一種農藥殘留檢測方法
【專利摘要】本發明公開了一種農藥殘留檢測方法，包括如下步驟：將樣品汽爆處理后，加入丙酮和乙酸乙酯超聲萃取，然后加入硫酸鈉水溶液，離心后吸取上清液；按比例稱取待檢農藥、丙烯酸、丙烯酰胺、N’N?亞甲基雙丙烯酰胺、過硫酸銨和去離子水制備薄膜狀的印跡水凝膠；將所得印跡水凝膠浸泡在有機溶劑中去除其中的待檢農藥；將不同濃度的待檢農藥儲備液分別加入本身不含待檢農藥的樣品汁中做成不同梯度的印跡水凝膠，用便攜式拉曼光譜儀對所得的印跡水凝膠進行檢測，將并將所得光譜進行比對，判斷待檢測樣品中是否含有該農藥。本發明能夠快速、低成本檢測果蔬中的農藥殘留。
【專利說明】
一種農藥殘留檢測方法
技術領域
[0001]本發明涉及一種檢測方法，具體涉及一種農藥殘留檢測方法。【背景技術】
[0002]農藥在促進林牧業的發展方面作用顯著，但同時使用農藥所帶來的污染環境以及人類健康問題越來越嚴重。農藥殘留危害問題也越來越受到重視，許多國家都制定了食品中農藥殘存限量。
[0003]目前，果蔬中農藥殘留的檢測方法有:薄層色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法、 超臨界流體色譜法等等。現有的方法雖具有靈敏度高、檢出限低等優點，但因儀器昂貴、耗時長、檢測成本高等而難以滿足食品安全問題頻發的現狀。因此，開發一種低成本、滿足現場快速檢測的新方法極為必要。
【發明內容】
[0004]為解決上述問題，本發明提供了一種農藥殘留檢測方法，通過分子印跡技術制備對該檢測農藥具有特異性識別作用的水凝膠，待測樣品經水凝膠吸附富集后，利用便攜式拉曼光譜儀進行光譜采集，通過與該檢測農藥的標準拉曼光譜相對比，判斷樣品中是否含有此藥物，使用方便。
[0005]為實現上述目的，本發明采取的技術方案為:
[0006]—種農藥殘留檢測方法，包括如下步驟:
[0007]S1、將待檢測樣品置于汽爆罐內，先通入氮氣至汽爆罐內壓力為0.7?1.3MPa，爆破處理8?25min;然后迅速通入蒸汽至汽爆罐內壓力為1.3?1.7MPa，蒸汽爆破處理0.5? 2.5min后，加入丙酮和乙酸乙酯超聲萃取4?5min，然后加入濃度為6-12%的硫酸鈉水溶液，離心6-10min，吸取上清液(待檢測試樣液)，備用；
[0008]S2、稱取待檢農藥0.016-0.02g、丙烯酸1.4-1.6mL、丙烯酰胺2.5-4.5g、N’N-亞甲基雙丙烯酰胺0.08-0.12g、過硫酸銨0.08-0.14g和去離子水4.0-6.0mL置于燒杯中內，攪拌混合均勻，經氮氣除氧后，將其填充到由兩片載玻片形成的夾板空間中，置于55-65°C的烘箱中聚合反應3_4h，得薄膜狀的印跡水凝膠；
[0009]S3、將由步驟S2所得的印跡水凝膠浸泡在有機溶劑中，并超聲振蕩5-10min，以去除其中的待檢農藥；
[0010]S4、將不同濃度的待檢農藥儲備液分別加入10ml本身不合待檢農藥的樣品汁中， 使所得溶液中待檢農藥的濃度分別為〇mg/L、0 ? 01mg/L、0 ? 05mg/L、0 ? lmg/L、0 ? 5mg/L、lmg/ L、5mg/L、lOmg/L;
[0011]S5、將步驟S3所得的印跡水凝膠浸泡于步驟S4中所得的含不同濃度待檢農藥的溶液中，5-7min后，將其取出并用去離子水漂去多余的溶液，得不同梯度的印跡水凝膠；
[0012]S6、將步驟S3所得的印跡水凝膠浸泡于步驟S1所得的上清液中，5-7min后，將其取出并用去離子水漂去多余的上清液，得樣品印跡水凝膠；
[0013]S7、用便攜式拉曼光譜儀對步驟S5和步驟S6所得的印跡水凝膠進行檢測，將并將所得光譜進行比對，判斷待檢測樣品中是否含有該農藥。
