基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒及其制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒。本發明提供的基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒包括試紙條和卡殼：卡殼設置于試紙條的外圍，包圍試紙條；試紙條包括底襯以及設置于底襯上的包被膜，包被膜上依次設置有樣品墊、包被線區和吸水紙；包被線區依次設置為標記線、質控線、AFP檢測線和CEA檢測線。本發明提供的基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒通過AFP與CEA兩項聯檢，對于腫瘤發生的判斷起到協同互補作用，可以根據實際檢測結果，為腫瘤早期提供輔助判斷，縮短檢測周期，增加了檢測的靈敏度，方便了用戶使用。
【專利說明】
基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒及其制備方法
技術領域
[0001] 本發明涉及生命健康技術領域，具體地說，本發明涉及基于生物標志物的腫瘤早 期檢測試劑盒及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 甲胎蛋白（a-fetoprotein AFP)是單一多聚體肽鍵糖蛋白，含590個氨基酸，分 子量約為70KD，與血清白蛋白、維生素結合蛋白屬同一基因家族。AFP于胎兒6周開始合成， 12-15周達到高峰。出生后1-2年降至成人水平。AFP是診斷肝癌靈敏度高和特異性好的 腫瘤標志物，是臨床診斷原發性肝細胞癌的主要實驗室指標，常用于原發性肝癌臨床檢查 及普查。癌胚抗原（carcino-embryonic antigen CEA)是一種分子量為180_200kDa的多 糖蛋白復合物。它存在2-6月齡的胎兒胃腸道組織和直、結腸癌細胞組織中，胃癌、胰腺癌、 卵巢癌、食道癌等組織中也有存在。通常CEA被認為是一種廣譜的腫瘤標志物。目前市場 上的廣譜的腫瘤的早期判斷僅僅單獨依靠單一的腫瘤標志物的檢測，常常因為單一的檢驗 周期長，靈敏度低，從而無法確保腫瘤的診斷率以及甚至會影響腫瘤患者后續的治療和生 命健康。
【發明內容】
[0003] 本發明的主要目的在于提供一種基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒及其制 備方法，同時檢測AFP和CEA，對于腫瘤發生的判斷起到協同互補作用，可以根據實際檢測 結果，為腫瘤早期提供輔助判斷，縮短檢測周期，增加了檢測的靈敏度，方便了用戶使用。
[0004] 為實現上述目的，本發明提供了一種基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒。
[0005] 所述基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒包括試紙條和卡殼：
[0006] 所述卡殼設置于所述試紙條的外圍，包圍所述試紙條；
[0007] 所述試紙條包括底襯以及設置于所述底襯上的包被膜，所述包被膜上依次設置有 樣品墊、包被線區和吸水紙；
[0008] 所述包被線區依次設置有標記線、質控線、AFP檢測線和CEA檢測線。
[0009] 在其中一個實施例中，所述AFP檢測線包括能與待檢測抗原AFP特異性結合的第 一 AFP單克隆抗體；所述CEA檢測線包括能與待檢測抗原CEA特異性結合的第一 CEA單克 隆抗體。
[0010] 在其中一個實施例中，所述待檢測抗原AFP為人源AFP，所述待檢測抗原CEA為人 源 CEA〇
[0011] 在其中一個實施例中，所述標記線包括被熒光膠乳標記的第二AFP單克隆抗體、 第二CEA單克隆抗體和兔IgG抗體。
[0012] 在其中一個實施例中，所述質控線包括羊抗兔IgG抗體。
[0013] 在其中一個實施例中，所述卡殼包括加樣區和視窗區：
[0014] 所述加樣區設置于所述試紙條的樣品墊處，用于滴加樣品；
[0015] 所述視窗區設置于所述試紙條的包被線區，用于觀測實驗結果。
[0016] 在其中一個實施例中，所述標記線和所述質控線之間、所述質控線和所述AFP檢 測線之間以及所述AFP檢測線和所述CEA檢測線之間的間隔設置為2mm-5mm。
