氣-質聯用測定羅漢果中有機磷農藥殘留的方法
【專利摘要】本發明公開了一種氣?質聯用測定羅漢果中有機磷農藥殘留的方法，包括如下步驟：（1）稱取羅漢果藥材粉末，經超聲提取、洗滌、脫色、濃縮、定容制得提取液；（2）經氣相色譜?質譜聯用對提取液進行測定檢測過程，本方法可以實現羅漢果中11種有機磷農藥殘留的同時測定，且準確度高、檢測速度快、重現性好，具有較強的實用價值。
【專利說明】
氣-質聯用測定羅漢果中有機磷農藥殘留的方法
技術領域
[0001] 本發明涉及農藥殘留檢測領域，特別是一種氣-質聯用測定羅漢果中有機磷農藥 殘留的方法。
【背景技術】
[0002] 目前市場出售的中藥材多數為人工種植，在種植過程農藥的使用也不可避免的會 造成中藥材的污染，其中，有機磷農藥是我國使用最多、應用最廣的一類人工合成的磷酸酯 類農藥，我國使用的有機磷農藥已有30多種，為減少中藥材中農藥殘留對人體的負面影響， 對中藥材中有機磷農藥殘留檢測方法的建立是非常有必要的。
[0003] 羅漢果為廣西地道藥材，主產于廣西永福、臨桂和龍勝等縣。羅漢果性涼味甘，具 有清熱涼血，祛火止咳、潤腸通便、抗炎鎮痛、抑菌等功效，在廣西作藥用歷史已久，也是廣 西特色大宗中藥材。目前已有采用氣相色譜法對羅漢果中有機磷農藥殘留量進行了分析的 報道，氣相色譜法雖然靈敏度較高，但易受雜質干擾，給定性、定量帶來一定的困難。氣質聯 用法既具有氣相色譜高效分離效果，又具有質譜準確鑒定化合物結構的特點，可達到同時 準確快速測定樣品中微量的多種殘留農藥及其衍生物，因此，極有必要建立一種氣-質聯用 對羅漢果中有機磷農藥殘留進行檢測的方法。
[0004] 公開號為CN101082604A的發明專利申請，公開了一種紡織品中有機磷農藥殘留的 檢測方法，該發明利用SPME技術，在模擬人體環境下利用人工汗液對生態紡織品中的有機 磷農藥殘留進行提取和富集，隨后與氣相色譜一質譜聯用法進行測定。該方法快速，簡單， 選擇性好，授權公告號為CN104458931B的發明專利，公開了一種板藍根藥材的檢測方法，其 中包括利用氣相色譜一質譜進行檢測板藍根藥材中農藥殘留的方法，該方法操作簡便快 速，成本低廉。但是，上述文獻記載中均沒有公開采用氣相色譜一質譜聯用法來檢測羅漢果 中有機磷農藥殘留的方法。
【發明內容】
[0005] 本發明提供了一種氣-質聯用測定羅漢果中有機磷農藥殘留的方法，可準確、快速 地測定羅漢果中微量的有機磷農藥殘留。
[0006] 為實現上述目的，本發明的技術方案為： 一種氣-質聯用測定羅漢果中有機磷農藥殘留的方法，包括以下步驟： (1) 樣品前處理;按照石油醚和丙酮體積比3~1:1配制提取溶劑，稱取羅漢果藥材粗粉 ，加入提取溶劑，置冰浴中超聲提取5~20 min，濾過，得濾液，濾渣及濾器用提取溶劑洗滌， 得洗滌液，合并濾液和洗滌液，濾過，濃縮至干，丙酮定容溶解，得提取液備用； (2) 將提取液用氣相色譜_質譜測定有機磷農藥殘留的含量。
[0007] 優選的，所述步驟(2)中，氣相色譜-質譜的測定條件為： 氣相色譜： 進樣口溫度:210~230 °C; 載氣:氦氣； 進樣方式:分流進樣，分流比1:1; 色譜柱溫度:程序升溫； 質譜： 接口溫度：270~290 °C; 電離方式:EI; 電離能量:70 eV; 離子源溫度:220~230 °C。
[0008] 以上所述的氣相色譜-質譜的測定條件中，更優選的技術方案為： 氣相色譜： 色譜柱:AgilengtHP-5MS 石英毛細管柱（30 mX0.25 mm，0.25 mi); 進樣口溫度:220 °C; 載氣:氦氣，純度彡99 ? 999%，流速3 mL/min; 進樣量：1.0此； 進樣方式:分流進樣，分流比1:1; 色譜柱溫度:初始溫度150 °C，保持6 min，以20 °C/min升至200 °C，保持4 min，再以 20 °C/min 升至220 °C，保持 10 min; 柱流速率：1.46 mL/min。
