一種測定畜禽養殖廢水中抗生素的方法
【專利摘要】本發明提供了一種測定畜禽養殖廢水中抗生素的方法，屬于分析化學領域；其所述的測試方法包括前處理、離心、富集、洗脫、HPLC檢測五個步驟，可檢測磺胺類、四環素類、大環內酯類三大類抗生素。本發明可以同時檢測三大類抗生素，檢測效果好，通過對樣品的前處理，去除干擾項；本發明操作簡單，建立了前處理、提取、測定的分析方法，在短時間內就可以對九大類抗生素進行快速的分離檢測，具有可操作性強、高效、快速等優點。
【專利說明】
一種測定畜禽養殖廢水中抗生素的方法
技術領域
[0001] 本發明屬于分析化學領域，具體涉及一種測定畜禽養殖廢水中抗生素的方法。
【背景技術】
[0002] 在國內外的規模化畜禽養殖場中，抗生素被廣泛地添加到動物飼料和飲用水中， 用以預防和治療動物傳染病及促進動物生長。抗生素可能在動物體內選擇性地培育出耐藥 菌株，通過食物鏈間接傳染到人類，而進入環境中的耐藥菌株通過直接接觸感染人類。此 外，長期飲用含低濃度抗生素的自來水，也可能在人體內選擇性地培育出耐藥菌株。由于很 多獸用和人用抗生素的化學結構相同或相似(從而其作用機理也相同或相似），在動物和人 體內的細菌中已經發現同樣的耐藥基因。畜禽養殖業是環境水體中抗生素的主要來源之 〇
[0003] 抗生素的檢測對于抗生素的有效去除、在環境中的迀移轉化、生物有效性、生態毒 理性等方面具有重大的現實意義。目前，抗生素的檢測方法的檢測方法主要有微生物法、免 疫分析法、HPLC、毛細管電泳法、薄層色譜法、pH計法等，不同的檢測方法適用于不用的領 域。
[0004] 畜禽養殖廢水中普遍存在磺胺類、四環素類、大環內酯類抗生素，對于這三類抗生 素的檢測已有相關的文獻和專利，其中CN201110267859公開了一種測定土壤、污泥及動物 廢水中磺胺類及四環素類抗生素的方法，CN201310247043公開了一種同時檢測水中四環素 類抗生素的方法。但對于同時檢測三大類的抗生素的方法沒有相關報道。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的在于提供一種測定畜禽養殖廢水中抗生素的方法，本檢測方法可以 同時檢測磺胺類、四環素類、大環內酯類抗生素，操作簡便，節約時間。
[0006] 本發明中所要解決的技術問題通過以下技術方案予以實現:一種測定畜禽養殖廢 水中抗生素的方法，其特征在于，包括以下步驟：
[0007] (1)前處理:取一定量的畜禽養殖廢水，加入檸檬酸和乙二胺四乙酸二鈉，調節pH 值至 3.5-4.5。
[0008] (2)離心：將經過步驟（1)處理的水樣加入乙腈：乙酸=99-99.9:1的離心試劑，然 后進行離心分離，取離心上清液；
[0009] (3)富集:依次用甲醇、乙腈和超純水活化HLB小柱，然后通入待富集水樣，富集完 畢后用超純水淋洗，并在真空條件下抽干；
[0010] (4)洗脫:將步驟(3)中的HLB小柱用甲醇：四氫呋喃：乙腈=55:5:40的洗脫液進行 洗脫，收集洗脫液并濃縮，得到濃縮樣品；
[0011] (5 )HPLC檢測:將濃縮液用乙腈：四氫呋喃=90:10的混合液定容，進行高效液相色 譜檢測。
[0012] 進一步地，所述的檢測的抗生素包括磺胺類、四環素類、大環內酯類抗生素。
[0013] 進一步地，所述的步驟（1)中檸檬酸的添加量為0.1~1 % (w/w)，乙二胺四乙酸二 鈉的添加量為〇. 2-1.5% (w/w)。
[0014] 進一步地，所述的HPLC檢測的色譜條件為：色譜柱：C18柱，250mm X 4 ? 6mm，5與m; 流動相：乙腈：四氫呋喃:0.5 %的乙酸溶液(72:18:10);流速：1. OmL/min;柱溫:30 °C ;進樣 量：20矣L。
[0015] 畜禽養殖廢水中的抗生素主要包括磺胺類、四環素類、大環內酯類，其中磺胺類的 抗生素包括磺胺噻唑（STZ)、磺胺甲惡唑（SMX)、磺胺地索辛（SDM)、磺胺二甲嘧啶（SMN)、磺 胺甲二唑（SML)，四環素類的抗生素包括四環霉素(TCN)、土霉素(0TC)、金霉素(CTC)，大環 內酯類的抗生素包括泰妙菌素(TIA)。
[0016] 本發明的有益效果如下：
[0017] 本發明可以同時檢測三大類抗生素，檢測效果好，通過對樣品的前處理，去除干擾 項;本發明操作簡單，建立了前處理、提取、測定的分析方法，在短時間內就可以對九大類抗 生素進行快速的分離檢測，具有可操作性強、高效、快速等優點。
【具體實施方式】
