檢測水生蔬菜中氯蟲苯甲酰胺殘留量的方法
【專利摘要】本發明提供了一種穩定性好、靈敏度高的檢測水生蔬菜中氯蟲苯甲酰胺殘留量的方法，包括如下步驟：(1)標準溶液的配制；(2)溶劑的配制；(3)前處理提取過程；(4)測定：取步驟(1)和步驟(3)獲得的濾液進行液相色譜-串聯質譜儀測定。本發明的檢測水生蔬菜中氯蟲苯甲酰胺殘留量的方法，使用乙酸乙酯∶丙酮(V/V7∶3)混合溶劑提取水生蔬菜中氯蟲苯甲酰胺殘留，經分散型固相萃取N-丙基乙二胺(PSA)吸附劑凈化后，利用液相色譜-串聯質譜的強選擇性和抗干擾能力的特性，測定其殘留量。使用乙酸乙酯∶丙酮(V/V7∶3)混合溶劑提取效率高，提取的基質干擾少；使用PSA填料作為吸附劑，可以去除提取的有機酸，色素等干擾物質，達到凈化目的。
【專利說明】
檢測水生蔬菜中氯蟲苯甲酰胺殘留量的方法
技術領域
[0001] 本發明涉及一種水生蔬菜殘留的檢測方法，尤其是一種檢測水生蔬菜中氯蟲苯甲 酰胺殘留量的方法。
【背景技術】
[0002] 氯蟲苯甲酰胺是杜邦公司開發的一種新型高效廣譜殺蟲劑，對鱗翅目的夜蛾科、 螟蛾科、蛀果蛾科、卷葉蛾科、粉蛾科、菜蛾科、麥蛾科、細蛾科等均有很好的控制效果，還能 控制鞘翅目象甲科，葉甲科;雙翅目潛蠅科;煙粉虱等多種非鱗翅目害蟲。氯蟲苯甲酰胺能 高效激活昆蟲魚尼丁受體，破壞細胞質內的Ca 2+環境穩定，導致昆蟲癱瘓死亡，對鱗翅目害 蟲的幼蟲活性高，具有迅速阻止害蟲進食、高效滯留活性、耐雨水沖刷、滲透性強。
[0003] 目前國內外關于蔬菜、水果中氯蟲苯甲酰胺殘留量檢測的方法報道的較多，主要 采用高效液相色譜法和液相色譜-質譜法，其前處理提取溶劑主要為乙腈或者酸性乙腈，而 關于水生蔬菜中氯蟲苯甲酰胺殘留量檢測的方法尚未有報道。
【發明內容】
[0004] 本發明提供了一種穩定性好、靈敏度高的檢測水生蔬菜中氯蟲苯甲酰胺殘留量的 方法。
[0005] 實現本發明目的的檢測水生蔬菜中氯蟲苯甲酰胺殘留量的方法，包括如下步驟：
[0006] (1)標準溶液的配制：
[0007] 準確稱取l〇mg氯蟲本甲酰胺標準品于10mL容量瓶中，用甲醇溶解定容至刻度，配 制成濃度為lmg/mL標準儲備溶液，置于-18°C冰箱中冷凍避光保存；
[0008] 準確吸取一定量的lmg/mL氯蟲苯甲酰胺標準儲備溶液于容量瓶中，用甲醇稀釋成 質量濃度為l〇yg/mL中間濃度標準溶液，置于4°C冰箱中冷凍避光保存；
[0009] 準確吸取一定量的lOyg/mL氯蟲苯甲酰胺中間濃度標準溶液，分別用甲醇與水混 和溶液(V/V 3:7)逐級稀釋到濃度為2ng/mL，5ng/mL，10ng/mL，20ng/mL，50ng/mL和100ng/ mL的標準工作溶液，現用現配；
[0010] (2)溶劑的配制：
[0011]乙酸乙酯：丙酮(V/V 7:3)溶劑:量取700mL乙酸乙酯和300mL丙酮，混合均勻；
[0012] 甲醇與水混和溶液(V/V 3:7):量取300mL甲醇和700mL水，混合均勻；
[0013] (3)前處理提取過程：
[0014]稱取10.00g試樣(精確到0.05g)置于具塞塑料離心管中，加入乙酸乙酯:丙酮(v/v 7:3)20mL，超聲10min，加入3g氯化鈉混勾，4000r/min離心10min，取上層清液加入0 · lg PSA 粉末渦旋，靜置待PSA粉末沉淀后取2mL上層清液，于45°C水浴旋轉蒸發或氮吹至干，準確加 入1.00mL甲醇與水混和溶液(V/V 3:7)溶解后，過0.22μπι的有機濾膜到進樣瓶中，供儀器分 析；
[0015] (4)測定:取步驟(1)和步驟(3)獲得的濾液進行液相色譜-串聯質譜儀測定。
[0016] 本發明的檢測水生蔬菜中氯蟲苯甲酰胺殘留量的方法的有益效果如下：
