Netrin-4在制備檢測胃癌及預后標志物的制劑中的用圖

Netrin-4在制備檢測胃癌及預后標志物的制劑中的用圖
【專利摘要】本發明屬細胞生物技術領域，涉及Netrin-4在制備檢測胃癌及預后標志物的制劑中的用途；本發明通過實驗顯示所述Ntn4通過與其配體neogenin結合、激活Jak/Stat、PI3K/Akt和ERK/MAPK等多條促癌通路，進而發揮其促進胃癌細胞增殖及侵襲的效應；實驗結果顯示，所述Ntn4在胃癌患者血清樣本及腫瘤組織樣本中均顯著高表達，且其高表達與患者生存期呈負相關，與TNM分期呈正相關，表明所述Ntn4可作為胃癌診斷及預后的潛在血清學指標，用于制備檢測胃癌及預后標志物的制劑，包括用于檢測胃癌及預后標志物的試劑或試劑盒。
【專利說明】
Netr i n-4在制備檢測胃癌及預后標志物的制劑中的用途
技術領域
[0001] 本發明屬細胞生物技術領域，設及化trin-4在制備檢測胃癌及預后標志物的制 劑中的用途；其中，所述化trin-4為一種與層粘連蛋白同源的分泌蛋白。
【背景技術】
[0002] 據報道，胃癌是常見惡性腫瘤之一，死亡率在世界上僅次于肺癌，高居癌癥病死率 的第二位。目前，由于臨床診療水平的限制，尤其是缺少血清學診斷指標，多數胃癌患者確 診時疾病已達進展期，基本失去了根治性手術的機會。有研究顯示，血清胃蛋白酶原、胃泌 素-17或可用于胃癌早期篩查，但其特異性及靈敏性仍有待大樣本數據驗證。
[0003] 現有技術公開了 Netrins是一個進化保守、與層粘連蛋白同源的分泌蛋白家族， 其最初被認為是軸突導向調控分子，發揮調節軸突生長的作用；但最近有研究表明，所述 netrins廣泛表達于神經系統外組織，并參與多種生物過程，包括血管生成、淋己管生成、 腫瘤發生、細胞遷移、侵襲及粘附等。在哺乳動物體內，netrins系統至少包括5個配體 (netrins 1，3, 4, Gla 和 G化）及 7 個潛在受體值CC, neogenin, UNC5A-D 和 A2b);其中， Nertrin-4(Ntn4)作為基底膜組成蛋白，表達于血管內皮及腎臟、乳腺和卵巢上皮的基底 膜。研究還表明，所述化n4可調節腫瘤增殖和血管生成；在高侵襲性乳腺癌組織中，Ntn4 表達明顯升高，表明其可能促進腫瘤遷移及侵襲；此外，所述化n4還可通過激活MAPK，Akt/ PI3K和mTOR信號通路促進淋己管內皮細胞的增殖和遷移。
[0004] 有研究顯示，Netrin受體在netrin信號轉導中發揮主要作用；其中，所述 NeogeninWeo)是化n4的受體之一，其廣泛表達于代謝活躍的組織，如胃腸道、肺及膜腺 等。與化n4相似的是，Neo在高侵襲性腫瘤中存在高表達，且Neo被證明可促進胃癌細胞 增殖和遷移；雖然有多項研究表明，化n4參與腫瘤發生、發展，但迄今其在胃癌中的作用尚 未見文獻報道，Ntn4是否可作為血清或血漿標志物用于胃癌的診斷和預后仍缺乏相應研究 支持；此外，Neo是否在化n4對胃癌的效應中發揮作用及相應的分子機制仍不明確。

【發明內容】

[0005] 本發明的目的在于克服現有技術存在的缺陷，針對胃癌診斷和預后缺乏有效的血 清學指標的現狀，提供一種用于胃癌診斷及預后的潛在血清學及組織學指標，具體設及 化trin-4在制備檢測胃癌及預后標志物的制劑中的用途；
[0006] 本發明的另一目的是，提供一種胃癌治療的潛在祀標，有助于臨床實踐中用W抑 制胃癌細胞增殖及遷移。
[0007] 本發明通過實驗結果顯示，所述化n4通過與其配體neogenin結合、能激活化k/ Stat、PI3K/Akt和E服/MAPK等多條促癌通路，進而發揮其促進胃癌細胞增殖及侵襲的效 應；實驗結果顯示，所述化n4在胃癌患者血清樣本及腫瘤組織樣本中均顯著高表達，且其 高表達與患者生存期呈負相關，與?M分期呈正相關，表明所述化n4可作為胃癌診斷及預 后的潛在血清學指標，進一步，所述的化trin-4可用于制備檢測胃癌及預后標志物的制 劑，如，用于檢測胃癌及預后標志物的試劑或試劑盒。