[0009] 質譜： 接口溫度：280 °C; 電離方式:EI; 電離能量:70 eV; 離子源溫度:230 °C; 溶劑延遲時間：1.5 min。
[0010] 優選的，所述步驟(1)中，石油醚和丙酮體積比2:1配制提取溶劑。
[0011] 優選的，所述步驟（1)中，濾液和洗滌液合并后還進行了脫色處理再濃縮，脫色處 理的步驟為:將濾液和洗滌液置于容器中，加入活性炭，放置3~10 min，振搖脫色，濾過，得 二次濾液，用提取溶劑洗滌濾渣及濾器，得二次洗滌液，合并二次濾液和二次洗滌液，濾過。 更優選的，加入的活性炭為0.2g。
[0012]優選的，所述步驟(1)中，濃縮的方式為:在40°C水浴減壓濃縮。
[0013]優選的，所述有機磷農藥包括甲胺磷、敵敵畏、氧化樂果、甲拌磷、樂果、二嗪農、甲 基對硫磷、對硫磷、馬拉對硫磷、水胺硫磷、喹硫磷。
[0014] 優選的，所述羅漢果粗粉為80~300目。
[0015] 以上所述的技術方案，其有益效果在于:前處理操作簡便、快速，檢測過程可以實 現羅漢果中11種有機磷農藥殘留的同時測定，且準確度高、檢測速度快、重現性好，具有較 強的實用價值。
【附圖說明】
[0016] 圖1是有機磷標準溶液的總離子流典型色譜圖。
[0017] 圖2是加樣回收試驗中加入濃度為0.125 yg/L有機磷對照品溶液的標準工作溶液 的色譜圖。
【具體實施方式】
[0018] 以下結合具體實施例對本發明作進一步說明，但本發明的保護范圍不限于以下實 施例。
[0019] (1)樣品前處理;按照石油醚和丙酮體積比2:1配制提取溶劑，稱取羅漢果藥材粗 粉2 g，置100 mL錐形瓶中，加入提取溶劑，置冰浴中超聲提取10 min，濾過，濾渣及濾器用 提取溶劑10 mL洗滌，合并濾液，置于50 mL燒杯中，加入0.2g活性炭，放置5 min，振搖數次 脫色，直至顏色變淺，濾過，用提取溶劑洗滌濾渣及濾器，合并濾液，濃縮至近干，丙酮定容 至10 mL溶解，得提取液備用； (2) 有機磷對照品儲備液的制備：取有機磷對照品，用丙酮定容配置成50iig/mL的有機 磷標準溶液，精密量取有機磷標準溶液0.4 mL，置于20 mL容量瓶中，用丙酮稀釋至刻度，作 為有機磷對照品儲備液，有機磷對照品儲備液的質量濃度為1 yg/mL，置4 °C冰箱待用； (3) 氣相色譜-質譜條件的設定； 氣相色譜條件： 色譜柱:AgilengtHP-5MS 石英毛細管柱（30 mX0.25 mm，0.25 mi); 進樣口溫度:220 °C; 載氣:氦氣，純度彡99 ? 999%，流速3 mL/min; 進樣量：1.0此； 進樣方式:分流進樣，分流比1:1; 色譜柱溫度:初始溫度150 °C，保持6 min，以20 °C/min升至200 °C，保持4 min，再以 20 °C/min 升至220 °C，保持 10 min; 柱流速率：1.46 mL/min。
[0020] 質譜條件： 接口溫度：280 °C; 電離方式:EI; 電離能量:70 eV; 離子源溫度:230 °C; 溶劑延遲時間：1.5 min。
