一種檢測堿性木聚糖酶活力試紙及其制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種檢測堿性木聚糖酶活力試紙及其制備方法。所述的制備方法包括以下制備步驟：配制顯色劑及緩沖溶液，并在此基礎上配制木聚糖標準溶液及不同梯度的堿性木聚糖溶液；將標準木聚糖溶液涂覆在中速定性濾紙上制備成試紙I；將另一張基紙浸漬在配制好的顯色劑中，浸勻晾干，表層涂覆一層氧化鈣，制備成試紙II；將制備好的試紙在不同濃度梯度的木聚糖酶標準溶液中反應顯色，拍照制備比色卡，通過對比比色卡能夠得知所測樣品木聚糖酶活力。本發明的制備方法制備工藝簡單，易于操作，適于工業化生產；所得產物能夠有效對木聚糖樣品進行檢測，具有良好的應用前景。
【專利說明】
一種檢測堿性木聚糖酶活力試紙及其制備方法
技術領域
[0001]本發明屬于功能材料技術領域，具體涉及一種檢測堿性木聚糖酶活力試紙及其制備方法。【背景技術】
[0002]試紙，指用化學藥品浸漬過的、可通過其顏色變化檢驗液體或氣體中某些物質存在的一類紙。各種試紙已經深入到各個領域中，并因便利性及廉價性被廣泛認同和接受。
[0003]木聚糖酶是可將木聚糖降解為單糖和寡糖的水解酶。一直以來，其在造紙、食品、 飼料、能源等工業都有著較為重大的應用價值，因而引起科研工作者的廣泛關注，并對其進行了相關研究。酶活力是衡量酶生物活力的重要指標。對于木聚糖酶活力的測定，國家標準 GB23874-2009飼料添加劑木聚糖酶活力的測定中已有方法。然而在一些領域中，因為使用的是堿性木聚糖酶，若用該國標所使用的37°C、pH為5.50的條件進行測定，并非十分便利和準確。即便如此，DNS顯色法測量酶解產物一一單糖仍是目前國家標準中測量單糖較為便利快捷的方法。但其本身測量受到試劑，操作，實驗條件，實驗精度，重復性等多方面的制約， 對于很多工業而言，測量起來存在困難。隨著對木聚糖酶的研究和發展，如何更加便捷地檢測木聚糖酶活力成為一個十分重要的課題。
【發明內容】
[0004]為解決現有技術的缺點和不足之處，本發明的首要目的在于提供一種檢測堿性木聚糖酶活力試紙的制備方法。
[0005]本發明的另一目的在于提供一種由上述制備方法得到的檢測堿性木聚糖酶活力試紙。
[0006]本發明目的通過以下技術方案實現:
[0007]—種檢測堿性木聚糖酶活力試紙的制備方法，包括以下制備步驟:
[0008](1)依據待測堿性木聚糖酶的特性，配制DNS顯色劑，pH=7.80的磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖液，并在此基礎上配制堿性木聚糖標準溶液、堿性木聚糖酶標準溶液及不同濃度梯度的堿性木聚糖酶溶液；
[0009](2)將堿性木聚糖標準溶液涂覆在中速定性濾紙上，并且在40°C條件下進行干燥， 裁切成l〇mm X 50mm大小，制備出試紙I;
[0010](3)將DNS顯色劑浸潤到另一張中速定性濾紙上，并且在40°C條件下進行避光干燥，完全干燥后，表面涂覆一定量的氧化鈣粉末，裁切成1〇_ X 50_大小，制備出試紙II，疊合試紙I和試紙II即為檢測堿性木聚糖酶活力試紙；
[0011](4)取多張試紙I，然后分別滴加不同濃度梯度的堿性木聚糖酶溶液，滴加量為 0.02mL，精確反應5min，再分別將試紙II貼合在試紙I上，根據試紙II的顏色，得到試紙比色卡；
[0012](5)根據對比試紙比色卡來確定步驟(3)制備得到的檢測堿性木聚糖酶活力試紙的測定范圍。[0〇13] 優選地，步驟(1)所述DNS顯色劑配制方法如下:將6.90g結晶苯酸溶于15.2mL質量濃度10 %NaOH溶液，蒸餾水稀釋至69mL，在此溶液中加入6.90g亞硫酸氫鈉，得到A液；將 255g酒石酸鉀鈉溶于300mL質量濃度10%Na0H溶液中，再加入880mL質量濃度1%的3,5_二硝基水楊酸溶液，得到B液;將A液和B液混合即得黃色試劑，儲于棕色瓶中放置7-10d后使用。在棕色瓶內保存一年有效。[〇〇14] 優選地，步驟(1)所述的pH= 7.80的磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖溶液是0.lmol/L 的磷酸二氫鈉_磷酸氫二鈉緩沖溶液。所述pH = 7.80的磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖液的配制過程如下:取磷酸氫二鈉35.90g，加水溶解，并稀釋至500mL，得到甲液；取磷酸二氫鈉 2.76g，加水溶解，并稀釋至100mL，得到乙液;取91.5mL甲液與8.5mL乙液混合，搖勻，即得所述pH=7.8的磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖液；