[0017] 此外，為實現上述目的，本發明還提供一種基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑 盒的制備方法。
[0018] 所述基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒的制備方法包含以下步驟：
[0019] 將稀釋過的標記有第二AFP單克隆抗體的熒光膠乳、標記有第二CEA單克隆抗體 的熒光膠乳和標記有兔IgG抗體的熒光膠乳，劃線包被于包被膜上的包被線區，形成標記 線；
[0020] 稀釋羊抗兔IgG抗體，并將稀釋過的所述羊抗兔IgG抗體劃線包被于包被膜上的 包被線區，形成質控線；
[0021] 稀釋能與待檢測抗原AFP特異結合的第一 AFP單克隆抗體，并將稀釋過的所述能 與待檢測抗原AFP特異結合的第一 AFP單克隆抗體劃線包被于包被膜上的包被線區，形成 AFP檢測線；
[0022] 稀釋能與待檢測抗原CEA特異結合的第一 CEA單克隆抗體，并將稀釋過的所述能 與待檢測抗原CEA特異結合的第一 CEA單克隆抗體劃線包被于包被膜上的包被線區，形成 CEA檢測線；
[0023] 將包被有所述標記線、質控線、AFP檢測線和CEA檢測線的包被膜置于烘箱中，進 行干燥平衡；
[0024] 將樣品墊和吸水紙依次搭接并粘貼于干燥平衡后的所述包被膜上，所述樣品墊設 置于所述標記線的一端，所述吸水紙設置于所述CEA檢測線的一端；
[0025] 將所述包被膜粘貼于底襯上，形成試紙條；
[0026] 將卡殼設置于所述試紙條的外圍，包圍所述試紙條。
[0027] 優選地，所述待檢測抗原AFP為人源AFP，所述待檢測抗原CEA為人源CEA。
[0028] 優選地，所述標記線和所述質控線之間、所述質控線和所述AFP檢測線之間以及 所述AFP檢測線和所述CEA檢測線之間的間隔設置為2_-5_。
[0029] 本發明采用上述技術方案，帶來的技術效果為：本發明實施例提供的基于生物標 志物的腫瘤早期檢測試劑盒，包括試紙條和卡殼，卡殼設置于試紙條的外圍，包圍試紙條； 試紙條包括底襯以及設置于底襯上的包被膜，包被膜上依次設置有樣品墊、包被線區和吸 水紙；包被線區依次設置為標記線、質控線、AFP檢測線和CEA檢測線；標記線包括被熒光膠 乳標記的第二AFP單克隆抗體、第二CEA單克隆抗體和兔IgG抗體，質控線包括羊抗兔IgG 抗體；AFP檢測線和CEA檢測線分別包括能與待檢測抗原AFP特異性結合的第一 AFP單克 隆抗體和能與待檢測抗原CEA特異性結合的第一 CEA單克隆抗體。本發明實施例提供的基 于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒通過AFP與CEA兩項聯檢，對于腫瘤發生的判斷起到 協同互補作用，可以根據實際檢測結果，為腫瘤早期提供輔助判斷，縮短檢測周期，增加了 檢測的靈敏度，方便了用戶使用。
【附圖說明】
[0030] 圖1為本發明基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒較佳實施例的內部結構示 意圖；
[0031] 圖2為本發明基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒較佳實施例的包被線區的 示意圖；
[0032] 圖3為采用本發明基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒與德靈儀器針對相同 臨床樣本測量出的AFP的相關性圖；
[0033] 圖4為采用本發明基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒與德靈儀器針對相同 臨床樣本測量出的CEA的相關性圖。
[0034] 本發明目的的實現、功能特點及優點將結合實施例，參照附圖做進一步說明。
【具體實施方式】
[0035] 應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。
[0036] 本發明的主要目的在于提供一種基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒及其制 備方法，同時檢測AFP和CEA，對于腫瘤發生的判斷起到協同互補作用，可以根據實際檢測 結果，為腫瘤早期提供輔助判斷，縮短檢測周期，增加了檢測的靈敏度，方便了用戶使用。