[0008] 本發明進行了針對人胃癌細胞的試驗，結果表明，下調化n4可顯著抑制胃癌細胞 增殖，和抑制胃癌細胞遷移及侵襲，過表達化n4能促進胃癌細胞增殖、遷移和侵襲，W及， 下調化n4的受體一neogenin可抑制胃癌細胞的增殖和侵襲，并且僅Neo存在的情況下 Ntn4才能發揮其促進增殖和侵襲的作用；結果還表明，Ntn4與其受體Neo結合后促進細胞 侵襲，Ntn4的促增殖和侵襲作用與JAK/Stat-PI3K/Akt-E服/MAPK信號通路的激活有關， 化n4在胃癌患者中高表達、且化n4表達升高則表明預后較差。
[0009] 本發明提供了一種用于胃癌診斷及預后的潛在血清學及組織學指標，進一步，所 述的化trin-4可用于制備檢測胃癌及預后標志物的制劑，如，用于檢測胃癌及預后標志物 的試劑或試劑盒。
[0010] 本發明提供一種胃癌治療的潛在祀標，有助于臨床實踐中用W抑制胃癌細胞增殖 及遷移。
【附圖說明】
[0011] 圖1顯示了下調化n4對胃癌細胞株AGS和MGC803生長的影響，其中，
[001引 A、B :實時定量PCR和ELISA法顯示化n4的干擾效果良好，化n4的表達被SiRNA 顯著下調；
[001引 C、D :下調化n4可明顯抑制AGS和MGC803細胞增殖；
[0014] E :克隆形成實驗顯示下調化n4可顯著抑制AGS和MGC803細胞克隆形成。
[0015] 圖2顯不了義用劃痕實驗檢測下調化n4對胃癌細胞遷移的影響，其中，在劃痕0、 15、24、48小時后拍照，測量劃痕寬度，
[001引 A :下調化n4后細胞劃痕愈合速度減慢，愈合時間延長；
[0017] B :用matrigel侵襲實驗明確下調化n4是否影響細胞侵襲；
[0018] C :相較轉染SiControl的AGS細胞，轉染Si化n4-l和Si化n4-2減少了 61 %和 63%的細胞穿透111曰付1邑61。
[0019] 圖3顯示了 AGS和MGC803細胞轉染PCDNA3和pcDNA3-Ntn4,實時定量PCR和化ISA 檢測轉染效率，其中，
[0020] A、B :轉染pcDNA3-Ntn4后，Ntn4表達水平明顯上升；
[002。 C、D :CCK8試驗顯示過表達化n4可顯著促進胃癌細胞增殖；
[0022] E :劃痕實驗顯示劃痕24小時后，轉染pcDNA3-Ntn4的AGS細胞較轉染PCDNA3的 細胞，其劃痕寬度減少20%，即其劃痕愈合速度加快，愈合時間減少；
[0023] F-G :侵襲實驗顯示過表達化n4后，穿越matrigel的AGS和MGC803細胞數顯著增 加。
[0024] 圖4顯示了通過實時定量PCR對現在已知的netrin家族受體在AGS和MGC803的 表達進行檢測，包括化O，DCC，UNC5A-D，其中，
[0025] A :Neo在2種胃癌細胞系中均高表達；
[0026] B :利用RNA干擾技術下調Neo的表達，通過western blot驗證干擾效果，結果顯 示Neo表達被顯著下調；
[0027] C:CCK試驗顯示下調Neo可抑制AGS和MGC803細胞生長，72小時抑制率分別為 32%和 54% ;
[0028] D:在侵襲實驗中，轉染SiNeo的AGS和MGC803細胞，其matrigel穿透率分別為對 照的73. 7%和69. 5%，即下調Neo后，細胞侵襲性下降。 圖5A-B顯示了 CCK8試驗顯示過表達化n4促進AGS和MGC803細胞增殖，但同時下調 Neo可逆轉化n4的促增殖作用；C-E顯示了下調Neo可逆轉化n4的促細胞侵襲作用。 圖6A-C顯示了當通過下調化n4或Neo表達來阻斷化n4-Neo復合體的功能后，MMP2 表達降低，TIMPl表達升高；相反，過表達化n4則導致MMP2表達升高，TIMPl表達降低；D-E 顯示了下調化n4 48小時后，Sta口、E服、Akt和p38的憐酸化水平降低，而過表達化n4后， 所述蛋白的憐酸化水平升高；F顯示下調Neo表達也導致Stat3、E服、Akt和p38的憐酸化 水平降低。
