈與B部件中的二通螺接，再用一根收集餾分用毛細管，插進C部件中的空心螺釘內。
【專利說明】
對多肽或蛋白混合物進行簡易快速離子交換分餾裝置
技術領域
[0001]本發明涉及生命科學領域的蛋白質組學，特別是有關于高效液相色譜技術領域。
【背景技術】
[0002]復雜多肽及蛋白混合物的定性定量分析目前主要是由多維高效液相色譜-質譜這一儀器分析方法來完成。多維高效液相色譜主要由離子交換色譜、反相色譜等正交組合而成;反相色譜因其洗脫流動相與質譜兼容，且同時具有高分辨的特點，一般被用在最后一維與質譜連用，實現在線分離分析;離子交換色譜則一般用于原始混合物樣本的粗略預分餾。然而商業化離子交換高效液相色譜系統往往價格昂貴，價格在10萬美元左右。
【發明內容】
[0003]為解決前述商業化離子交換高效液相色譜系統價格昂貴問題，本發明提供一種制作成本低，但能取得跟相應商業化產品同樣的分餾效果的對多肽或蛋白混合物進行簡易快速離子交換分餾裝置，包括A部件、B部件和C部件，所述B部件為色譜柱，是在兩個空心螺釘中心貫穿一根導管，導管伸進左、右兩邊的二通內，二通左、右兩頭有內螺紋，兩個空心螺釘有外螺紋，分別與左、右兩個二通螺接，兩個空心螺釘前頭依次有密封鐵套圈、篩板;所述A部件也是在兩個空心螺釘中心貫穿一根導管，其中一個螺釘與B部件的左邊二通螺接，A部件的螺釘前頭有密封鐵套圈;所述C部件是用一個空心螺釘通過密封鐵套圈與B部件中的二通螺接，再用一根收集餾分用毛細管，插進C部件中的空心螺釘內。
[0004]所述A部件的導管直徑小于B部件的導管，所述導管采用硬塑料制成。
[0005]本發明的優點在于，
(I)本發明簡化了蛋白質混合物分離系統，結構簡單。該色譜系統的分離配上一個耐壓的進樣針以及注射器栗，就可以替代一個十分昂貴的液相色譜儀完成一維分離。
[0006](2)系統靈活性高，可根據實驗中的實際需要，改變柱子的長度以及裝填上任何自己需要用到的填料，特別適合做填料研究的課題組。這是商業液相色譜柱所不具備的條件。
[0007](3)此外，其本身造價也十分劃算。比起常用的不銹鋼液相色譜柱數千上萬的價格，其優勢也是不言而喻的。
【附圖說明】
[0008]圖1是本發明分解示意圖圖2是本發明產品示意圖
圖3是本發明B部件分解圖圖4是本發明C部件分解圖圖5是本發明A部件分解圖圖6是本發明的效果示意圖圖中標號說明:
1、5、15、8、12-密封鐵套圈；2、4、9、11、16-空心螺釘;34部件導管；10-8部件導管；17-毛細管;6、14-二通;7、13-篩板。
【具體實施方式】
[0009]請參閱附圖所示，包括A部件、B部件和C部件，所述B部件為色譜柱，是在兩個空心螺釘9、11中心貫穿一根導管10，導管10內徑為0.7毫米，導管10伸進左、右兩邊的二通6、14內，二通10左、右兩頭有內螺紋，兩個空心螺釘有外螺紋9、11，分別與左、右兩個二通6、14螺接，兩個空心螺釘前頭依次有密封鐵套圈8、12、篩板7、13;所述A部件也是在兩個空心螺釘
2、4中心貫穿一根導管3，導管3直徑為0.36毫米，其中一個螺釘4與B部件的左邊二通6螺接，A部件的螺釘2、4前頭有密封鐵套圈1、5;所述C部件是用一個空心螺釘16通過密封鐵套圈15與B部件中的二通14螺接，再用一根收集餾分用毛細管14，插進C部件中的空心螺釘16內。
[0010]所述導管采用硬塑料制成。
[0011]色譜柱中的填料，由導管10開放的一端注入，注意填裝的要均勻致密。
[0012]填料填充完畢之后，再將開放的一端經篩板與導管10相連，如此則色譜柱主體部分制作完畢。
[0013]將自制的色譜柱的一端連接上一截空的導管，用于蛋白質混合物的上樣之用，如圖1左側所示。其右端則連接上一截適當長度的空毛細管柱用于餾分的收集，如圖1右側所示部件。
[0014]實驗步驟:
將所制作的色譜柱連接到六通閥接口之上，用液相色譜的流動相對新制色譜柱進行平衡。
[0015](I)上樣:在定量環中注入1ul的標準蛋白樣品，用流動相A完成上樣步驟。重復此過程三次。
[0016](2)洗脫:調節液相色譜中流動相的組成，初始洗脫液組成為25%的流動相B，洗脫并收集餾分。結束之后，調節洗脫液組成至50%的流動相B，重復收集過程。后面依次為75%的B和 100%的 B。
[0017](3) LCMS分析:收集完成的餾分經真空離心濃縮系統濃縮至合適的體積。進而進行后面的反相液相色譜質譜聯用分析。
[0018](4)數據鑒定:將RPLCMS分離分析得到的數據進行數據庫搜索鑒定，完成數據分析過程。
[0019]本發明已經將此技術應用在整體蛋白質分離的實驗中，所用的填料為離子交換中的強陽離子交換調料SCX，取得了不錯的實驗結果。在單獨一維反相色譜實驗中，一次實驗我們鑒定得到了 21個蛋白質。在應用了上述裝置進行二維分離后我們得到了 34個蛋白質。可以看出，我們分離裝置的使用明顯提到了蛋白鑒定的數量。
【主權項】
1.一種對多肽或蛋白混合物進行簡易快速離子交換分餾裝置，包括A部件、B部件和C部件，其特征在于，所述B部件為色譜柱，是在兩個空心螺釘中心貫穿一根導管，導管伸進左、右兩邊的二通內，二通左、右兩頭有內螺紋，兩個空心螺釘有外螺紋，分別與左、右兩個二通螺接，兩個空心螺釘前頭依次有密封鐵套圈、篩板;所述A部件也是在兩個空心螺釘中心貫穿一根導管，其中一個螺釘與B部件的左邊二通螺接，A部件的螺釘前頭有密封鐵套圈;所述C部件是用一個空心螺釘通過密封鐵套圈與B部件中的右邊二通螺接，再用一根收集餾分用毛細管，插進C部件中的空心螺釘內。2.按權利要求1所述的對多肽或蛋白混合物進行簡易快速離子交換分餾裝置，其特征在于，所述A部件的導管直徑小于B部件的導管，所述導管采用硬塑料制成。
【文檔編號】G01N30/02GK106018574SQ201610291376
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月5日
【發明人】田志新, 呂大超
【申請人】同濟大學