一種中藥丸劑的檢測方法

一種中藥丸劑的檢測方法
【專利摘要】本發明公開了一種中藥丸劑的檢測方法，該檢測方法包括性狀檢測和薄層色譜定性鑒別，所述的薄層色譜定性鑒別包括對中藥丸劑中決明子和望江南子的定性鑒別、柴胡和大葉柴胡的定性鑒別、丹桂的定性鑒別；該方法有效的控制了中藥丸劑中望江南子和大葉柴胡的混入，同時確保中藥丸劑中含有決明子、柴胡和當歸成分，從而有效地控制了少投藥材或者不投藥材的情況，保證了藥品質量，保證了用藥安全。
【專利說明】
一種中藥丸劑的檢測方法
技術領域
[0001]本發明涉及藥物成分的鑒別方法，特別涉及一種中藥丸劑的檢測方法。
【背景技術】
[0002]熊膽丸是《衛生部藥品標準》中藥成方制劑第二冊收載的中藥丸劑，其標準編號為WS3-B-0460-90，處方龍膽、澤瀉(鹽制)、地黃、當歸、桅子、菊花、車前子(鹽制)、決明子、柴胡、防風、黃芩、木賊、黃連粉、薄荷腦、大黃、冰片、熊膽，是純中藥制成的膠囊劑，具有清熱散風，止痛退翳的作用。臨床上用于風熱或肝經濕熱引起的目赤腫痛，羞明多淚的治療。該藥品標準是衛生部最早制定的藥品標準，由于當時的技術水平和條件有限，該標準沒有對任何藥材和任何成份進行定性定量的質量控制，既沒有質量指標，也沒有這些質量指標的鑒別和檢驗方法，由此會導致部分廠家在生產藥品時不嚴格控制和管理原材料的鑒別和篩選，誤用或混入其它藥材，致使藥品的療效明顯下降，影響藥品的安全有效，嚴重損害患者的利益。
[0003]處方中的決明子，是豆科植物決明或小決明的干燥成熟種子，以其有明目之功而名之。秋季采收成熟果實，曬干，打下種子供藥用。望江南子是豆科決明屬植物望江南的種子，因其與決明子很相似，常常被誤用或者混入。但是望江南子有明顯的致瀉作用，并且因其含有毒蛋白，有很強的毒性。因此，必須控制中藥丸劑中混入望江南子。
[0004]處方中用到柴胡，其功效主要是和解少陽，和胃降逆，扶正祛邪，但是因為柴胡屬于常用藥且使用量較大，而柴胡的產量有限，所以其偽品大葉柴胡也被有意或者無意混入使用，大葉柴胡中含有柴胡毒素和乙酰柴胡毒素，這兩種成份均為有毒物質，此前已多次發生因服用混有大葉柴胡的藥品而中毒的藥害事件，所以控制大葉柴胡很有必要。《山東醫藥工業》于2003年第二十二卷第5期發表了《對中國藥典2000年版柴胡檢驗方法的補充》一文，探討過藥典上大葉柴胡藥材的鑒別控制問題，但是其方法有明顯的不足:放置24小時，檢測時間太長，不利于藥品生產過程控制和藥品質量監督檢查；因柴胡毒素和乙酰柴胡毒素含量相對較低，點樣僅2μ1，點樣量過少，影響檢驗的準確性;因柴胡毒素和乙酰柴胡毒素含量相對較低，在紫外燈下檢視，不用顯色劑顯色來觀察，觀察效果不好，更重要的是小柴胡顆粒處方藥味多、所含成份復雜，其它成份會產生混淆和干擾，所以，尋找一種更好的辦法來控制大葉柴胡已是當務之急。
[0005]當歸也是常用中藥，供需矛盾突出，也有必要進行控制。根據中藥丸劑的處方特點，制定確實可行的檢測方法，尤其是對決明子、望江南子，以及柴胡、大葉柴胡進行鑒別，以保證產品的質量和臨床療效非常迫切。

【發明內容】

[0006]本發明的目的在于克服現有技術對中藥丸劑的質量檢測不完善的缺陷，提供一種中藥丸劑的檢測方法。該檢測方法包括對中藥丸劑的性狀鑒別和對中藥丸劑中的當歸、決明子和望江南子、柴胡和大葉柴胡等幾味主要藥材的薄層色譜定性鑒別，通過該檢測方法有效地鑒別了中藥丸劑含有的藥物成分，控制了中藥丸劑的質量，使中藥丸劑的使用更加安全、有效。
[0007]為了實現上述發明目的，本發明提供了一種中藥丸劑的檢測方法，包括:
中藥丸劑的制備:1、按現有技術中熊膽丸原料配方分別稱取龍膽、澤瀉(鹽制)、地黃、當歸、桅子、菊花、車前子(鹽制)、決明子、柴胡、防風、黃芩、木賊、黃連粉、薄荷腦、大黃、冰片、熊膽備用。2、將熊膽、薄荷腦、冰片研成細粉，與黃連粉末配研，過篩，混勻得混合粉末A;
3、將龍膽、澤瀉(鹽制)、地黃、當歸、桅子、菊花、車前子(鹽制)、決明子、柴胡、防風、黃芩、木賊、黃連粉、大黃等十三味，加水煎煮二次，第一次2小時，第二次I小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮成稠膏，干燥，粉碎，過篩得混合粉末B; 4、將步驟2和3所得粉末A、粉末B與適量輔料混合，過篩，混勻，裝膠囊，即得熊膽丸中藥丸劑。
[0008]中藥丸劑性狀鑒別:本品為膠囊劑，內容物為棕褐色的粉末;氣清涼，味苦、微辛。
[0009]決明子和望江南子的定性鑒別:分別以決明子對照藥材和望江南子對照藥材為對照品，以體積比石油醚(30?60°C):丙酮=1-3:1的石油醚-丙酮溶液為展開劑，用薄層色譜法鑒別。
[0010]柴胡和大葉柴胡的定性鑒別:分別以柴胡對照藥材和八角蓮對照藥材為對照品，以體積比乙酸乙酯:乙醇:水=10-14:2:1的乙酸乙酯-乙醇混合水溶液為展開劑，用薄層色譜法鑒別。
[0011]當歸的定性鑒別:以當歸對照藥材為對照品，以體積比環己烷:三氯甲烷:冰醋酸=7-9:7-9:1的環己烷-三氯甲烷-冰醋酸溶液為展開劑，用薄層色譜法鑒別。
[0012]本發明所述檢測方法通過對決明子和望江南子、柴胡和大葉柴胡、當歸進行薄層色譜鑒別，有效地控制了中藥丸劑的成分，使該藥品更加安全、有效，從而保證了該膠囊制劑的臨床療效，維護了患者利益。