[0029] 圖7A顯示了相較癌旁組織，Ntn4在腫瘤組織中表達顯著升高；B根據染色強度由 弱到強，將樣品分為4個組，分別為弱染色組（+)、中度染色組（++)、強染色組（+++)和超強 染色組（++++) ;C:Ntn4在大多數胃癌組織樣本中呈高表達，歸于強染色組和超強染色組； 在癌旁組織中呈弱表達，歸于弱染色組和中度染色組（P = 0. 001) ;D :在胃癌病人血清中 化n4水平顯著高于正常對照（n = 52，P<0. 0001) ;E :Kaplan-Meie;r分析顯不化n4高表達 組（+++、++++)的病人總生存率顯著低于化n4低表達組（+、++) (P = 0. 038)。
【具體實施方式】
[0030] 本發明實驗采用的細胞培養和實驗試劑：
[0031] 人胃癌細胞AGS和MGC803購自中科院細胞庫，細胞培養于DMEM+10% FBS ;重組 Ntn4蛋白購自R&D Systems公司，溶于IXPBS中；Dako EnVision kit和DAB顯色液購自 化ko公司；Ntn4ELISA Kit購于化ZO生命科學公司，辣根過氧化物酶（HR巧和TMB底物液 均購于ebiosicence公司；抗化n4抗體購自R&D Systems公司。
[0032] 實施例1
[0033] 隨機選取2005年1月一2005年12月在上海華山醫院普外科行胃癌根治術，且病 史資料完整的82例患者的胃癌組織石蠟標本，同時采取其對應癌旁組織石蠟標本（手術標 本上切緣，距腫瘤邊緣2cm處）。所有組織標本均由常規病理切片肥染色證實為胃腺癌。 病理診斷由兩位病理專家共同認定，?M分期按2010年美國癌癥聯合會（AJCC)胃癌腳1分 期標準（第屯版）進行。患者隨訪至2011年7月，在隨訪期，共有34名患者失訪，隨訪率 為58. 5% ;隨機選取2014年6月一2014年11月新確診為胃癌的52例患者的術前血清標 本，同時選取52例健康體檢患者血清作為對照。
[0034] 所用組織及血清均經過上海華山醫院倫理委員會批準。
[00對免疫組化：
[0036] (1)切除標本經10%甲醒固定，常規石蠟包埋，制作厚Sym組織切片。脫蠟前，將 切片于37°C恒溫箱中烘烤20分鐘；
[0037] 似脫蠟至水：二甲苯I 10分鐘一二甲苯II 10分鐘一 100 %酒精I 5分鐘 一 100%酒精II 5分鐘一 95%酒精5分鐘一 85%酒精5分鐘一 70%酒精5分鐘一蒸饋水 洗3次，每次3分鐘；
[003引 做切片加入3%的過氧化氨，室溫下靜置10分鐘，W消除內源性過氧化物酶活 性；蒸饋水洗3次，每次3分鐘；
[0039] (4)抗原微波修復：抗原微波修復前，先將CBS修復液于微波爐高火5分鐘預熱， 將切片放入盛有已預熱的抗原修復液的容器中，置微波爐內加熱高、中、低火各5分鐘。取 出容器，冷卻至室溫，W PBS緩沖液洗涂3次，每次3分鐘；
[0040] (5)擦去組織周圍PBS緩沖液，滴加一抗（Ntn工作濃度1 :200)，約50ul/片，置切 片于濕盒內，37°C，60分鐘，再4°C過夜；
[0041] (6) -抗4°C過夜后棄去一抗，PBS緩沖液洗涂3次，每次5分鐘；
[0042] (7)滴加二抗液，于37°C放置60分鐘；
[004引 做PBS緩沖液洗涂3次，每次5分鐘；
[0044] (9)擦干，滴加0. 04% DAB顯色液，顯色時間5-10分鐘（在顯微鏡下控制顯色程 度）；自來水沖洗3分鐘中止；
[0045] (10)室溫下用蘇木素復染1分鐘，自來水沖洗干凈，37°C 10分鐘烘干片子；
[0046] (11)中性樹膠封片；
[0047] (12)染色結果判斷：所有病理切片由兩位不了解研究內容的病理科醫師共同評 判；采用半定量法，W染色強度評判化n4和Neo表達結果。+~++代表低表達，+++~++++ 代表高表達。