[0015]步驟(1)所述堿性木聚糖標準溶液的配制方法如下:稱取木聚糖1.000g，加入 0.32g氫氧化鈉，再加入90mL水，磁力攪拌，同時加熱，直至木聚糖完全溶解;然后停止加熱， 繼續攪拌30min，加入1.18g磷酸氫二鈉;繼續磁力攪拌，同時測定其pH;如果pH為7.80，用pH =7.80的磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖溶液定容至100mL，如果pH偏離7.80，再用甲液或乙液調節至pH=7.80,然后再用pH=7.8的磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖溶液定容至100mL，得到所述堿性木聚糖標準溶液，濃度為10mg/mL。
[0016]優選地，步驟(1)所述不同濃度梯度的堿性木聚糖酶溶液配制方法如下:等體積比例量取堿性木聚糖酶標準溶液(100U/mL)和pH=7.8的磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖溶液， 配制成50U/mL的堿性木聚糖酶溶液;等體積比例量取50U/mL的堿性木聚糖酶溶液和pH = 7.8的磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖溶液，配制成25U/mL的堿性木聚糖酶溶液。
[0017]優選地，步驟(3)所述的中速定性濾紙的直徑為7cm，表面涂覆的氧化鈣粉末為 〇? l〇g/面。
[0018]優選地，步驟(4)檢測堿性木聚糖酶試紙比色卡通過紙數碼相機進行拍攝顯色反應后的試紙來制備。
[0019] —種檢測堿性木聚糖酶的試紙，通過以上方法制備得到。使用時，將待測堿性木聚糖酶溶液滴加到試紙I上，反應5min;然后將試紙II貼合在試紙I上，將試紙的顏色與比色卡對比，即可確定待測堿性木聚糖酶溶液的活力范圍。
[0020]與現有技術相比，本發明具有以下優點及有益效果:
[0021] (1)本發明的檢測堿性木聚糖酶的試紙其制備方法制備工藝簡單，易于操作，適于工業化生產；[〇〇22] (2)本發明制得的檢測堿性木聚糖酶的試紙能夠對樣品中堿性木聚糖酶做半定量檢測，具有良好的應用前景。【附圖說明】[〇〇23]圖1為實施例1的試紙結構示意圖。【具體實施方式】[〇〇24]下面結合實施例和附圖對本發明作進一步詳細的描述，但本發明的實施方式不限于此。
[0025]實施例1:
[0026]以改性里氏木霉ATCC56765發酵所產生的堿性木聚糖酶為例，該木聚糖酶粗酶活力為 80 ?100U/mL，最適 pH=7.8;[〇〇27](1)配制DNS顯色劑，pH = 7.80的磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖液，并在此基礎上配制堿性木聚糖標準溶液、木聚糖酶標準溶液及不同濃度梯度的堿性木聚糖酶溶液；[〇〇28] DNS顯色劑的配制方法如下:A液:將6.90g結晶苯酚溶于15.2mL質量濃度10%NaOH 溶液，蒸餾水稀釋至69mL，在此溶液中加入6.90g亞硫酸氫鈉。B液:將255g酒石酸鉀鈉溶于 300mL質量濃度10%Na0H溶液中，再加入880mL質量濃度1 %的3，5-二硝基水楊酸溶液。將A、 B二溶液混合即得黃色試劑，儲于棕色瓶中放置7-10d后使用。在棕色瓶內保存一年有效。 [〇〇29] pH = 7.80的磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖液的配制過程如下:取磷酸氫二鈉 35.90g，加水溶解，并稀釋至500mL，得到甲液；取磷酸二氫鈉2.76g，加水溶解，并稀釋至 100mL，得到乙液;取91.5mL甲液與8.5mL乙液混合，搖勻，即得所述pH=7.80的磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖液；