[0013]上述一種中藥丸劑的檢測方法中，優選的，決明子和望江南子的定性鑒別的具體步驟為:取本內容物，加甲醇，浸漬，濾過，濾液蒸干，殘渣加水使溶解，再加鹽酸，置水浴上加熱，立即冷卻，用乙醚提取乙醚液蒸干，殘渣加三氯甲烷使溶解，作為供試品溶液。分別另取決明子對照藥材與望江南子對照藥材，按照供試品溶液的制備方法分別制成決明子對照藥材溶液和望江南子對照藥材溶液，照薄層色譜法試驗，分別吸取供試品溶液、對照藥材溶液，分別點于同一硅膠H薄層板上，以體積比石油醚(30?60°C ):丙酮=1-3:1的石油醚-丙酮溶液為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與決明子對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，在與望江南子對照藥材色譜相應的位置上，不得顯相同顏色的斑點。
[0014]其中，所述決明子和望江南子的定性鑒別中，采用體積比石油醚(30?60°C):丙酮= 1-3:1的石油醚-丙酮溶液為展開劑，展開時間短，展開效果好，斑點顯色清晰。
[0015]最優選的，所述決明子和望江南子的定性鑒別中，采用體積比石油醚(30?60°C):丙酮=2:1的石油醚-丙酮溶液為展開劑，通過以上優選，可以進一步地優化展開效果，更容易觀察比較分析樣品中的有效成分。
[0016]其中，所述決明子和望江南子的定性鑒別中，采用沸程為30?60°C的石油醚進行作為展開劑，展開效果好，斑點顯色清晰，且安全可靠。采用O?30°C沸程的石油醚，雖然對望江南子的展開效果更好，但對決明子的展開效果變差，不利于決明子的定性鑒別，且O?30°C沸程規格的石油醚揮發性太強，爆炸危險性大。而60?90°C沸程的石油醚對望江南子的展開效果差，不利于望江南子的定性鑒別。
[0017]上述一種中藥丸劑的檢測方法中，優選的，柴胡和大葉柴胡的定性鑒別的具體步驟為:取本品內容物，加水，攪拌溶解，離心，取上清液，加在聚酰胺柱上，分別用水、20V%Z醇溶液和50v%乙醇溶液洗脫，收集5(^%乙醇溶液洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液;另取柴胡對照藥材、大葉柴胡對照藥材，分別加水，分別煎煮，濾過，濾液濃縮，取濃縮液加在聚酰胺柱上，分別用水和50v%乙醇溶液洗脫，收集5(^%乙醇溶液洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇使溶解，得到柴胡對照品溶液和大葉柴胡對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、柴胡對照品溶液和大葉柴胡對照品溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比乙酸乙酯:乙醇:水= 10-14:2:1的乙酸乙酯-乙醇混合水溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以對二甲氨基苯甲醛的硫酸乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰，置于波長為365nm的紫外光燈下進行檢視。供試品色譜中，在與柴胡對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，在與大葉柴胡對照藥材色譜相應的位置上，不得顯相同顏色的斑點。
[0018]其中，所述柴胡和大葉柴胡的定性鑒別中，采用體積比乙酸乙酯:乙醇:水=10-14:2:1的乙酸乙酯-乙醇混合水溶液為展開劑，展開時間短，展開效果好，斑點顯色清晰。
[0019]最優選的，所述柴胡和大葉柴胡的定性鑒別中，采用體積比乙酸乙酯:乙醇:水=12: 2:1的乙酸乙酯-乙醇混合水溶液為展開劑，通過以上優選，可以進一步地優化展開效果，更容易觀察比較分析樣品中的有效成分。
[0020]上述一種中藥丸劑的檢測方法中，優選的，當歸的定性鑒別的具體步驟為:取本品內容物，加甲醇，超聲處理，濾過，濾液蒸干，殘渣加水使溶解，用乙醚振搖提取，合并乙醚液，濃縮，用碳酸氫鈉溶液振搖提取，用乙酸乙酯洗滌，棄去乙酸乙酯液，堿液用鹽酸調節PH值至2?3，用乙醚振搖提取，乙醚液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液。另取當歸對照藥材，加甲醇，超聲處理，濾過，濾液濃縮，作為當歸對照品溶液。再取阿魏酸對照品，加甲醇制成阿魏酸對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比環己烷:三氯甲烷:冰醋酸=7-9:7-9:1的環己烷-三氯甲烷-冰醋酸溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以lwt%鐵氰化鉀溶液:lwt%三氯化鐵溶液=1:1的鐵氰化鉀-三氯化鐵混合溶液。供試品色譜中，在與對照品色譜和對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
[0021 ]其中，所述當歸的定性鑒別中，采用體積比環己烷:三氯甲烷:冰醋酸=7-9:7-9:1的環己烷-三氯甲烷-冰醋酸溶液為展開劑，展開時間短，展開效果好，斑點顯色清晰。