[0037] 為實現上述目的，本發明提供了一種基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒。
[0038] 圖1為本發明基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒較佳實施例的內部結構示 意圖；圖2為本發明基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒較佳實施例的包被線區的示意 圖。參照圖1和圖2,在本實施例中，所述基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒包括試紙 條10和卡殼20 :
[0039] 所述卡殼20設置于所述試紙條10的外圍，包圍所述試紙條10 ;
[0040] 所述試紙條10包括底襯101以及設置于所述底襯101上的包被膜102,所述包被 膜102上依次設置有樣品墊1021、包被線區和吸水紙：
[0041] 所述包被線區1022依次設置有標記線10221、質控線10222、AFP檢測線10223和 CEA檢測線10224。
[0042] 在本實施例中，所述基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒包括試紙條10和卡 殼20,卡殼20設置于試紙條10的外圍，卡殼20的材質可以是塑料的，卡殼20的形狀可以 是長方體的，也可以設計成別的形狀，但是以匹配試紙條10為前提，卡殼20包圍試紙條10， 起到保護的作用。作為優選的實施例，卡殼20上有兩處開孔的地方，一處稱為加樣區：對應 于試紙條10上的樣品墊1021處，為了方便使用者加樣，卡殼20的加樣區可以設置有"小雨 點"的加樣標識，防止初次使用者混淆加樣區，導致實驗檢測失敗；另一處稱為視窗區：對應 設置于試紙條10上的包被線區1022,為了清晰直觀的觀測到實驗結果。此外，設置卡殼20 方便了使用者的實驗操作，減少了人為的誤差，提高了檢測結果的正確率。
[0043] 所述試紙條10包括底襯101及設在底襯101上的包被膜102,包被膜102上設有 樣品墊1021、包被線區1022和吸水紙1023。在檢測的過程中，吸水紙1023的主要成分是 纖維素，用于提供檢測所需的毛細作用力，吸水紙的材料可以是自由棉絨，也可以是玻璃纖 維，優選自由棉絨的材料。由于纖維素是天然的大分子有機物，紙張中的纖維素交錯呈網 狀，因此纖維素交錯形成的網狀中有很多空隙，這些空隙可以含住吸水紙1023上的水分， 從而產生張力。此外水由于勢能，從濃度高的一側流向濃度低的一側，因此在實驗操作的過 程中，如果從一側吸水，則有利于滴加的檢測樣品快速的擴散從加樣處到硝酸纖維素膜上， 利于實驗的進行。硝酸纖維素膜（nitrocellulose filter membrane，簡稱NC膜），是免疫 反應的發生處。當通過樣品墊1021，在吸水紙1023的作用下把樣品從起始上樣點轉移至包 被線區，在檢測試紙條10下游控制著樣品沿著NC膜膜片流動。
[0044] 所述包被線區1022包括有從靠近所述樣品墊1021端至靠近所述吸水紙1023端 依次平行設置、且相互間隔的包被有第二AFP單克隆抗體、第二CEA單克隆抗體和兔IgG抗 體的標記線10221、包被有羊抗兔IgG抗體的質控線10222、包被有能與待檢測抗原AFP特 異性結合的第一 AFP單克隆抗體的AFP檢測線10223、以及包被有能與待檢測抗原CEA特異 性結合的第一 CEA單克隆抗體的CEA檢測線10224。所述標記線10221上熒光膠乳標記的 抗體采用熒光稀釋液進行稀釋，所述熒光稀釋液包括：1. 〇% -1. 5% BSA，2. 5% -5 %蔗糖， 0? 1% -0? 5% Tween-20,0. 08-0. 1% NaN3,余量為 0? 01-0. 02M、pH7. 2 的 PBS ;牛血清白蛋白 (BSA)，是牛血清中的一種白蛋白，能減輕有些抗體的變性，對于某些不利環境因素如加熱， 表面張力及化學因素引起的抗體的變性，起到穩定、減輕的效果，減少外界因素對實驗的干 擾。此外在本發明實施例中加入BSA，可增強產物的穩定性。Tween-20為聚氧乙烯去水山梨 醇單月桂酸酯和一部分聚氧乙烯雙去水山梨醇單月桂酸酯的混合物，是一種表面活性劑， 在本發明實施例中促進抗體與抗體的結合的作用，磷酸鹽緩沖液又稱PBS，是由磷酸二氫鈉 和磷酸氫二鈉組成的溶液，用于樣品的稀釋。