一種浙貝母中貝母素甲、貝母素乙的測定方法
【專利摘要】本發明公開了一種浙貝母中貝母素甲、貝母素乙的測定方法，包括以下步驟：步驟1：將浙貝母粉碎后采用ASE萃取法萃取得到萃取液；步驟2：將萃取液離心分離后，得到上清液；步驟3：將上清液采用液相色譜法進行分析。本發明提供了一種浙貝母中貝母素甲、貝母素乙的測定方法，該方法操作簡單，檢測精度高。
【專利說明】
一種浙貝母中貝母素甲、貝母素乙的測定方法
技術領域
[0001] 本發明涉及實驗室檢測領域，特別是一種浙貝母中貝母素甲、貝母素乙的測定方 法。
【背景技術】
[0002] 2010年藥典記錄了提取浙貝母中貝母素甲、貝母素乙的方法:取本品粉末(過四號 篩)約2g，精密稱定，置燒瓶中，加濃氨試液4ml浸潤1小時，精密加入三氯甲烷-甲醇(4:1)的 混合溶液40ml，稱定重量，混勻，置80°C水浴中加熱回流2小時，放冷，再稱定重量，加上述混 合溶液補足減失的重量，濾過。精密量取續濾液l〇ml，置蒸發皿中蒸干，殘渣加甲醇使溶解 并轉移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液10iil、20ii 1，供試品溶液5~15yl，注人液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數方程分別計算貝母素甲、 貝母素乙的含量，即得。
[0003] 藥典的方法操作過程復雜，對操作人員的操作技能要求高。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的是提供一種浙貝母中貝母素甲、貝母素乙的測定方法，該方法操作 簡單，檢測精度高。
[0005] 本發明提供的技術方案為:一種浙貝母中貝母素甲、貝母素乙的測定方法，包括以 下步驟：
[0006] 步驟1:將浙貝母粉碎后采用ASE萃取法萃取得到萃取液；
[0007] 步驟2:將萃取液離心分離后，得到上清液；
[0008] 步驟3:將上清液采用液相色譜法進行分析；
[0009] 其中，液相色譜法的分析條件為：
[0010] a)儀器:雙三元液相色譜儀
[0011] b)色譜柱規格:碳18色譜柱，3*100mm 3um
[0012] c)柱溫:40°C
[0013] d)流速:0.5mL/min
[0014] e)流動相：乙腈-水-二乙胺，體積比70:30:0.03
[0015] f)檢測波長:蒸發光散射檢測器。
[0016] 在上述的浙貝母中貝母素甲、貝母素乙的測定方法中，所述的步驟1具體為：
[0017] S11:將浙貝母粉碎后，過篩；
[0018] S12:稱取1重量份浙貝母粉，與1重量份娃藻土混合均勾待用；
[0019] S13:在預先放好過濾膜的萃取池中，混合均勻后加入適量的硅藻土至達到萃取池 的池口；蓋上萃取池的蓋子進行靜態萃取;萃取結束后得到萃取液；
[0020] 萃取條件為：萃取溶劑為體積百分比75%乙醇；萃取溫度80°C;靜態萃取時間 3min;沖洗體積60 % ;靜態循環次數2次。
[0021] 在上述的浙貝母中貝母素甲、貝母素乙的測定方法中，所述的萃取池的體積為 10ml 〇
[0022] 在上述的浙貝母中貝母素甲、貝母素乙的測定方法中，所述的靜態萃取的壓力為 1500psi〇
[0023] 在上述的浙貝母中貝母素甲、貝母素乙的測定方法中，所述的靜態萃取的吹掃時 間為100s。
[0024] 在上述的浙貝母中貝母素甲、貝母素乙的測定方法中，步驟2具體為:將萃取液在 15000r/min的條件下離心3min，取上清液。
[0025]在上述的浙貝母中貝母素甲、貝母素乙的測定方法中，所述的儀器為Thermo U3000UHPLC液相色譜儀。
[0026] 在上述的浙貝母中貝母素甲、貝母素乙的測定方法中，所述的色譜柱為Thermo Syncronis C18〇
[0027]在上述的浙貝母中貝母素甲、貝母素乙的測定方法中，所述的ASE萃取法所采用的 儀器為ASE350快速溶劑萃取儀。
[0028]本發明在采用上述技術方案后，其具有的有益效果為：
[0029]本發明的檢測方法操作簡單，精度與藥典方法的精度一致，重復性好。
【附圖說明】
[0030] 圖1為本發明中貝母素甲的色譜分析有效性驗證的直角坐標圖；
[0031] 圖2為本發明中貝母素乙的色譜分析有效性驗證的直角坐標圖；
[0032]圖3為本發明的貝母素甲對照品、貝母素乙對照品的色譜圖；
[0033]圖4為本發明的萃取和測試方法得到色譜圖。
【具體實施方式】
[0034]下面結合【具體實施方式】，對本發明的技術方案作進一步的詳細說明，但不構成對 本發明的任何限制。
[0035] 實施例1:
[0036]將浙貝母經粉碎機粉碎，過四號篩，約1 g，精密稱定，與1 g娃藻土混合均勾，待用， 移入到預先放好過玻璃纖維濾膜的ASE? 10ml萃取池中再加入適量硅藻土，輕輕振搖使之 與池口在同一水平線上，擰緊萃取池上蓋。萃取結束后，把萃取液轉移于25ml容量瓶中，用 甲醇稀釋至刻度，在15000r/min下離心3min，取上清液，進入LC測定。
[0037]萃取條件(見表1)為：
[0038]表1
[0040]分析方法為LC液相色譜法，液相色譜分析條件：
[0041 ] a)儀器:Thermo 雙三元液相(U-3000)