[0022]最優選的，所述當歸的定性鑒別中，采用體積比環己烷:三氯甲烷:冰醋酸=8:8:1的環己烷-三氯甲烷-冰醋酸溶液為展開劑，通過以上優選，可以進一步地優化展開效果，更容易觀察比較分析樣品中的有效成分。
[0023]與現有技術相比，本發明的有益效果:
(I)本發明所述檢測方法包括對決明子和望江南子的鑒別，有效避免了含有毒蛋白且能致人腹瀉的望江南子的混入中藥丸劑中。
[0024](2)本發明所述檢測方法改進了對柴胡和大葉柴胡的鑒別方法，避免了由于大葉柴胡點樣量過少而導致的檢測結果不準確的缺陷，從而有效控制了含有大量柴胡毒素和乙酰柴胡毒素的大葉柴胡的混入。
[0025](3)本發明所述檢測方法通過對決明子和望江南子、柴胡和大葉柴胡、當歸藥材進行薄層色譜定性鑒別，有效地控制了中藥丸劑的質量。本發明方法科學合理、切實可行，保證了藥品應該有的有效成分，也控制了不應該有的成份;特別是控制了藥品中混入望江南子這種有毒物質;解決了用更加有效的辦法控制有意或者無意混入使用有毒的大葉柴胡的問題；當歸也是常用中藥，供需矛盾突出，通過本檢測方法，有效地控制了少投藥材或者不投藥材的情況，保證了藥品質量，保證了用藥安全。
【具體實施方式】
[0026]下面結合試驗例及【具體實施方式】對本發明作進一步的詳細描述。但不應將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于以下的實施例，凡基于本
【發明內容】
所實現的技術均屬于本發明的范圍。
[0027]本發明所述的中藥丸劑的質量檢測方法，包括如下步驟:
1、性狀鑒別:本品為膠囊劑，內容物為棕褐色的粉末;氣清涼，味苦、微辛。
[0028]2、薄層色譜定性鑒別:
決明子與望江南子的定性鑒別:取本內容物3g，加甲醇30ml，浸漬I小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml使溶解，再加鹽酸2ml，置水浴上加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加三氯甲烷Iml使溶解，作為供試品溶液。分別另取決明子對照藥材與望江南子對照藥材各0.5g，按照供試品溶液的制備方法分別制成決明子對照藥材溶液和望江南子對照藥材溶液，照薄層色譜法(附錄VIB)試驗，分別吸取供試品溶液5μ1、決明子對照品溶液和望江南子對照品溶液各3μ1，分別點于同一硅膠H薄層板上，以體積比石油醚(30?60°C):丙酮=1-3:1的石油醚-丙酮溶液為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與決明子對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，在與望江南子對照藥材色譜相應的位置上，不得顯相同顏色的斑點。
[0029]柴胡與大葉柴胡的定性鑒別:取本品內容物3g，加水20ml，攪拌使溶解，離心，取上清液，加在聚酰胺柱(100?200目，8g，內徑為2.5?3cm，濕法裝柱)上，分別用204乙醇溶液和50v%乙醇溶液各10ml洗脫，收集5(^%乙醇溶液洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取柴胡對照藥材lg，大葉柴胡對照藥材lg，分別加水適量，分別煎煮1.5小時，濾過，濾液濃縮至約1ml，加在聚酰胺柱(100?200目，4g，內徑為2cm，濕法裝柱)上，分別用水10ml和5(^%乙醇溶液150ml洗脫，收集5(^%乙醇溶液洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，得到柴胡對照品溶液和大葉柴胡對照品溶液。照薄層色譜法試驗(《中國藥典》2015年版四0502)，分別吸取供試品溶液2?10μ1、柴胡對照藥材溶液2μ1和大葉柴胡對照藥材溶液2μ I，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比乙酸乙酯:乙醇:水=I O-14: 2:1的乙酸乙酯-乙醇混合水溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5wt%對二甲氨基苯甲醛的10wt%硫酸-乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰，置于波長為365nm的紫外光燈下進行檢視。供試品色譜中，在與柴胡對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，在與大葉柴胡對照藥材色譜相應的位置上，不得顯相同顏色的斑點。