[0017] 本發明的檢測水生蔬菜中氯蟲苯甲酰胺殘留量的方法，使用乙酸乙酯：丙酮(V/V 7:3)混合溶劑提取水生蔬菜中氯蟲苯甲酰胺殘留，經分散型固相萃取N-丙基乙二胺(PSA) 吸附劑凈化后，利用液相色譜-串聯質譜的強選擇性和抗干擾能力的特性，測定其殘留量。 使用乙酸乙酯:丙酮(V/V 7:3)混合溶劑提取效率高，提取的基質干擾少;使用PSA填料作為 吸附劑，可以去除提取的有機酸，色素等干擾物質，達到凈化目的。本發明應用分散型固相 萃取替代固相萃取，可以減少樣品前處理時間，減少有機溶劑的用量，節約成本，減少環境 污染;本發明方法穩定性好，靈敏度高，為水生蔬菜中氯蟲苯甲酰胺殘留量測定提供了高效 快速的分析手段。
【附圖說明】
[0018]圖1為空白蓮藕中添加5. Oyg/kg的色譜圖。
[0019] 圖2為空白蒲菜中添加5. Oyg/kg的色譜圖。
【具體實施方式】
[0020] 本發明的檢測水生蔬菜中氯蟲苯甲酰胺殘留量的方法，包括如下步驟：
[0021] (1)標準溶液的配制：
[0022] 準確稱取10mg氯蟲本甲酰胺標準品于10mL容量瓶中，用甲醇溶解定容至刻度，配 制成濃度為lmg/mL標準儲備溶液，置于-18°C冰箱中冷凍避光保存；
[0023]準確吸取一定量的lmg/mL氯蟲苯甲酰胺標準儲備溶液于容量瓶中，用甲醇稀釋成 質量濃度為l〇yg/mL中間濃度標準溶液，置于4°C冰箱中冷凍避光保存；
[0024] 準確吸取一定量的lOyg/mL氯蟲苯甲酰胺中間濃度標準溶液，分別用甲醇與水混 和溶液(V/V 3:7)逐級稀釋到濃度為2ng/mL，5ng/mL，10ng/mL，20ng/mL，50ng/mL和lOOng/ mL的標準工作溶液，現用現配；
[0025] (2)溶劑的配制：
[0026]乙酸乙酯：丙酮(V/V 7:3)溶劑:量取700mL乙酸乙酯和300mL丙酮，混合均勻；
[0027]甲醇與水混和溶液(V/V 3:7):量取300mL甲醇和700mL水，混合均勻；
[0028] (3)前處理提取過程：
[0029]稱取10.00g試樣(精確到0.05g)置于具塞塑料離心管中，加入乙酸乙酯:丙酮(v/v 7:3)20mL，超聲10min，加入3g氯化鈉混勾，4000r/min離心10min，取上層清液加入0 · lg PSA 粉末渦旋，靜置待PSA粉末沉淀后取2mL上層清液，于45°C水浴旋轉蒸發或氮吹至干，準確加 入1.00mL甲醇與水混和溶液(V/V 3:7)溶解后，過0.22μπι的有機濾膜到進樣瓶中，供儀器分 析；
[0030] (4)測定:取步驟(1)和步驟(3)獲得的濾液進行液相色譜-串聯質譜儀測定。
[0031 ]配制濃度為2即/1111^，51^/1]11^，1〇1^/1]11^，2〇1^/1]11^，5〇]^/1111^和10〇1^/1]11^的標準工作溶 液，在以下優化過的儀器參數下進行分析：
[0032]液相色譜條件
[0033] 色譜柱：Agilent Z0RBAX SB-C18柱 150mmX2.1mm(i.d.);
[0034] 流動相:A 0 · 1 %甲酸水溶液，B甲醇；
[0035]優化的梯度洗脫程序； L0037J 流速：0.25mL/min;
[0038] 進樣量：25yL;
[0039] 柱溫：30〇C;
[0040] 質譜條件 [0041 ] 離子源:ESI源 [0042]掃描方式:正離子掃描 [0043] 監測方式:多反應監測
[0044]多反應監測模式下優化的質譜參數
[0046] *表示定量離子
[0047]離子傳輸管溫度:350°C
[0048] 鞘氣（高純氮氣)40Arb
[0049] 輔助氣(高純氮氣）10Arb
[0050] 碰撞氣（高純氬氣）1.5m Torr
[0051] 噴霧電壓:3Kv。
[0052] 本發明根據氯蟲苯甲酰胺的理化性質及查閱文獻的基礎上使用乙酸乙酯：丙酮 (v/v 7:3)混合溶劑作為提取溶劑，通過實驗驗證乙酸乙酯：丙酮(v/v 7:3)混合溶劑對氯 蟲苯甲酰胺的提取效率高于乙腈及酸性乙腈，同時提取的基質干擾也較少。該方法的優點 是操作簡便、耗時較短、靈敏度高、檢測限低。
[0053] 實施例1:蓮藕中氯蟲苯甲酰胺殘留量的檢測 [0054] 樣品前處理