[0042] b)色譜柱：Thermo Syncronis C18 3*1 00mm 3um，即碳 18色譜柱，長度 100mm，直徑 3mm，粒徑3微米；
[0043] c)柱溫:40°C
[0044] d)流速:0.5mL/min
[0045] e)流動相：乙腈-水-二乙胺，體積比70:30:0.03
[0046] f)檢測波長:蒸發光散射檢測器。
[0047] 色譜分析有效性驗證：
[0048]取貝母素甲對照品、貝母素乙對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含貝母素 甲0.2mg、貝母素乙0.15mg的混合溶液，即得貝母素甲對照品、貝母素乙對照品。
[0049] 取貝母素甲對照品、貝母素乙對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含貝母素 甲0.1791mg、貝母素乙0.1240mg的混合溶液，即得。然后分別精密吸取該溶液0.2yl、0.5yl、 0.8yl、lyl、1.5yl、2yl進入LC測定，并依照上述方法測定，結果詳見表2-1、表2-2。附圖1與 表2-1對應，附圖2與表2-2對應，附圖1及附圖2的橫坐標表示濃度，縱坐標表示峰面積。附圖 3為貝母素甲對照品、貝母素乙對照品的采用上述的LC液相色譜法測定的色譜圖。
[0050] 表2-1 (貝母素甲線性關系）
[0052]表2-2 (貝母素乙線性關系）
[0054] 1.1實施例1的萃取方法的重現性驗證：
[0055] 取相同批號的樣品（批號：150827) 1.0g，共4份，精密稱定，按ASE提取方法提取供 試品溶液，進樣量為3yL，以上述的色譜條件平行試驗，測得樣品中貝母素甲的含量見表3-1，RSD為2.54% ;測得樣品中貝母素乙的含量見表3-2，RSD為2.12% ;試驗表明ASE提取方法 重復性良好，結果詳見表3-1、表3-2
[0060] 1.2實施例1的萃取方法的精確度測試
[0061] 采用實施例1的ASE萃取方法和藥典的萃取方法對浙貝母進行萃取，浙貝母為4批， 批號分別為 1510111，151102,150827,150618;
[0062] 實施例1的ASE萃取方法對同一批次的浙貝母平行測試兩次，分別為ASE1和ASE2表 不。
[0063]圖4是樣品150827按照本發明的ASE萃取方法和LC液相色譜法測試(ASE2)得到的 色譜圖。
[0064]具體測試結果見下表4;
[0067]以上所述的僅為本發明的較佳實施例，凡在本發明的精神和原則范圍內所作的任 何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。
【主權項】
1. 一種浙貝母中貝母素甲、貝母素乙的測定方法，其特征在于，包括以下步驟： 步驟1:將浙貝母粉碎后采用ASE萃取法萃取得到萃取液； 步驟2:將萃取液離心分離后，得到上清液； 步驟3:將上清液采用液相色譜法進行分析； 其中，液相色譜法的分析條件為： a) 儀器:雙三元液相色譜儀 b) 色譜柱規格:碳18色譜柱，3*100mm 3um (：)柱溫:40°〇 d) 流速:O · 5mL/min e) 流動相：乙腈-水-二乙胺，體積比70:30:0.03 f) 檢測波長:蒸發光散射檢測器。2. 根據權利要求1所述的浙貝母中貝母素甲、貝母素乙的測定方法，其特征在于，所述 的步驟1具體為： S11:將浙貝母粉碎后，過篩； S12:稱取1重量份浙貝母粉，與1重量份硅藻土混合均勻待用； S13:在預先放好過濾膜的萃取池中，混合均勻后加入適量的硅藻土至達到萃取池的池 口；蓋上萃取池的蓋子進行靜態萃取;萃取結束后得到萃取液； 萃取條件為：萃取溶劑為體積百分比75%乙醇；萃取溫度80°C;靜態萃取時間3min;沖 洗體積60 % ;靜態循環次數2次。3. 根據權利要求2所述的浙貝母中貝母素甲、貝母素乙的測定方法，其特征在于，所述 的萃取池的體積為I Om 1。4. 根據權利要求2所述的浙貝母中貝母素甲、貝母素乙的方法，其特征在于，所述的靜 態萃取的壓力為1500psi。5. 根據權利要求2所述的浙貝母中貝母素甲、貝母素乙的方法，其特征在于，所述的靜 態萃取的吹掃時間為100s。6. 根據權利要求1所述的浙貝母中貝母素甲、貝母素乙的方法，其特征在于，步驟2具體 為:將萃取液在15000r/min的條件下離心3min，取上清液。7. 根據權利要求1所述的浙貝母中貝母素甲、貝母素乙的方法，其特征在于，所述的儀 器為Thermo U3000UHPLC液相色譜儀。8. 根據權利要求7所述的浙貝母中貝母素甲、貝母素乙的方法，其特征在于，所述的色 譜柱為Thermo Syncronis C18〇9. 根據權利要求1所述的浙貝母中貝母素甲、貝母素乙的方法，其特征在于，所述的ASE 萃取法所采用的儀器為ASE350快速溶劑萃取儀。
【文檔編號】G01N30/02GK105911176SQ201610234905
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年4月15日
【發明人】陳學松, 歐妮, 陳翠玲, 鐘水橋, 李仁喬
【申請人】廣西壯族自治區梧州食品藥品檢驗所