[0030]當歸的定性鑒別:取本品內容物2.5g，加甲醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml使溶解，用乙醚振搖提取3次，每次20ml，合并乙醚液，濃縮至約20ml，用1界七％碳酸氫鈉溶液振搖提取2次，每次15ml，合并碳酸氫鈉液，用乙酸乙酯洗滌2次，每次25ml，棄去乙酸乙酯液，堿液用鹽酸調節pH值至2?3，用乙醚振搖提取3次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取當歸對照藥材0.5g，加甲醇10ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至約lml，作為當歸對照品溶液。再取阿魏酸對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為阿魏酸對照品溶液。照薄層色譜法(2010年版藥典一部附錄VI B)試驗，吸取上述三種溶液各5μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比環己烷:三氯甲烷:冰醋酸=7-9:7-9:1的環己烷-三氯甲烷-冰醋酸溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以lwt%鐵氰化鉀溶液:lwt%三氯化鐵溶液=1:1的鐵氰化鉀-三氯化鐵混合溶液。供試品色譜中，在與對照品色譜和對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
[0031]以下采用具體的實施例和對比例來說明本發明檢測方法的有益效果。在以下的實施例和對比例中，熊膽丸中藥丸劑的制備方法為:1、分別稱取龍膽1013g、澤瀉(鹽制)608g、地黃760g、當歸608g、桅子608g、菊花608g、車前子(鹽制)608g、決明子608g、柴胡608g、防風608g、黃芩608g、木賊608g、黃連粉608g、薄荷腦62.29g、大黃1031g、冰片76g、熊膽12.66g備用;2、將熊膽、薄荷腦、冰片研成細粉，與黃連粉末配研，過篩，混勻得混合粉末A; 3、將龍膽、澤瀉(鹽制)、地黃、當歸、桅子、菊花、車前子(鹽制)、決明子、柴胡、防風、黃芩、木賊、黃連粉、大黃等十三味，加水煎煮二次，第一次2小時，第二次I小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮成稠膏，干燥，粉碎，過篩得混合粉末B;4、將步驟2和3所得粉末A、粉末B與適量輔料混合，過篩，混勻，裝膠囊，制成10000粒，即得熊膽丸中藥丸劑。
[0032]功能與主治:清熱散風，止痛退翳。用于風熱或肝經濕熱引起的目赤腫痛，羞明多淚。
[0033]用法與用量:口服，一次4粒，一日2次，小兒酌減。
[0034]注意:孕婦忌服。
[0035]規格:每粒裝0.25g。
[0036]貯藏:密封。
[0037]實施例1:
1、性狀鑒別:
本品為膠囊劑，內容物為棕褐色的粉末;氣清涼，味苦、微辛。
[0038]2、薄層色譜定性鑒別:
決明子和望江南子的定性鑒別:取本內容物3g，加甲醇30ml，浸漬I小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml使溶解，再加鹽酸2ml，置水浴上加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加三氯甲烷Iml使溶解，作為供試品溶液。分別另取決明子對照藥材與望江南子對照藥材各0.5g，按照供試品溶液的制備方法分別制成決明子對照藥材溶液和望江南子對照藥材溶液，照薄層色譜法(附錄VIB)試驗，分別吸取供試品溶液5μ1、決明子對照品溶液和望江南子對照品溶液各3μ1，分別點于同一硅膠H薄層板上，以體積比石油醚(30?60°C ):丙酮=2:1的石油醚-丙酮溶液為展開劑，展開50min，取出，晾干。供試品色譜中，在與決明子對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，在與望江南子對照藥材色譜相應的位置上，不得顯相同顏色的斑點。
[0039]柴胡與大葉柴胡的定性鑒別:取本品內容物3g，加水20ml，攪拌使溶解，離心，取上清液，加在聚酰胺柱(150目，8g，內徑為2.8cm，濕法裝柱)上，分別用20v%乙醇溶液和5(^%乙醇溶液各10ml洗脫，收集5(^%乙醇溶液洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取柴胡對照藥材lg，大葉柴胡對照藥材lg，分別加水適量，分別煎煮1.5小時，濾過，濾液濃縮至約1ml，加在聚酰胺柱(150目，4g，內徑為2cm，濕法裝柱)上，分別用水10ml和5(^%乙醇溶液150ml洗脫，收集5(^%乙醇溶液洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，得到柴胡對照品溶液和大葉柴胡對照品溶液。照薄層色譜法試驗(《中國藥典》2015年版四0502)，分別吸取供試品溶液5μ1、柴胡對照藥材溶液2μ1和大葉柴胡對照藥材溶液2μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比乙酸乙酯:乙醇:水= 12:2:1的乙酸乙酯-乙醇混合水溶液為展開劑，展開50min，取出，瞭干，噴以5wt%對二甲氨基苯甲醛的10wt%硫酸-乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰，置于波長為365nm的紫外光燈下進行檢視。供試品色譜中，在與柴胡對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，在與大葉柴胡對照藥材色譜相應的位置上，不得顯相同顏色的斑點。
