一種lc-ms/ms檢測卷煙主流煙氣中茄尼醇的方法
【專利摘要】一種LC?MS/MS檢測卷煙主流煙氣中茄尼醇的方法，其特征在于：該方法利用劍橋濾片捕集卷煙主流煙氣的粒相物，然后轉移劍橋濾片至錐形瓶內，向錐形瓶加入甲醇，對劍橋濾片進行超聲萃取，采用LC?MS/MS對萃取液中的茄尼醇進行檢測，采用LC?MS/MS對茄尼醇標準溶液進行檢測，根據外標法計算卷煙主流煙氣中茄尼醇的含量。本發明利用液相色譜進行卷煙主流煙氣樣品中茄尼醇的分離，由串級質譜完成定性和定量分析。相比于HPLC方法，LC?MS/MS方法具有更強的定性和定量能力，具有更高的檢測靈敏度，能有效地消除基質的干擾，有利于卷煙主流煙氣中茄尼醇的準確檢測。
【專利說明】
一種LC-MS/MS檢測卷煙主流煙氣中茄尼醇的方法
技術領域
[0001]本發明屬于卷煙煙氣分析檢測技術領域，具體涉及一種LC-MS/MS檢測卷煙主流煙氣中茄尼醇的方法。
【背景技術】
[0002]茄尼醇是一種廣泛存在于煙葉、馬鈴薯葉和桑葉中的不飽和聚異戊二烯醇。卷煙抽吸時，大部分茄尼醇原形轉移至卷煙主流煙氣和側流煙氣。煙氣中的茄尼醇含量較高，通常條件下也較為穩定，是一種重要的卷煙煙氣標志物。很多研究報道以茄尼醇作為煙氣的粒相標志物，來研究卷煙主流煙氣在人體呼吸道的沉降規律及環境煙氣中煙氣顆粒的老化和沉降規律。
[0003]關于茄尼醇的檢測方法研究多集中于煙草煙葉上，已有《GB/T 31758-2015煙葉和煙葉提取物中茄尼醇的測定高效液相色譜法》，該標準方法采用了高效液相色譜法(HPLC)對煙葉、煙葉提取物中的茄尼醇進行檢測。此外，很多文獻也報道了基于HPLC的檢測煙葉中茄尼醇的方法。
[0004]卷煙煙氣是煙草不完全燃燒形成的，是不斷變化的極其復雜的化學物質混合物。茄尼醇的分子量大，沸點高，主要存在于煙氣的粒相中。目前，卷煙煙氣中茄尼醇的檢測雖然仍可采用HPLC方法(如，茄尼醇的快速分析及在煙氣攝入量評估中的應用，煙草科技，2013；Identificat1n of oxidat1n products of solanesol produced during airsampling for tobacco smoke by electrospray mass spectrometry and HPLC?Analyst，2005)，但是，由于卷煙煙氣的化學成分相比于煙草煙葉更為復雜，在對卷煙煙氣中茄尼醇檢測時可能存在基質干擾及定性定量準確性差的問題。
[0005]液相色譜串級質譜(LC-MS/MS)是將液相色譜與串級質譜相聯用的分析儀器，其利用液相色譜進行有機物的分離，并由串級質譜完成待測物的定性和定量分析。由于具有較高的定性能力和定量能力，LC-MS/MS在復雜基質樣品有機物的檢測中得到了廣泛地應用。相比于HPLC方法，LC-MS/MS方法往往具有更強的定性能力和更高的靈敏度。Chunjian Z(Rapid and quantitative determinat1n of solanesol in Nicotiana tabacumbyliquid chromatography-tandem mass spectrometry, Journal of Pharmaceutical andB1medical Analysis , 2007)采用了LC-MS/MS對煙草煙葉中的前尼醇進行了檢測；Clifford Watson (Development of a method to assess cigarette smoke intake，Environmental science & technology, 2004)米用LC-MS/MS方法對卷煙抽吸后卷煙濾嘴中截留的茄尼醇進行檢測。此外，黃翼飛等(液相色譜一大氣壓化學電離離子阱質譜法測定煙草中的游離茄尼醇，分析試驗室，2009)、黃菲等(液相色譜一電噴霧離子阱質譜測定煙草中的游離茄尼醇，現代食品科技，2011)均采用液相色譜與離子阱質譜(LC-1TMS)聯用用于煙草中茄尼醇的檢測。