[0048] ELISA法檢測細胞上清和病人血清化n4水平：
[0049] 根據試劑盒說明書進行相應操作，其包括主要步驟為：將IOOul細胞上清或血清 加入包被化n4抗體的96孔板，室溫解育2小時后洗涂。加入IOOul酶標抗體解育1小時 后洗涂。加入lOOulHRP解育1小時后洗涂，加入TMB底物液顯色后酶標儀檢測。
[0050] 細胞轉染和過表達：
[0051] RNAiMax 轉染 siRNA，Lipofectamine 2000 轉染質粒。si化n4-l : 5' GUCCAUGGGAAGUGUAUGUTT 3' ;siNtn4-2 :5' CUCACCUAAUUGUGAUG UUTT 3' ;siNeo : 5，CATTACCTCCCACTTCACT3，，PCDNA3 空載和 pcDNA3-Ntn4 多表達質粒源自 Marko Hyyt陸〇飢。
[0052] 定量PCR檢測化n4及其受體mRNA水平：
[0053] Trizol 法提取細胞總 RNA，用 PrimeScriptTM RT Master Mix試劑盒（購自！"akara 公司）將RNA反轉錄為cDNA，義用F*ower SYBR Green PCR Master Mix試劑盒（購自 Applied Biosystems)對cDNA進行PCR擴增，將GAPDH作為內參，A A CT法分析基因轉錄水平。
[0054] 劃痕實驗和transwell侵襲實驗：
[00巧]劃痕實驗：細胞轉染SiRNA或質粒48小時后，用滅菌槍頭劃線。按0、15、24、48小 時取樣拍照。化answell侵襲實驗：將Matrigel (購自BD Biosciences)按1:8的比例用 無血清培養基稀釋，稀釋過的Matrigel均勻鋪于transwell小室（購自Corning Costar), 37°C過夜后取出備用；轉染SiRNA或質粒的細胞消化重懸于含有1 % BSA的無血清培養基， W 1 X IO5個細胞/孔種于transwell小室，24小時后固定、染色、計數穿過小室的細胞。
[0056] 細胞CCK8檢測及克隆形成：
[0057] 轉染SiRNA或質粒的細胞消化計數，2000個/孔鋪于96孔板中，根據CCK8 (購自 Di jindo)試劑盒說明書進行檢測；克隆形成：轉染SiRNA或質粒的細胞消化計數，500個/ 孔鋪于6孔板，培養10天后固定、染色、計數克隆數。
[0058] 采用GraphPad PrismS和SPSS 16. 0統計軟件分析資料，對計量資料，采用非配 對T檢驗，對計數資料、率的比較用皮爾遜卡方檢驗、Fisher'S exact test檢驗，對等級資 料，采用 Mann -怖itney U-test 或 Kruskal - Wallis test 秩和檢驗，采用 Kaplan - Meier 法進行生存分析，W P<〇. 05認為存在統計學差異，W P<0.0 l認為存在明顯統計學差異，W P<0.0 Ol認為存在高度統計學差異，統計均取雙尾檢驗。
[0059] 實驗結果顯示：
[0060] (一）下調化n4抑制胃癌細胞增殖
[0061] 采用CCK8法檢測下調化n4對胃癌細胞株AGS和MGC803生長的影響；實時定量 PCR和ELISA法顯示化n4的干擾效果良好，化n4的表達被SiRNA顯著下調（如圖IA-B所 示），下調化n4可明顯抑制AGS和MGC803細胞增殖（如圖IC-D所示），克隆形成實驗顯示 下調化n4可顯著抑制AGS和MGC803細胞克隆形成（如圖IE所示），綜上所述，實驗結果表 明，下調化n4可顯著抑制胃癌細胞增殖；
[0062] (二）下調化n4抑制胃癌細胞遷移及侵襲