[0040]當歸的定性鑒別:取本品內容物2.5g，加甲醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml使溶解，用乙醚振搖提取3次，每次20ml，合并乙醚液，濃縮至約20ml，用1界七％碳酸氫鈉溶液振搖提取2次，每次15ml，合并碳酸氫鈉液，用乙酸乙酯洗滌2次，每次25ml，棄去乙酸乙酯液，堿液用鹽酸調節pH值至2，用乙醚振搖提取3次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取當歸對照藥材0.5g，加甲醇10ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至約lml，作為當歸對照品溶液。再取阿魏酸對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為阿魏酸對照品溶液。照薄層色譜法(2010年版藥典一部附錄VIB)試驗，吸取上述三種溶液各5μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比環己烷:三氯甲烷:冰醋酸=8:8:1的環己烷-三氯甲烷-冰醋酸溶液為展開劑，展開40min，取出，晾干，噴以lwt%鐵氰化鉀溶液:lwt%三氯化鐵溶液=1:1的鐵氰化鉀-三氯化鐵混合溶液。供試品色譜中，在與對照品色譜和對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
[0041 ] 實施例2:
1、性狀鑒別:本品為膠囊劑，內容物為棕褐色的粉末;氣清涼，味苦、微辛。
[0042]2、薄層色譜定性鑒別:
決明子和望江南子的定性鑒別:取本內容物3g，加甲醇30ml，浸漬I小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml使溶解，再加鹽酸2ml，置水浴上加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加三氯甲烷Iml使溶解，作為供試品溶液。分別另取決明子對照藥材與望江南子對照藥材各0.5g，按照供試品溶液的制備方法分別制成決明子對照藥材溶液和望江南子對照藥材溶液，照薄層色譜法(附錄VIB)試驗，分別吸取供試品溶液5μ1、決明子對照品溶液和望江南子對照品溶液各3μ1，分別點于同一硅膠H薄層板上，以體積比石油醚(30?60°C ):丙酮=1:1的石油醚-丙酮溶液為展開劑，展開50min，取出，瞭干。供試品色譜中，在與決明子對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，在與望江南子對照藥材色譜相應的位置上，不得顯相同顏色的斑點。
[0043]柴胡與大葉柴胡的定性鑒別:取本品內容物3g，加水20ml，攪拌使溶解，離心，取上清液，加在聚酰胺柱(100目，8g，內徑為2.5cm，濕法裝柱)上，分別用20v%乙醇溶液和5(^%乙醇溶液各10ml洗脫，收集5(^%乙醇溶液洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取柴胡對照藥材lg，大葉柴胡對照藥材lg，分別加水適量，分別煎煮1.5小時，濾過，濾液濃縮至約1ml，加在聚酰胺柱(100目，4g，內徑為2cm，濕法裝柱)上，分別用水10ml和5(^%乙醇溶液150ml洗脫，收集5(^%乙醇溶液洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，得到柴胡對照品溶液和大葉柴胡對照品溶液。照薄層色譜法試驗(《中國藥典》2015年版四0502)，分別吸取供試品溶液2μ1、柴胡對照藥材溶液2μ1和大葉柴胡對照藥材溶液2μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比乙酸乙酯:乙醇:水= 10:2:1的乙酸乙酯-乙醇混合水溶液為展開劑，展開50min，取出，瞭干，噴以5wt%對二甲氨基苯甲醛的10wt%硫酸-乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰，置于波長為365nm的紫外光燈下進行檢視。供試品色譜中，在與柴胡對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，在與大葉柴胡對照藥材色譜相應的位置上，不得顯相同顏色的斑點。