[0030]木聚糖標準溶液的配制方法如下:稱取木聚糖1.〇〇〇g，加入0.32g氫氧化鈉，再加入90mL水，磁力攪拌，同時加熱，直至木聚糖完全溶解;然后停止加熱，繼續攪拌30min，加入 1.18g磷酸氫二鈉；繼續磁力攪拌，同時測定其pH;如果pH為7.80，用pH = 7.80的磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖溶液定容至l〇〇mL，如果pH偏離7.80，再用甲液或乙液調節至pH= 7.80， 然后再用pH = 7.8的磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖溶液定容至100mL，得到所述木聚糖標準溶液，濃度為l〇〇mg/mL;[〇〇31] 依據《GBT23874-2009飼料添加劑木聚糖酶活力的測定——分光光度法》標定堿性木聚糖酶樣品的活力，得到的結果為l〇〇U/mL;
[0032]不同濃度的堿性木聚糖酶溶液配制方法如下:等體積比例量取堿性木聚糖酶樣品 (100U/mL)和pH = 7 ? 8的磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖溶液，配制成50U/mL的堿性木聚糖酶溶液;等體積比例量取50U/mL的堿性木聚糖酶樣品和pH=7.8的磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖溶液，配制成25U/mL的堿性木聚糖酶溶液；
[0033](2)將標準木聚糖溶液涂覆在中速定性濾紙上，并且在40 °C條件下進行干燥，完全干燥后裁切成1 〇mm X 50mm大小，制備出試紙I，如圖1所示；[〇〇34](3)將DNS顯色劑浸潤到另一張直徑為7cm的中速定性濾紙上，并且在40°C條件下進行避光干燥，完全干燥后，表層涂覆氧化鈣，涂覆量為〇.l〇g/面，裁切成1〇_ x 50mm大小， 制備出試紙II，如圖1所示；
[0035](4)分別將不同濃度梯度的木聚糖酶溶液滴加在試紙I上，滴加量為0.02mL，精確反應5min，再將試紙II貼合在試紙I上，根據試紙II的顏色，通過數碼相機拍照得到堿性木聚糖酶試紙比色卡；[〇〇36](5)依據比色卡，堿性木聚糖酶濃度在25U/mL?100U/mL范圍內可以通過比色卡較易辨別，因此此工藝制備得到的堿性木聚糖酶試紙測試范圍為25U/mL?100U/mL。將待測堿性木聚糖酶溶液滴加到試紙I上，反應5min;然后將試紙II貼合在試紙I上，將試紙的顏色與比色卡對比，即可確定待測堿性木聚糖酶溶液的活力范圍。
[0037]上述實施例為本發明較佳的實施方式，但本發明的實施方式并不受上述實施例的限制，其他的任何未背離本發明的精神實質與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化， 均應為等效的置換方式，都包含在本發明的保護范圍之內。
【主權項】
1.一種檢測堿性木聚糖酶活力試紙的制備方法，其特征在于，包括以下制備步驟:(1)依據待測堿性木聚糖酶的特性，配制DNS顯色劑，pH= 7.80的磷酸二氫鈉-磷酸氫二 鈉緩沖液，并在此基礎上配制堿性木聚糖標準溶液、堿性木聚糖酶標準溶液及不同濃度梯 度的堿性木聚糖酶溶液；(2)將堿性木聚糖標準溶液涂覆在中速定性濾紙上，并且在40 °C條件下進行干燥，制備 出試紙I;(3)將DNS顯色劑浸潤到另一張中速定性濾紙上，并且在40°C條件下進行避光干燥，完 全干燥后，表面涂覆一定量的氧化鈣粉末，制備出試紙II;疊合試紙I和試紙II，即為檢測堿 性木聚糖酶活力試紙；(4)取多張試紙I，然后分別滴加不同濃度梯度的堿性木聚糖酶溶液，精確反應5min，再 分別將試紙II貼合在試紙I上，根據試紙II的顏色，得到試紙比色卡；(5)根據對比試紙比色卡來確定步驟(3)制備得到的檢測堿性木聚糖酶活力試紙的測 定范圍。2.根據權利要求1所述的一種檢測堿性木聚糖酶活力試紙的制備方法，其特征在于，步 驟(1)所述的pH=7.80的磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖溶液濃度是0.lmol/L。3.根據權利要求1所述的一種檢測堿性木聚糖酶活力試紙的制備方法，其特征在于，步 驟(3)所述的中速定性濾紙的直徑為7cm，表面涂覆的氧化鈣粉末為0.lOg/面。4.根據權利要求1所述的一種檢測堿性木聚糖酶活力試紙的制備方法，其特征在于，步 驟(4)檢測堿性木聚糖酶試紙比色卡通過紙數碼相機進行拍攝顯色反應后的試紙來制備。5.—種檢測堿性木聚糖酶活力試紙，其特征在于，其由權利要求1至4任一項所述的一 種檢測堿性木聚糖酶活力試紙的制備方法制備得到。
【文檔編號】G01N21/78GK106018397SQ201610464254
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年6月21日
【發明人】楊仁黨, 馬千里
【申請人】華南理工大學