[0063] 采用劃痕實驗檢測下調化n4對胃癌細胞遷移的影響，在劃痕0、15、24、48小時后 拍照，測量劃痕寬度，圖2A顯示了下調化n4后細胞劃痕愈合速度減慢，愈合時間延長；用 matrigel侵襲實驗明確下調化n4是否影響細胞侵襲，圖2C顯示了，相較轉染SiControl的 八65細胞，轉染31化114-1和31化114-2能減少61%和63%的細胞穿透111曰付1旨61，在]\?^：803 細胞中觀察到（如圖2A所示）相似的結果；
[0064] (=)過表達化n4促進胃癌細胞增殖、遷移和侵襲
[0065] AGS和MGC803細胞轉染PCDNA3和pcDNA3-Ntn4,實時定量PCR和ELISA檢測轉染 效率，結果顯示，轉染pcDNA3-Ntn4后，Ntn4表達水平明顯上升（如圖3A-B所示），CCK8試 驗顯示過表達化n4可顯著促進胃癌細胞增殖（如圖3C-D所示）；此外，劃痕實驗顯示劃痕 24小時后，轉染pcDNA3-Ntn4的AGS細胞較轉染PCDNA3的細胞，其劃痕寬度減少20%，表 明其劃痕愈合速度加快，愈合時間減少（如圖3E所示），在MGC803細胞中觀察到相似結果； 侵襲實驗顯示過表達化n4后，穿越matrigel的AGS和MGC803細胞數顯著增加（如圖3F-G 所示）；實驗結果表明，過表達化n4可促進細胞增殖、遷移和侵襲；
[0066] (四）下調化n4的受體一neogenin，可抑制胃癌細胞的增殖和侵襲
[0067] 化n4為分泌蛋白，其通過與其受體結合發揮生物學功能；基于通過實時定量PCR 對已知netrin家族受體在AGS和MGC803的表達檢測，包括化0, DCC，UNC5A-D (如圖4A所 示），Neo在所述的2種胃癌細胞系中均高表達，因此，本實驗結果表明Neo參與化n4誘導 的細胞增殖和運動性改變。
[0068] 為了明確Neo在胃癌細胞生長中的作用，本實施例中，用RNA干擾技術下調化〇的 表達，通過western blot驗證干擾效果，結果顯示Neo表達被顯著下調（如圖4B所示）； CCK試驗顯示下調Neo可抑制AGS和MGC803細胞生長，72小時抑制率分別為32%和54%; 此外，在侵襲實驗中，轉染Si^o的AGS和MGC803細胞，其matrigel穿透率分別為對照的 73. 7%和69. 5%，即下調Neo后，細胞侵襲性下降；結果表明，下調化n4的受體化0,也可抑 制細胞生長和侵襲，Ntn4的促增殖和侵襲作用是由其受體Neo所介導；
[0069] (五）Neo介導化n4的促細胞增殖及侵襲作用
[0070] CCK8試驗顯示過表達化n4促進AGS和MGC803細胞增殖，但同時下調Neo可逆轉 化n4的運種促增殖作用（如圖5A-B所示），同樣地，下調Neo可逆轉化n4的促細胞侵襲作 用（如圖5C-E所示）；結果進一步表明，只有在Neo存在的情況下，Ntn4才能發揮其促進增 殖和侵襲的作用；
[0071] (六）Ntn4對侵襲相關蛋白表達的影響
[0072] MMP2和TIMPl是侵襲相關重要蛋白，MMP2表達升高和TIMPl表達降低被認為與細 胞高侵襲性相關；如圖6A和6C所示，當通過下調化n4或Neo表達來阻斷化n4-Neo復合體 的功能后，MMP2表達降低，TIMPl表達升高湘反，過表達化n4則導致MMP2表達升高，TIMPl 表達降低；結果進一步證實了化n4與其受體Neo結合后促進細胞侵襲。
[0073] (屯）化n4對JAK/Stat，PI3K/Akt和邸K/MAPK信號通路的影響
[0074] 為了明確化n4引起MMP2和TIMPl表達水平改變的分子機制，本實施例中檢測多 條信號通路相關蛋白的憐酸化水平；如圖抓-E所示，下調化n448小時后，Stat3、E服、Akt 和p38的憐酸化水平降低，而過表達化n4后，上述蛋白的憐酸化水平升高；此外，下調化O 表達也導致Stat3、E服、Akt和p38的憐酸化水平降低；結果表明，Ntn4的促增殖和侵襲作 用與JAK/Stat-PI3K/Akt-E服/MAPK信號通路的激活有關；
[00巧](八）化n4在胃癌病人中局表達，且化n4表達升局提不預后較差