[0044]當歸的定性鑒別:取本品內容物2.5g，加甲醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml使溶解，用乙醚振搖提取3次，每次20ml，合并乙醚液，濃縮至約20ml，用1界七％碳酸氫鈉溶液振搖提取2次，每次15ml，合并碳酸氫鈉液，用乙酸乙酯洗滌2次，每次25ml，棄去乙酸乙酯液，堿液用鹽酸調節pH值至3，用乙醚振搖提取3次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取當歸對照藥材0.5g，加甲醇10ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至約lml，作為當歸對照品溶液。再取阿魏酸對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為阿魏酸對照品溶液。照薄層色譜法(2010年版藥典一部附錄VIB)試驗，吸取上述三種溶液各5μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比環己烷:三氯甲烷:冰醋酸=7:7:1的環己烷-三氯甲烷-冰醋酸溶液為展開劑，展開40min，取出，晾干，噴以lwt%鐵氰化鉀溶液:lwt%三氯化鐵溶液=1:1的鐵氰化鉀-三氯化鐵混合溶液。供試品色譜中，在與對照品色譜和對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
[0045]實施例3:
1、性狀鑒別:本品為膠囊劑，內容物為棕褐色的粉末;氣清涼，味苦、微辛。
[0046]2、薄層色譜定性鑒別:
決明子和望江南子的定性鑒別:取本內容物3g，加甲醇30ml，浸漬I小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml使溶解，再加鹽酸2ml，置水浴上加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加三氯甲烷Iml使溶解，作為供試品溶液。分別另取決明子對照藥材與望江南子對照藥材各0.5g，按照供試品溶液的制備方法分別制成決明子對照藥材溶液和望江南子對照藥材溶液，照薄層色譜法(附錄VIB)試驗，分別吸取供試品溶液5μ
1、決明子對照品溶液和望江南子對照品溶液各3μ1，分別點于同一硅膠H薄層板上，以體積比石油醚(30?60 °C ):丙酮=3:1的石油醚-丙酮溶液為展開劑，展開50min，取出，瞭干。供試品色譜中，在與決明子對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，在與望江南子對照藥材色譜相應的位置上，不得顯相同顏色的斑點。
[0047]柴胡與大葉柴胡的定性鑒別:取本品內容物3g，加水20ml，攪拌使溶解，離心，取上清液，加在聚酰胺柱(200目，8g，內徑為3cm，濕法裝柱)上，分別用20v%乙醇溶液和50v%乙醇溶液各10ml洗脫，收集5(^%乙醇溶液洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取柴胡對照藥材lg，大葉柴胡對照藥材lg，分別加水適量，分別煎煮1.5小時，濾過，濾液濃縮至約1ml，加在聚酰胺柱(200目，4g，內徑為2cm，濕法裝柱)上，分別用水10ml和5(^%乙醇溶液150ml洗脫，收集5(^%乙醇溶液洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，得到柴胡對照品溶液和大葉柴胡對照品溶液。照薄層色譜法試驗(《中國藥典》2015年版四0502)，分別吸取供試品溶液10μ1、柴胡對照藥材溶液2μ1和大葉柴胡對照藥材溶液2μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比乙酸乙酯:乙醇:水=14: 2:1的乙酸乙酯-乙醇混合水溶液為展開劑，展開50min，取出，瞭干，噴以5wt%對二甲氨基苯甲醛的1wt%硫酸-乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰，置于波長為365nm的紫外光燈下進行檢視。供試品色譜中，在與柴胡對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，在與大葉柴胡對照藥材色譜相應的位置上，不得顯相同顏色的斑點。
[0048]當歸的定性鑒別:取本品內容物2.5g，加甲醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml使溶解，用乙醚振搖提取3次，每次20ml，合并乙醚液，濃縮至約20ml，用1界七％碳酸氫鈉溶液振搖提取2次，每次15ml，合并碳酸氫鈉液，用乙酸乙酯洗滌2次，每次25ml，棄去乙酸乙酯液，堿液用鹽酸調節pH值至3，用乙醚振搖提取3次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取當歸對照藥材0.5g，加甲醇10ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至約lml，作為當歸對照品溶液。再取阿魏酸對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為阿魏酸對照品溶液。照薄層色譜法(2010年版藥典一部附錄VIB)試驗，吸取上述三種溶液各5μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比環己烷:三氯甲烷:冰醋酸=9:9:1的環己烷-三氯甲烷-冰醋酸溶液為展開劑，展開40min，取出，晾干，噴以lwt%鐵氰化鉀溶液:lwt%三氯化鐵溶液=1:1的鐵氰化鉀-三氯化鐵混合溶液。供試品色譜中，在與對照品色譜和對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