[0006]當前，針對卷煙主流煙氣中茄尼醇仍沒有LC-MS/MS檢測方法的研究報道，而HPLC法檢測卷煙主流煙氣時又可能存在基質干擾及定性定量準確性差的問題。本發明正是基于這一現狀應運而生的。
【發明內容】
[0007]本發明針對卷煙主流煙氣中茄尼醇檢測的需要，提供一種LC-MS/MS檢測卷煙主流煙氣中茄尼醇的方法，相比于HPLC方法，LC-MS/MS方法具有更強的定性和定量能力，具有更高的檢測靈敏度，能有效地消除基質的干擾，有利于卷煙主流煙氣中茄尼醇的準確檢測。
[0008]本發明的目的是通過以下方案來實現的:
一種LC-MS/MS檢測卷煙主流煙氣中茄尼醇的方法，首先利用劍橋濾片捕集卷煙主流煙氣的粒相物，然后轉移劍橋濾片至錐形瓶內，向錐形瓶加入甲醇，對劍橋濾片進行超聲萃取，米用LC-MS/MS對萃取液中的前尼醇進彳丁檢測，米用LC-MS/MS對前尼醇標準溶液進彳丁檢測，根據外標法計算卷煙主流煙氣中茄尼醇的含量，具體步驟如下:
a、茄尼醇標準溶液的配制:
用甲醇配制茄尼醇系列標準溶液，濃度分別為I，2，5，10，20，50，100yg/mL;
b、卷煙主流煙氣中茄尼醇的捕集與萃取:
抽吸4支卷煙，采用劍橋濾片捕集卷煙主流煙氣的粒相物，轉移劍橋濾片至50mL錐形瓶內，向錐形瓶加入甲醇20mL，對劍橋濾片進行超聲萃取40 min，超聲功率為40W，將萃取液通過規格為0.22μπι的有機濾膜，收集于色譜瓶中；
c、萃取液和茄尼醇標準溶液的分析:
LC-MS/MS分析條件:
液相色譜柱為C18色譜柱(100mmX4.6mm)，柱溫為32°C，流速為1.8ml/min，進樣量為10yL，流動相為甲醇:異丙醇=90:10(V:V)，等度洗脫。
[0009]質譜電離模式為電噴霧正離子模式，離子傳輸管溫度為400°C，電噴霧電壓為3.5KV，質譜掃描模式為MRM，碰撞氣為氮氣，碰撞能量為20eV，茄尼醇定量離子對為:m/z
613.5—m/z 557.5。
[0010]d、根據外標法計算卷煙主流煙氣中茄尼醇的含量。
[0011]本方法中卷煙主流煙氣粒相物的捕集過程，應采用直線式吸煙機按照GB/T19609規定的標準條件抽吸卷煙。
[0012]與現有技術相比，本發明方法具有如下優良效果:
針對卷煙主流煙氣中茄尼醇的檢測，LC-MS/MS利用液相色譜進行卷煙主流煙氣樣品中茄尼醇的分離，由串級質譜完成定性和定量分析。相比于HPLC方法，LC-MS/MS方法具有更強的定性和定量能力，具有更高的檢測靈敏度，能有效地消除基質的干擾，有利于卷煙主流煙氣中茄尼醇的準確檢測。
【附圖說明】
[0013]圖1本發明茄尼醇標準溶液檢測的全掃描質譜圖。
[0014]圖2本發明茄尼醇標準溶液檢測的離子流圖(m/z613.5—m/z 557.5)。
【具體實施方式】
[0015]本發明以下結合實施例附圖做進一步說明: 將卷煙樣品在(22 ± I) °C和相對濕度(60 ± 2 )%的環境下平衡48h以上，在ISO標準條件下抽吸卷煙，用Φ 44mm劍橋濾片捕集主流煙氣的粒相物，每張劍橋濾片捕集4支卷煙主流煙氣的粒相物。轉移劍橋濾片至50mL錐形瓶內，向錐形瓶加入甲醇20mL，對劍橋濾片進行超聲萃取40 min，超聲功率為40W，將萃取液通過規格為0.22μπι的有機濾膜，收集于色譜瓶中，待分析。