[0014]其中，所述待檢測樣品與丙酮的固液比為0.2?0.5g/ml。[0〇15]其中，待檢測樣品與乙酸乙酯的固液比為0.2?0.5g/ml。[0〇16]其中，待檢測樣品與濃度為6-12%的硫酸鈉水溶液的體積比為1:1-5。[0〇17]其中，所述有機溶劑為丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯中的一種或幾種構成。
[0018]本發明具有以下有益效果:
[0019]本發明能夠快速、低成本檢測果蔬中的農藥殘留。通過分子印跡技術制備的水凝膠，可在5min之內完成對被測樣品中待測農藥的吸附富集作用，再經便攜式拉曼光譜儀采集光譜信息，整個過程快速便捷，且水凝膠可多次循環重復使用，在降低檢測成本的同時還具有環境友好的優點，并可滿足現場、高通量檢測的需求。【具體實施方式】
[0020]為了使本發明的目的及優點更加清楚明白，以下結合實施例對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。[0021 ]以下實施例中，所使用的待檢測樣品與丙酮的固液比為0.2?0.5g/ml;[〇〇22]所使用的檢測樣品與乙酸乙酯的固液比為0.2?0.5g/ml;所使用的檢測樣品與濃度為6-12%的硫酸鈉水溶液的體積比為1:1-5;所使用的有機溶劑為丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯中的一種或幾種構成。[〇〇23] 實施例1[〇〇24]S1、將待檢測樣品置于汽爆罐內，先通入氮氣至汽爆罐內壓力為0.7MPa，爆破處理25min;然后迅速通入蒸汽至汽爆罐內壓力為1.3MPa，蒸汽爆破處理2.5min后，加入丙酮和乙酸乙酯超聲萃取4min，然后加入濃度為6-12%的硫酸鈉水溶液，離心6min，吸取上清液 (待檢測試樣液)，備用；[〇〇25]S2、稱取待檢農藥0.016g、丙烯酸1.4mL、丙烯酰胺2.5g、N’N-亞甲基雙丙烯酰胺0.08g、過硫酸銨0.08g和去離子水4.0mL置于燒杯中內，攪拌混合均勻，經氮氣除氧后，將其填充到由兩片載玻片形成的夾板空間中，置于55°C的烘箱中聚合反應4h，得薄膜狀的印跡水凝膠；[〇〇26]S3、將由步驟S2所得的印跡水凝膠浸泡在有機溶劑中，并超聲振蕩5min，以去除其中的待檢農藥；
[0027]S4、將不同濃度的待檢農藥儲備液分別加入10ml本身不含待檢農藥的樣品汁中，使所得溶液中待檢農藥的濃度分別為〇mg/L、0 ? 01mg/L、0 ? 05mg/L、0 ? lmg/L、0 ? 5mg/L、lmg/ L、5mg/L、lOmg/L;[〇〇28]S5、將步驟S3所得的印跡水凝膠浸泡于步驟S4中所得的含不同濃度待檢農藥的溶液中，5min后，將其取出并用去離子水漂去多余的溶液，得不同梯度的印跡水凝膠；
[0029]S6、將步驟S3所得的印跡水凝膠浸泡于步驟S1所得的上清液中，5-7min后，將其取出并用去離子水漂去多余的上清液，得樣品印跡水凝膠；
[0030]S7、用便攜式拉曼光譜儀對步驟S5和步驟S6所得的印跡水凝膠進行檢測，將并將所得光譜進行比對，判斷待檢測樣品中是否含有該農藥。