[0049]對比例1:
考察決明子和望江南子的薄層色譜定性鑒別中，展開劑對薄層色譜定性鑒別的影響，其余均同實施例1。
[0050](I)采用體積比石油醚(30?60°C ):丙酮=0.5:1的石油醚-丙酮溶液為展開劑，展開僅需要40min，分離效果差，無法對決明子和望江南子進行有效鑒別。
[0051 ] (2)采用體積比石油醚(30?60°C ):丙酮=4:1的石油醚-丙酮溶液為展開劑，分離效果與實施例1-3相同，但展開時間需要60min。
[0052]由本對比例可知，當石油醚-丙酮溶液中石油醚(30?60°C):丙酮的體積比小于1:1，雖然展開時間由50min縮短到40min，但是分離效果差，無法對決明子和望江南子進行有效鑒別。當石油醚-丙酮溶液中石油醚(30?60°C):丙酮的體積大于3:1，雖然分離效果與實施例1-3相同，但展開時間需要60min。因此，本發明所述的以體積比石油醚(30?60°C ):丙酮=1-3:1的石油醚-丙酮溶液為展開劑，對決明子和望江南子的展開效果都好，且展開時間適宜，以較大的優勢處于較佳的效果。
[0053]對比例2:
考察決明子和望江南子的薄層色譜定性鑒別中，展開劑對薄層色譜定性鑒別的影響，其余均同實施例1。
[0054](I)采用體積比石油醚(O?30°C):丙酮=2:1的石油醚-丙酮溶液為展開劑，對望江南子的展開效果好，對決明子的展開效果差，無法對決明子進行有效鑒別。
[0055](2)采用體積比石油醚(60?90°C ):丙酮=2:1的石油醚-丙酮溶液為展開劑，對決明子的展開效果好，對望江南子的展開效果差，無法對望江南子進行有效鑒別。
[0056]由本對比例可知，當石油醚-丙酮溶液中石油醚沸程為0_30°C時，雖然對望江南子的展開效果好，但對決明子的展開效果差，無法對決明子進行有效鑒別。當石油醚-丙酮溶液中石油醚的沸程為60-90°C時，雖然對決明子的展開效果好，但對望江南子的展開效果差，無法對望江南子進行有效鑒別。因此，本發明所述的石油醚-丙酮溶液中石油醚的沸程為30-60°C，對決明子和望江南子的展開效果都好，且展開時間適宜，以較大的優勢處于較佳的效果。
[0057]對比例3:
考察柴胡和大葉柴胡的薄層色譜定性鑒別中，展開劑對薄層色譜定性鑒別的影響，其余均同實施例1。
[0058](I)采用體積比乙酸乙酯:乙醇:水=9:2:1的乙酸乙酯-乙醇混合水溶液為展開劑，展開僅需要40min，但是分離效果差，無法對柴胡和大葉柴胡進行有效鑒別。
[0059](2)采用體積比乙酸乙酯:乙醇:水=15:2:1的乙酸乙酯-乙醇混合水溶液為展開劑，分離效果與實施例1?3基本相當，但是展開時間需要65min。
[0060]由本對比例可知，當乙酸乙酯-乙醇混合水溶液中乙酸乙酯:乙醇:水的體積比小于10: 2:1，雖然展開時間由50min縮短到40min，但是分離效果差，無法對柴胡和大葉柴胡進行有效鑒別。當乙酸乙酯-乙醇混合水溶液中乙酸乙酯:乙醇:水的體積比大于14:2:1，分離效果與實施例1?3基本相當，但是展開時間需由50min延長至65min。因此，本發明所述的以乙酸乙酯-乙醇混合水溶液(10-14:2:1)為展開劑，展開效果好，展開時間適宜，以較大的優勢處于較佳的效果。
[0061 ] 對比例4:
考察當歸的薄層色譜定性鑒別中，展開劑對薄層色譜定性鑒別的影響，其余均同實施例I O
[0062](I)采用體積比環己烷:三氯甲烷:冰醋酸=6:6:1的環己烷-三氯甲烷-冰醋酸溶液為展開劑，展開僅需要30min，但是分離效果差，無法對當歸進行有效鑒別。
[0063](2)采用體積比環己烷:三氯甲烷:冰醋酸=10:10:1的環己烷-三氯甲烷-冰醋酸溶液為展開劑，分離效果與實施例1?3基本相當，但是展開時間需要55min。
[0064]由本對比例可知，當環己烷-三氯甲烷-冰醋酸溶液中環己烷:三氯甲烷:冰醋酸的體積比小于6:6:1,雖然展開時間由40min縮短到30min，但是分離效果差，無法對當歸進行有效鑒別。當環己烷-三氯甲烷-冰醋酸溶液中環己烷:三氯甲烷:冰醋酸的體積比大于10:10:1，分離效果與實施例1?3基本相當，但是展開時間需由40min延長至55min。因此，本發明所述的以體積比環己烷:三氯甲烷:冰醋酸=7-9:7-9:1的環己烷-三氯甲烷-冰醋酸溶液為展開劑，展開效果好，展開時間適宜，以較大的優勢處于較佳的效果。
【主權項】