[0018] 下面詳細說明本發明的具體實施，有必要在此指出的是，以下實施只是用于本發 明的進一步說明，不能理解為對發明保護范圍的限制，該領域技術熟練人員根據上述本發 明內容對本發明做出的一些非本質的改進和調整，仍然屬于本發明的保護范圍。
[0019] 實施例1
[0020] -種測定畜禽養殖廢水中抗生素的方法，測試步驟：
[0021] (1)前處理:取200g的畜禽養殖廢水，加入0 ? 3% (w/w)檸檬酸和0 ? 5% (w/w)乙二胺 四乙酸二鈉，調節pH值至4.5。
[0022] (2)離心:將經過步驟（1)處理的水樣加入乙腈：乙酸=99:1的離心試劑，然后進行 離心分離，取離心上清液；
[0023] (3)富集:依次用甲醇、乙腈和超純水活化HLB小柱，然后通入待富集水樣，富集完 畢后用超純水淋洗，并在真空條件下抽干；
[0024] (4)洗脫:將步驟(3)中的HLB小柱用甲醇：四氫呋喃：乙腈=55:5:40的洗脫液進行 洗脫，收集洗脫液并濃縮，得到濃縮樣品；
[0025] (5 )HPLC檢測：將濃縮液用乙腈：四氫呋喃=90:10的混合液定容，進行高效液相色 譜檢測。
[0026] 實施例2
[0027] -種測定畜禽養殖廢水中抗生素的方法，測試步驟：
[0028] (1)前處理:取200g的畜禽養殖廢水，加入l%(w/w)檸檬酸和1.5%(w/w)乙二胺四 乙酸二鈉，調節pH值至3.5。
[0029] (2)離心:將經過步驟（1)處理的水樣加入乙腈：乙酸=99.9:1的離心試劑，然后進 行離心分離，取離心上清液；
[0030] (3)富集:依次用甲醇、乙腈和超純水活化HLB小柱，然后通入待富集水樣，富集完 畢后用超純水淋洗，并在真空條件下抽干；
[0031] (4)洗脫:將步驟(3)中的HLB小柱用甲醇：四氫呋喃：乙腈=55:5:40的洗脫液進行 洗脫，收集洗脫液并濃縮，得到濃縮樣品；
[0032] (5 )HPLC檢測：將濃縮液用乙腈：四氫呋喃=90:10的混合液定容，進行高效液相色 譜檢測。
[0033] 其中，所述的檢測的抗生素包括磺胺類、四環素類、大環內酯類抗生素。
[0034] 其中，所述的HPLC檢測的色譜條件為：色譜柱：C18柱，250mmX4? 6mm，5 流動 相：乙腈：四氫呋喃：0.5%的乙酸溶液(72:18:10);流速：1. OmL/min;柱溫：30°C ;進樣量： 20 ^L〇
[0035]對本發明中所公開的實施方式的描述并非為了限制本發明的范圍，而是用于描述 本發明。相應地，本發明的范圍不受以上實施方式的限制，而是由權利要求或其等同物進行 限定。
【主權項】
1. 一種測定畜禽養殖廢水中抗生素的方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 前處理：取一定量的畜禽養殖廢水，加入檸檬酸和乙二胺四乙酸二鈉，調節pH值至 3.5-4.5〇 (2) 離心：將經過步驟（1)處理的水樣加入乙腈：乙酸= 99-99.9:1的離心試劑，然后進 行離心分離，取離心上清液； (3) 富集:依次用甲醇、乙腈和超純水活化HLB小柱，然后通入待富集水樣，富集完畢后 用超純水淋洗，并在真空條件下抽干； (4) 洗脫：將步驟（3)中的HLB小柱用甲醇：四氫呋喃：乙腈= 55: 5:40的洗脫液進行洗 脫，收集洗脫液并濃縮，得到濃縮樣品； (5 )HPLC檢測:將濃縮液用乙腈：四氫呋喃=90:10的混合液定容，進行高效液相色譜檢 測。2. 根據權利要求1所述的測定畜禽養殖廢水中抗生素的方法，其特征在于，所述的檢測 的抗生素包括磺胺類、四環素類、大環內酯類抗生素。3. 根據權利要求1所述的測定畜禽養殖廢水中抗生素的方法，其特征在于，所述的步驟 (1)中檸檬酸的添加量為〇. 1~1 % (w/w)，乙二胺四乙酸二鈉的添加量為0.2-1.5% (w/w)。4. 根據權利要求1所述的測定畜禽養殖廢水中抗生素的方法，其特征在于，所述的HPLC 檢測的色譜條件為:色譜柱:C18柱，250mm X 4.6mm，5與m;流動相：乙腈：四氫呋喃:0.5 %的 乙酸溶液(72:18:10);流速：1. OmL/min;柱溫:30°C ;進樣量：20今：U
【文檔編號】G01N30/02GK105929047SQ201610242511
【公開日】2016年9月7日
【申請日】2016年4月19日
【發明人】韓哲, 朱英, 邵艷秋, 田超, 楊凱, 唐厚全
【申請人】山東省科學院新材料研究所