[0031] 實施例2[〇〇32]S1、將待檢測樣品置于汽爆罐內，先通入氮氣至汽爆罐內壓力為1.3MPa，爆破處理8min;然后迅速通入蒸汽至汽爆罐內壓力為1.7MPa，蒸汽爆破處理0.5min后，加入丙酮和乙酸乙酯超聲萃取5min，然后加入濃度為6-12%的硫酸鈉水溶液，離心lOmin，吸取上清液(待檢測試樣液)，備用；[〇〇33]S2、稱取待檢農藥0.02g、丙烯酸1.6mL、丙烯酰胺4.5g、N’N-亞甲基雙丙烯酰胺〇.12g、過硫酸銨0.14g和去離子水6.0mL置于燒杯中內，攪拌混合均勻，經氮氣除氧后，將其填充到由兩片載玻片形成的夾板空間中，置于65°C的烘箱中聚合反應3h，得薄膜狀的印跡水凝膠；
[0034]S3、將由步驟S2所得的印跡水凝膠浸泡在有機溶劑中，并超聲振蕩lOmin，以去除其中的待檢農藥；
[0035]S4、將不同濃度的待檢農藥儲備液分別加入10ml本身不含待檢農藥的樣品汁中， 使所得溶液中待檢農藥的濃度分別為〇mg/L、0 ? 01mg/L、0 ? 05mg/L、0 ? lmg/L、0 ? 5mg/L、lmg/ L、5mg/L、lOmg/L;[〇〇36]S5、將步驟S3所得的印跡水凝膠浸泡于步驟S4中所得的含不同濃度待檢農藥的溶液中，7min后，將其取出并用去離子水漂去多余的溶液，得不同梯度的印跡水凝膠；[〇〇37]S6、將步驟S3所得的印跡水凝膠浸泡于步驟S1所得的上清液中，7min后，將其取出并用去離子水漂去多余的上清液，得樣品印跡水凝膠；
[0038]S7、用便攜式拉曼光譜儀對步驟S5和步驟S6所得的印跡水凝膠進行檢測，將并將所得光譜進行比對，判斷待檢測樣品中是否含有該農藥。[〇〇39] 實施例3
[0040]S1、將待檢測樣品置于汽爆罐內，先通入氮氣至汽爆罐內壓力為IMPa，爆破處理16.5min;然后迅速通入蒸汽至汽爆罐內壓力為1.5MPa，蒸汽爆破處理1.5min后，加入丙酮和乙酸乙酯超聲萃取4.5min，然后加入濃度為9%的硫酸鈉水溶液，離心8min，吸取上清液 (待檢測試樣液)，備用；[〇〇41 ]S2、稱取待檢農藥0.018g、丙烯酸1.5mL、丙烯酰胺3.5g、N’N-亞甲基雙丙烯酰胺0.lg、過硫酸銨0.llg和去離子水5.0mL置于燒杯中內，攪拌混合均勻，經氮氣除氧后，將其填充到由兩片載玻片形成的夾板空間中，置于60°C的烘箱中聚合反應3.5h，得薄膜狀的印跡水凝膠；[〇〇42]S3、將由步驟S2所得的印跡水凝膠浸泡在有機溶劑中，并超聲振蕩7.5min，以去除其中的待檢農藥；
[0043]S4、將不同濃度的待檢農藥儲備液分別加入10ml本身不合待檢農藥的樣品汁中， 使所得溶液中待檢農藥的濃度分別為〇mg/L、0 ? 01mg/L、0 ? 05mg/L、0 ? lmg/L、0 ? 5mg/L、lmg/ L、5mg/L、lOmg/L;
[0044]S5、將步驟S3所得的印跡水凝膠浸泡于步驟S4中所得的含不同濃度待檢農藥的溶液中，6min后，將其取出并用去離子水漂去多余的溶液，得不同梯度的印跡水凝膠；
[0045]S6、將步驟S3所得的印跡水凝膠浸泡于步驟S1所得的上清液中，6min后，將其取出并用去離子水漂去多余的上清液，得樣品印跡水凝膠；
[0046]S7、用便攜式拉曼光譜儀對步驟S5和步驟S6所得的印跡水凝膠進行檢測，將并將所得光譜進行比對，判斷待檢測樣品中是否含有該農藥
[0047]本發明的原理為:分子印跡技術，首先通過選擇合適的功能單體與模板分子在介質中預組裝形成特異性識別位點，再通過交聯聚合反應形成聚合物凝膠而將這種特異性識別位點固定下來，然后利用合適的溶劑將模板分子從凝膠中移除，這樣便在凝膠中留下了在三維空間上與模板分子相匹配的具有“記憶”功能的空穴，即實現對模板分子的特異性識另IJ，從而可以在一定的基質中將模板分子富集。在本發明中，模板分子為待測農藥，利用印跡聚合物凝膠將其在被測樣品中富集后，采集聚合物凝膠的拉曼光譜，通過與該檢測農藥的標準拉曼光譜進行比對，判斷凝膠中是否含有待測農藥，從而判斷被測樣品中是否含有此成分。[〇〇48]本具體實施在0.05mg/L-10mg/L的濃度范圍內均可檢測到待測農藥。