1.一種中藥丸劑的檢測方法，包括性狀檢測和薄層色譜定性鑒別，其特征在于，所述的薄層色譜定性鑒別包括對中藥丸劑中決明子和望江南子的定性鑒別、柴胡和大葉柴胡的定性鑒別、當歸的定性鑒別； (1)、性狀:本品為膠囊劑，內容物為棕褐色的粉末;氣清涼，味苦、微辛； (2)、薄層色譜定性鑒別: 決明子和望江南子的定性鑒別:分別以決明子對照藥材和望江南子對照藥材為對照品，以體積比石油醚:丙酮=1-3:1的石油醚-丙酮溶液為展開劑，用薄層色譜法鑒別； 柴胡和大葉柴胡的定性鑒別:分別以柴胡對照藥材和八角蓮對照藥材為對照品，以體積比乙酸乙酯:乙醇:水=10-14:2:1的乙酸乙酯-乙醇混合水溶液為展開劑，用薄層色譜法鑒別； 當歸的定性鑒別:以當歸對照藥材為對照品，以體積比環己烷:三氯甲烷:冰醋酸=7-9:7-9: I的環己烷-三氯甲烷-冰醋酸溶液為展開劑，用薄層色譜法鑒別。2.根據權利要求1所述中藥丸劑的檢測方法，其特征在于，所述(2)中決明子和望江南子的薄層色譜定性鑒別具體步驟為:取本內容物，加甲醇，浸漬，濾過，濾液蒸干，殘渣加水使溶解，再加鹽酸，置水浴上加熱，立即冷卻，用乙醚提取乙醚液蒸干，殘渣加三氯甲烷使溶解，作為供試品溶液;分別另取決明子對照藥材與望江南子對照藥材，按照供試品溶液的制備方法分別制成決明子對照藥材溶液和望江南子對照藥材溶液，照薄層色譜法試驗，分別吸取供試品溶液、對照藥材溶液，分別點于同一硅膠H薄層板上，以體積比石油醚:丙酮= 1-3:1的石油醚-丙酮溶液為展開劑，展開，取出，晾干;供試品色譜中，在與決明子對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，在與望江南子對照藥材色譜相應的位置上，不得顯相同顏色的斑點。3.根據權利要求2所述中藥丸劑的檢測方法，其特征在于，所述決明子和望江南子的薄層色譜定性鑒別中以體積比石油醚:丙酮=2:1的石油醚-丙酮溶液為展開劑。4.根據權利要求1所述中藥丸劑的檢測方法，其特征在于，所述(2)中決明子和望江南子的薄層色譜定性鑒別中石油醚的沸程為30?60°C。5.根據權利要求1所述中藥丸劑的檢測方法，其特征在于，所述(2)中柴胡與大葉柴胡的薄層色譜定性鑒別具體步驟為:取本品內容物，加水，攪拌溶解，離心，取上清液，加在聚酰胺柱上，分別用水、20v%乙醇溶液和50v%乙醇溶液洗脫，收集504乙醇溶液洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液;另取柴胡對照藥材、大葉柴胡對照藥材，分別加水，分別煎煮，濾過，濾液濃縮，取濃縮液加在聚酰胺柱上，分別用水和50v%乙醇溶液洗脫，收集50V%Z醇溶液洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇使溶解，得到柴胡對照品溶液和大葉柴胡對照品溶液;照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、柴胡對照品溶液和大葉柴胡對照品溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比乙酸乙酯:乙醇:水= 10-14: 2:1的乙酸乙酯-乙醇混合水溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以對二甲氨基苯甲醛的硫酸乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰，置于波長為365nm的紫外光燈下進行檢視;供試品色譜中，在與柴胡對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，在與大葉柴胡對照藥材色譜相應的位置上，不得顯相同顏色的斑點。6.根據權利要求5所述中藥丸劑的檢測方法，其特征在于，所述柴胡與大葉柴胡的薄層色譜定性鑒別中以體積比乙酸乙酯:乙醇:水=12:2:1的乙酸乙酯-乙醇混合水溶液為展開劑。7.根據權利要求1所述中藥丸劑的檢測方法，其特征在于，所述(2)中當歸的薄層色譜定性鑒別具體步驟為:取本品內容物，加甲醇，超聲處理，濾過，濾液蒸干，殘渣加水使溶解，用乙醚振搖提取，合并乙醚液，濃縮，用碳酸氫鈉溶液振搖提取，用乙酸乙酯洗滌，棄去乙酸乙酯液，堿液用鹽酸調節PH值，用乙醚振搖提取，乙醚液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液;另取當歸對照藥材，加甲醇，超聲處理，濾過，濾液濃縮，作為當歸對照品溶液;再取阿魏酸對照品，加甲醇制成阿魏酸對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比環己烷:三氯甲烷:冰醋酸=7-9:7-9:1的環己烷-三氯甲烷-冰醋酸溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鐵氰化鉀-三氯化鐵混合溶液;供試品色譜中，在與對照品色譜和對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。8.根據權利要求7所述中藥丸劑的檢測方法，其特征在于，所述當歸的薄層色譜定性鑒別中以體積比環己烷:三氯甲烷:冰醋酸=8:8:1的環己烷-三氯甲烷-冰醋酸溶液為展開劑。9.根據權利要求7所述中藥丸劑的檢測方法，其特征在于，所述當歸的薄層色譜定性鑒別中用鹽酸調節PH值至2?3。10.根據權利要求7所述中藥丸劑的檢測方法，其特征在于，所述當歸的薄層色譜定性鑒別中鐵氰化鉀-三氯化鐵混合溶液為lwt%鐵氰化鉀溶液:lwt%三氯化鐵溶液=1:1的混合溶液。
【文檔編號】G01N30/90GK105974045SQ201610328298
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年5月18日
【發明人】鐘茂團, 黎黎, 何德中, 溫國梁, 古莉
【申請人】四川逢春制藥有限公司