[0021 ] (4)有機磷標準溶液的總離子流典型色譜圖的制作 在測定過程中，定量方法為峰面積外標法;數據采集方式為全掃描模式(Scan)，掃描范 圍m/z 45~500 amu，選用選擇離子掃描模式(SIM)測定;使用步驟(3)獲得的有機磷標準 溶液的總離子流典型色譜圖如圖1所示，其中每個峰分別表示：1_甲胺磷、2-敵敵畏、3-氧化 樂果、4-甲拌磷、5-樂果、6-二嗪農、7-甲基對硫磷、8-對硫磷、9-馬拉對硫磷、10-7K胺硫磷、 11-喹硫磷。由圖中可見，被測的各化合物在同一進樣系統中可以得到有效地分離，且出峰 較快，峰形較好。
[0022]有機磷農藥殘留中各化合物保留時間、定量離子和定性離子見表1: 表1有機磷農藥殘留的保留時間和特征離子
(5 )在氣相色譜-質譜中制作標準曲線 分別精確吸取一定體積的有機磷對照品儲備液于10 mL容量瓶中，用丙酮稀釋至刻度 并搖勻得到10、50、100、250、500、750 yg/L的一系列不同濃度的有機磷對照品溶液的標準 工作溶液。采用步驟(3)所述的氣相色譜-質譜條件對上述有機磷對照品溶液的標準工作溶 液進行測定，每個濃度平行3份，進樣1 yL，以得到的各農藥殘留對照品定量離子的色譜 峰面積為縱坐標(Y)，對應的農藥殘留濃度為橫坐標(X，iig/L)作圖，繪制標準曲線。
[0023] (6)按照步驟(3)所述的氣相色譜-質譜條件，通過步驟(5)中在氣相色譜-質譜中 生成的標準曲線，對提取液進行檢測分析，得到檢測結果。
[0024] 上述方法可用于包括甲胺磷、敵敵畏、氧化樂果、甲拌磷、樂果、二嗪農、甲基對硫 磷、.對硫磷、馬拉對硫磷、水胺硫磷、喹硫磷在內的11中有機磷農藥殘留的定性和定量檢 測 。
[0025] 以下對本發明的測定方法能較好的檢測羅漢果中有機磷農藥殘留進行進一步驗 證。
[0026] I.線性范圍和檢測限 按照步驟(5)的方法繪制標準曲線，得到線性關系見表2,由此可見11種有機磷農藥殘 留測定標準曲線的線性關系良好，相關系數(r)為0.9991~0.9999。以樣品中組分在儀器上 產生3倍信噪比S/N =3:1所對應的分析物濃度計為方法的檢出限(L0D)，以樣品中組分在儀 器上產生10倍信噪比S/N=10:1所對應的分析物濃度計為方法的定量限（L0Q)，11種有機磷 的L0D為0.432~3.901yg/L，L0Q為1.441~13.001yg/L，可見采用本方法檢測羅漢果中11種 有機磷農藥均有較好的線性關系及較高的靈敏度。
[0027]表2 11種有機磷農藥線性范圍及定量限（/2=3) n.精密度試驗
以質量濃度為500 yg/L混合標準品溶液，采用步驟(3)所述的氣相色譜-質譜條件進行 分析，連續進樣6次，以峰面積計算，測得各種農藥的RSD為1.54%~3.83%，結果表明儀器 精密度良好。
[0028] m.重復性試驗 準確稱取9份羅漢果藥材粉末各2.0 g，以步驟(1)所述方法制備提取液，采用步驟(3) 所述的氣相色譜-質譜條件進行測定，結果表明，甲胺磷、敵敵畏、氧化樂果、甲拌磷、樂果、 二嗪農、甲基對硫磷、對硫磷、馬拉對硫磷、水胺硫磷、喹硫磷的平均RSD分別為1.83%、 1 ? 54%、1 ? 62%、3 ? 27%、3 ? 41%、3 ? 10%、2 ? 78%、2 ? 70%、2 ? 27%、3 ? 83%和 3 ? 23%，結果表明方法重現 性良好。
[0029] IV.加樣回收試驗 準確稱取同一羅漢果藥材粉末9份，分3水平加入濃度分別為0.125 yg/L、0.25 yg/L、 0.375 iig/L有機磷對照品溶液的標準工作溶液，每水平重復3次，混勻后自然晾干，以步驟 (1)所述方法制備提取液，采用步驟(3)所述的氣相色譜-質譜條件進行測定，計算回收率， 結果見表3和圖2，表3結果表明，11種有機磷的加樣平均回收率為83.3~112.4%，相對標準 偏差為1.45~8.28%，本測定方法的準確度和精密度能滿足測定的需要。圖2為加入濃度為 0.125 yg/L的有機磷對照品溶液的標準工作溶液所獲得的其中一個色譜圖，由色譜圖可見 11種有機磷色譜峰均可較好地分離出來。