[0055]稱取10.00g蓮藕樣品（精確到0.05g)置于具塞塑料離心管中，加入乙酸乙酯:丙酮 (v/v 7 : 3) 20mL，超聲lOmin，加入3g氯化鈉混勻，4000r/min離心10min，取上層清液加入 Ο. lg PSA粉末渦旋，靜置待PSA粉末沉淀后取2mL上層清液，于45°C水浴旋轉蒸發或氮吹至 干，準確加入1.OOmL甲醇:水混和溶液(V/V 3:7)溶解后，過0.22μπι的有機濾膜到進樣瓶中， 供儀器分析。
[0056] 色譜圖如圖1所示。
[0057]液相色譜條件
[0058] 色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18 柱 150mmX2.1mm(i.d.);流動相：Α0·1% 甲酸水 溶液，Β甲醇，梯度洗脫程序見表3;流速:0.25mL/min;進樣量:25yL;柱溫:30°C。
[0059] 表 3
[0061 ]質譜條件
[0062] 離子源:ESI源;掃描方式:正離子掃描;監測方式：多反應監測，多反應監測模式下 優化的質譜參數見表4;離子傳輸管溫度:350°C;鞘氣(高純氮氣)40Arb;輔助氣(高純氮氣） lOArb;碰撞氣(高純氬氣）1.5m Torr;噴霧電壓:3Kv。
[0063] 表 4
[0065] *表示定量離子
[0066] 實施例2:蒲菜中氯蟲苯甲酰胺殘留量的檢測
[0067] 樣品前處理
[0068]稱取10.00g蒲菜樣品（精確到0.05g)置于具塞塑料離心管中，加入乙酸乙酯:丙酮 (v/v 7 : 3) 20mL，超聲10min，加入3g氯化鈉混勻，4000r/min離心10min，取上層清液加入 0. lg PSA粉末渦旋，靜置待PSA粉末沉淀后取2mL上層清液，于45°C水浴旋轉蒸發或氮吹至 干，準確加入1.〇〇mL甲醇:水混和溶液(V/V 3:7)溶解后，過0.22μπι的有機濾膜到進樣瓶中， 供儀器分析。
[0069] 如圖2所示的色譜圖，液相色譜條件同實施例1，質譜條件同實施例1。
[0070] 上面所述的實施例僅僅是對本發明的優選實施方式進行描述，并非對本發明的范 圍進行限定，在不脫離本發明設計精神前提下，本領域普通工程技術人員對本發明技術方 案做出的各種變形和改進，均應落入本發明的權利要求書確定的保護范圍內。
【主權項】
1. 一種檢測水生蔬菜中氯蟲苯甲酰胺殘留量的方法，包括如下步驟： (1) 標準溶液的配制： 準確稱取l〇mg氯蟲本甲酰胺標準品于10mL容量瓶中，用甲醇溶解定容至刻度，配制成 濃度為lmg/mL標準儲備溶液，置于-18°C冰箱中冷凍避光保存； 準確吸取一定量的lmg/mL氯蟲苯甲酰胺標準儲備溶液于容量瓶中，用甲醇稀釋成質量 濃度為l〇yg/mL中間濃度標準溶液，置于4°C冰箱中冷凍避光保存； 準確吸取一定量的l〇yg/mL氯蟲苯甲酰胺中間濃度標準溶液，分別用甲醇與水混和溶 液(V/V 3:7)逐級稀釋到濃度為2ng/mL，5ng/mL，1 Ong/mL，20ng/mL，50ng/mL和 100ng/mL的 標準工作溶液，現用現配； (2) 溶劑的配制： 乙酸乙酯:丙酮(V/V 7:3)溶劑:量取700mL乙酸乙酯和300mL丙酮，混合均勻； 甲醇與水混和溶液(V/V 3:7):量取300mL甲醇和700mL水，混合均勻； (3) 前處理提取過程： 稱取lO.OOg試樣(精確到0.05g)置于具塞塑料離心管中，加入乙酸乙酯：丙酮(v/v 7: 3)20mL，超聲lOmin，加入3g氯化鈉混勾，4000r/min離心10min，取上層清液加入0. lg PSA粉 末渦旋，靜置待PSA粉末沉淀后取2mL上層清液，于45°C水浴旋轉蒸發或氮吹至干，準確加入 1. OOmL甲醇與水混和溶液(V/V 3 : 7)溶解后，過0.22μπι的有機濾膜到進樣瓶中，供儀器分 析； (4) 測定:取步驟(1)和步驟(3)獲得的濾液進行液相色譜-串聯質譜儀測定。
【文檔編號】G01N27/62GK106018571SQ201510750915
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2015年11月9日
【發明人】魏云計, 馮民, 朱臻怡, 王小晉, 何健, 魏斌, 朱珠
【申請人】中華人民共和國淮安出入境檢驗檢疫局