[0016]茄尼醇標準溶液的配制:以甲醇為溶劑，配制濃度為500yg/mL的茄尼醇儲備液，然后分別配制茄尼醇濃度分別為I，2，5，10，20，50，100yg/mL的甲醇溶液，待分析。
[0017]萃取液和茄尼醇標準溶液的分析條件如下:
LC-MS/MS分析條件:
液相色譜柱為C18色譜柱(100mmX4.6mm)，柱溫為32°C，流速為1.8ml/min，進樣量為10yL，流動相為甲醇:異丙醇=90:10(V:V)，等度洗脫。
[0018]質譜電離模式為電噴霧正離子模式，離子傳輸管溫度為400°C，電噴霧電壓為3.5KV，質譜掃描模式為MRM，碰撞氣為氮氣，碰撞能量為20eV，茄尼醇定量離子對為:m/z
613.5—m/z 557.5。
[0019]圖1為茄尼醇標準溶液檢測的全掃描質譜圖，其中m/z613.5為茄尼醇[1-出0+!1] +的離子峰，m/z 614.5、m/z 615.5分別為前尼醇的同位素離子峰。圖2為前尼醇標準溶液檢測的離子流圖，茄尼醇的保留時間為3.4min。
[0020]分別對茄尼醇標準溶液進行LC-MS/MS分析，建立峰面積對茄尼醇濃度的線性定量方程;對待測樣品進行分析，采用外標法計算卷煙主流煙氣中茄尼醇的含量。
【主權項】
1.一種LC-MS/MS檢測卷煙主流煙氣中茄尼醇的方法，其特征在于:該方法利用劍橋濾片捕集卷煙主流煙氣的粒相物，然后轉移劍橋濾片至錐形瓶內，向錐形瓶加入甲醇，對劍橋濾片進彳丁超聲萃取，米用LC-MS/MS對萃取液中的前尼醇進彳丁檢測，米用LC-MS/MS對前尼醇標準溶液進行檢測，根據外標法計算卷煙主流煙氣中茄尼醇的含量，具體步驟如下: a、茄尼醇標準溶液的配制: 用甲醇配制茄尼醇系列標準溶液； b、卷煙主流煙氣中茄尼醇的捕集與萃取: 抽吸4支卷煙，采用劍橋濾片捕集卷煙主流煙氣的粒相物，轉移劍橋濾片至50mL錐形瓶內，向錐形瓶加入甲醇20mL，對劍橋濾片進行超聲萃取，將萃取液通過規格為0.22μπι的有機濾膜，收集于色譜瓶中； c、萃取液和茄尼醇標準溶液的分析: LC-MS/MS分析條件: 液相色譜柱為C18色譜柱(10mm X 4.6mm)，柱溫為32°C，流速為1.8ml/min，進樣量為10yL，流動相為甲醇:異丙醇=90:10(V:V)，等度洗脫； 質譜電離模式為電噴霧正離子模式，離子傳輸管溫度為400°C，電噴霧電壓為3.5 KV,質譜掃描模式為MRM，碰撞氣為氮氣，碰撞能量為20eV，茄尼醇定量離子對為:m/z 613.5—m/z 557.5; d、根據外標法計算卷煙主流煙氣中茄尼醇的含量。2.根據權利要求1所述的LC-MS/MS檢測卷煙主流煙氣中茄尼醇的方法，其特征在于:茄尼醇系列標準溶液的濃度分別為I，2，5，10，20，50，100yg/mLo3.根據權利要求1所述的LC-MS/MS檢測卷煙主流煙氣中茄尼醇的方法，其特征在于:超聲萃取40 min，超聲功率為40W。4.根據權利要求1所述的LC-MS/MS檢測卷煙主流煙氣中茄尼醇的方法，其特征在于:在卷煙主流煙氣粒相物的捕集過程中，采用直線式吸煙機按照GB/T19609規定的標準條件抽吸卷煙。
【文檔編號】G01N30/02GK105938126SQ201610563501
【公開日】2016年9月14日
【申請日】2016年7月18日
【發明人】崔華鵬, 陳黎, 秦亞瓊, 王曉瑜, 樊美娟, 賈云禎, 蔡君蘭, 劉紹鋒, 張曉兵, 劉惠民
【申請人】中國煙草總公司鄭州煙草研究院