[0030]表3 羅漢果藥材粉末中3個加標水平下11種有機磷農藥回收率和精密度(/3=3)
【主權項】
1. 一種氣-質聯用測定羅漢果中有機磷農藥殘留的方法，其特征在于包括以下步驟： (1) 樣品前處理；按照石油醚和丙酮體積比3~1:1配制提取溶劑，稱取羅漢果藥材粗粉 ，加入提取溶劑，置冰浴中超聲提取5~20 min，濾過，得濾液，濾渣及濾器用提取溶劑洗滌， 得洗滌液，合并濾液和洗滌液，濾過，濃縮至干，丙酮定容溶解，得提取液備用； (2) 將提取液用氣相色譜-質譜測定有機磷農藥殘留的含量。2. 根據權利要求1所述的氣-質聯用測定羅漢果中有機磷農藥殘留的方法，其特征在 于： 所述步驟(2)中，氣相色譜-質譜的測定條件為： 氣相色譜： 進樣口溫度:210~230 °C; 載氣:氦氣； 進樣方式:分流進樣，分流比1:1; 色譜柱溫度:程序升溫； 質譜： 接口溫度：270~290 °C; 電離方式:EI; 電離能量:70 eV; 離子源溫度:220~230 °C。3. 根據權利要求1所述的氣-質聯用測定羅漢果中有機磷農藥殘留的方法，其特征在 于： 所述步驟(2)中，氣相色譜-質譜的測定條件為： 氣相色譜： 色譜柱:AgilengtHP-5MS 石英毛細管柱（30 mX0.25 mm，0.25 μπι); 進樣口溫度:220 °C; 載氣:氦氣，純度彡99 · 999%，流速3 mL/min; 進樣量：1.0 yL; 進樣方式:分流進樣，分流比1:1; 色譜柱溫度:初始溫度150 °C，保持6 min，以20 °C/min升至200 °C，保持4 min，再以 20 °C/min 升至220 °C，保持 10 min; 柱流速率：1.46 mL/min; 質譜： 接口溫度：280 °C; 電離方式:EI; 電離能量:70 eV; 離子源溫度:230 °C; 溶劑延遲時間：1.5 min。4. 根據權利要求1所述的氣-質聯用測定羅漢果中有機磷農藥殘留的方法，其特征在 于： 所述步驟(1)中，石油醚和丙酮體積比2:1配制提取溶劑。5. 根據權利要求1所述的氣-質聯用測定羅漢果中有機磷農藥殘留的方法，其特征在 于： 所述步驟（1)中，濾液和洗滌液合并后還進行了脫色處理再濃縮，脫色處理的步驟為： 將濾液和洗滌液置于容器中，加入活性炭，放置3~10 min，振搖脫色，濾過，得二次濾液，用 提取溶劑洗滌濾渣及濾器，得二次洗滌液，合并二次濾液和二次洗滌液，濾過。6. 根據權利要求5所述的氣-質聯用測定羅漢果中有機磷農藥殘留的方法，其特征在 于： 所述步驟(1)中，加入的活性炭為0.2g。7. 根據權利要求1所述的氣-質聯用測定羅漢果中有機磷農藥殘留的方法，其特征在 于： 所述步驟(1)中，濃縮的方式為:在40°C水浴減壓濃縮。8. 根據權利要求1所述的氣-質聯用測定羅漢果中有機磷農藥殘留的方法，其特征在 于： 所述有機磷農藥包括甲胺磷、敵敵畏、氧化樂果、甲拌磷、樂果、二嗪農、甲基對硫磷、對 硫磷、馬拉對硫磷、水胺硫磷、喹硫磷。9. 根據權利要求1所述的氣-質聯用測定羅漢果中有機磷農藥殘留的方法，其特征在 于： 所述羅漢果粗粉為80~300目。
【文檔編號】G01N30/02GK105911166SQ201610227280
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年4月13日
【發明人】梁成欽, 陳旭, 付明磊, 周先麗, 黃曉, 羅琴, 蘇小建, 程柳, 文君
【申請人】桂林醫學院