[0076] 本實施例進一步研究化n4表達對胃癌的臨床意義，首先在82例胃癌病人組織樣 品中進行化n4免疫組化染色；如圖7A所示，相較癌旁組織，Ntn4在腫瘤組織中表達顯著升 高；根據染色強度由弱到強，將樣品分為4個組，分別為弱染色組（+)、中度染色組（++)、強 染色組（+++)和超強染色組（++++)(如圖7B所示）；化n4在多數胃癌組織樣本中呈高表 達，歸于強染色組和超強染色組；在癌旁組織中呈弱表達，歸于弱染色組和中度染色組（如 圖7C所示，P = 0. 001);進一步對胃癌患者及正常對照的血清樣本進行化n4的化ISA 檢測，結果顯示在胃癌病人血清中化n4水平顯著高于正常對照（如圖7D所示，n = 52， P<0. 0001)。
[0077] 本發明實驗進一步分析化n4表達與胃癌病人預后的關系，Kaplan-Meier分析顯 示化n4高表達組（+++、++++)的患者總生存率顯著低于化n4低表達組（+、++)(如圖7E所 示，P = 0. 038)。
[0078] 表1是化n4與胃癌患者臨床病理分期的關系分析結果。
[0079] 表 1
[0080]
[0081] 沖<.OSwas considered statistically significant.
[0082] NA:data not avail油Ie。
[008引如表1所示，對82例胃癌病人進行?!分期，其中13例（16%)病人為?! I期， 24 例（29 % ) TNM II 期，39 例（48 % ) TNM III期和 6 例（7 % ) TNM IV期。在 45 例III期和IV期 病人中，有34例病人的腫瘤組織表現為化n4高表達（+++、++++)，而在37例I期和II期病 人中，只有12例病人的腫瘤組織表現為化n4高表達。統計學分析顯示化n4高表達與更高 的?M分期呈正相關（P = 0. 008)。
[0084] 表2顯示了評估胃癌患者組織化n4表達與Neo表達的關系（類似于化n4，Neo的 在腫瘤組織表達也根據染色強度分為4組）；如表2所示，所述化n4表達與Neo表達呈顯 著正相關（P = 0. 003)，表明高表達化n4的腫瘤組織同時高表達化0,結果進一步證實，所 述化0的高表達對化n4誘導的腫瘤生成起重要作用。
[0085] 上述實施例的結果表明，Ntn4過表達與胃癌發生、發展相關，其可作為一種潛在的 分子祀標用于胃癌的診斷和預后。
[0086] 表 2
[0087]
o.
【主權項】
1. Netrin-4在制備檢測胃癌及預后標志物的制劑中的用途。2. 按權利要求1所述的用途，其特征在于，所述的檢測胃癌及預后標志物的制劑是檢 測胃癌及預后標志物的試劑。3. 按權利要求1所述的用途，其特征在于，所述的檢測胃癌及預后標志物的制劑是檢 測胃癌及預后標志物的試劑盒。4. 按權利要求1所述的用途，其特征在于，所述Netrin-4與其配體neogenin結合、激 活Jak/Stat、PI3K/Akt和ERK/MAPK促癌通路，促進胃癌細胞增殖及侵襲。5. 按權利要求1所述的用途，其特征在于，下調Ntn4的表達抑制胃癌細胞增殖，迀移及 侵襲。6. 按權利要求1所述的用途，其特征在于，下調Ntn4的受體一neogenin表達抑制胃癌 細胞的增殖和侵襲。7. 按權利要求1所述的用途，其特征在于，Ntn4通過Neo介導促細胞增殖及侵襲。8. 按權利要求1所述的用途，其特征在于，所述的Ntn4與其受體Neo結合后促進細胞 侵襲。9. 按權利要求1所述的用途，其特征在于，所述的Ntn4表達與胃癌病人預后有關系， Ntn4高表達組的總生存率低于Ntn4低表達組。10. 按權利要求1的用途，所述的制劑檢測Ntn4的表達以及Netrin-4與其配體 neogenin結合的表達水平。
【文檔編號】G01N33/68GK105988009SQ201510092010
【公開日】2016年10月5日
【申請日】2015年2月28日
【發明人】劉杰, 楊冬琴, 呂彬, 張駿, 章琦
【申請人】復旦大學附屬華山醫院