[0049]綜上所述，本發明能夠快速、低成本檢測果蔬中是否有農藥殘留。通過分子印跡技術制備的水凝膠，可在5min之內完成對被測樣品中待測農藥的吸附富集作用，再經便攜式拉曼光譜儀采集光譜信息，整個過程快速便捷，且水凝膠可多次循環重復使用，在降低檢測成本的同時還具有環境友好的優點，并可滿足現場、高通量檢測的需求。
[0050]以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對于本技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明原理的前提下，還可以作出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發明的保護范圍。
【主權項】
1.一種農藥殘留檢測方法，其特征在于，包括如下步驟:51、將待檢測樣品置于汽爆罐內，先通入氮氣至汽爆罐內壓力為0.7?1.3MPa，爆破處 理8?25min;然后迅速通入蒸汽至汽爆罐內壓力為1.3?1.7MPa，蒸汽爆破處理0.5? 2.5min后，加入丙酮和乙酸乙酯超聲萃取4?5min，然后加入濃度為6-12%的硫酸鈉水溶 液，離心6-10min，吸取上清液，備用；52、稱取待檢農藥0.016-0.02g、丙烯酸1.4-1.6mL、丙烯酰胺2.5-4.5g、N’N-亞甲基雙 丙烯酰胺〇.08-0.12g、過硫酸銨0.08-0.14g和去離子水4.0-6.0mL置于燒杯中內，攪拌混合 均勻，經氮氣除氧后，將其填充到由兩片載玻片形成的夾板空間中，置于55-65°C的烘箱中 聚合反應3-4h，得薄膜狀的印跡水凝膠；53、將由步驟S2所得的印跡水凝膠浸泡在有機溶劑中，并超聲振蕩5-10min，以去除其 中的待檢農藥；54、將不同濃度的待檢農藥儲備液分別加入10ml本身不含待檢農藥的樣品汁中，使所 得溶液中待檢農藥的濃度分別為〇mg/L、0.01mg/L、0.05mg/L、0 ? lmg/L、0.5mg/L、lmg/L、 5mg/L、lOmg/L;55、將步驟S3所得的印跡水凝膠浸泡于步驟S4中所得的含不同濃度待檢農藥的溶液 中，5-7min后，將其取出并用去離子水漂去多余的溶液，得不同梯度的印跡水凝膠；56、將步驟S3所得的印跡水凝膠浸泡于步驟S1所得的上清液中，5-7min后，將其取出并 用去離子水漂去多余的上清液，得樣品印跡水凝膠；57、用便攜式拉曼光譜儀對步驟S5和步驟S6所得的印跡水凝膠進行檢測，將并將所得 光譜進行比對，判斷待檢測樣品中是否含有該農藥。2.根據權利要求1所述的一種農藥殘留檢測方法，其特征在于，所述待檢測樣品與丙酮 的固液比為0.2?0.5g/ml。3.根據權利要求1所述的一種農藥殘留檢測方法，其特征在于，待檢測樣品與乙酸乙酯 的固液比為0.2?0.5g/ml。4.根據權利要求1所述的一種農藥殘留檢測方法，其特征在于，待檢測樣品與濃度為6-12 %的硫酸鈉水溶液的體積比為1:1 -5。5.根據權利要求1所述的一種農藥殘留檢測方法，其特征在于，所述有機溶劑為丙酮、 二氯甲烷、乙酸乙酯中的一種或幾種構成。
【文檔編號】G01N21/65GK106018380SQ201610482157
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年6月23日
【發明人】王毅紅, 郭智廣, 徐為霞, 李嬋君, 申戰賓, 段鹿梅
【申請人】王毅紅