疊氮鈉又稱NaN 3，在本發明實施例中起到防腐 的作用；所述質控線10222、AFP檢測線10223和CEA檢測線10224上包被的抗體均采用包 被緩沖液進行稀釋，所述包被緩沖液包括：〇. 08-0. 1% NaN3，余量為0. 01-0. 02M、pH7. 2的 PBS。所述包被膜102為硝酸纖維素膜，所述硝酸纖維素膜的爬速為95s~135s/4cm。所 述熒光膠乳標記的第二AFP單克隆抗體和第二CEA單克隆抗體的濃度均為0. 25-1. Omg/ ml，在試紙條10上的用量均為0. 02-0. 1 yg/cm 2,按5%~30%的比例進行稀釋；所述熒 光乳膠標記的兔IgG抗體的濃度為0. 25-1. Omg/ml，按5 % -15 %的比例進行稀釋，在試紙 條10上的用量為0. 001-0. 025 y g/cm2。所述質控線10222上包被的兔IgG抗體的濃度為 0. 25-1. Omg/ml，用量為20 y l/27-35cm ;所述檢測線上包被的AFP單克隆抗體和CEA單克 隆抗體的濃度均為〇. 25-1. 0mg/ml，用量均為20 y l/27-35cm。
[0045] 所述待檢測抗原AFP為人的血液中的甲胎蛋白AFP，所述待檢測抗原CEA為人的 血液中的癌胚抗原CEA，其中，人的血液中可取全血、血清或血漿。所述標記線10221和所 述質控線10222之間、所述質控線10222和所述AFP檢測線10223之間以及所述AFP檢測 線10223和所述CEA檢測線10224之間的間隔設置為2mm-5mm。此處，間隔間距的設置考慮 匹配熒光信號讀取儀器裝置在后續檢測中的使用，當間隔間距過短時，儀器無法區分出AFP 檢測線和CEA檢測線二者發出的熒光信號強度，影響實驗結果，當間隔間距過長時，儀器檢 測不到相應的熒光信號，同樣也會對實驗造成干擾。基于此，針對本發明AFP檢測線10223 和所述CEA檢測線10224之間的間隔設置為為宜。匹配與后續所述熒光膠乳顆粒 的直徑為〇? 1 y m-1 y m，受激發后發射的波長為180nm-800nm。本實驗中的第一 AFP單克隆 抗體與第二AFP單克隆抗體與待測AFP抗原結合時處于不同表位；同樣，第一 CEA單克隆抗 體與第二CEA單克隆抗體與待測CEA抗原結合時處于不同表位。
[0046] 本發明采用上述技術方案，帶來的技術效果為：基于生物標志物的腫瘤早期檢測 試劑盒，包括試紙條和卡殼，卡殼設置于試紙條的外圍，包圍試紙條；試紙條包括底襯以及 設置于底襯上的包被膜，包被膜上依次設置有樣品墊、包被線區和吸水紙；包被線區依次設 置為標記線、質控線、AFP檢測線和CEA檢測線；標記線包括被熒光膠乳標記的第二AFP單 克隆抗體、第二CEA單克隆抗體和兔IgG抗體，質控線包括羊抗兔IgG抗體；AFP檢測線和 CEA檢測線分別包括能與待檢測抗原AFP特異性結合的第一 AFP單克隆抗體和能與待檢測 抗原CEA特異性結合的第一 CEA單克隆抗體。通過AFP與CEA兩項聯檢，對于腫瘤發生的判 斷起到協同互補作用，可以根據實際檢測結果，為腫瘤早期提供輔助判斷，縮短檢測周期， 方便了用戶使用。
[0047] 此外，為實現上述目的，本發明還提供一種基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑 盒的制備方法。
[0048] 所述基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒的制備方法包含以下步驟：
[0049] 將稀釋過的標記有第二AFP單克隆抗體的熒光膠乳、標記有第二CEA單克隆抗體 的熒光膠乳和標記有兔IgG抗體的熒光膠乳，劃線包被于包被膜上的包被線區，形成標記 線；
[0050] 稀釋羊抗兔IgG抗體，并將稀釋過的所述兔IgG抗體劃線包被于包被膜上的包被 線區，形成質控線；
[0051] 稀釋能與待檢測抗原AFP特異結合的第一 AFP單克隆抗體，并將稀釋過的所述能 與待檢測抗原AFP特異結合的第一 AFP單克隆抗體劃線包被于包被膜上的包被線區，形成 AFP檢測線；
[0052] 稀釋能與待檢測抗原CEA特異結合的第一 CEA單克隆抗體，并將稀釋過的所述能 與待檢測抗原CEA特異結合的第一 CEA單克隆抗體劃線包被于包被膜上的包被線區，形成 CEA檢測線；
[0053] 將包被有所述標記線、質控線、AFP檢測線和CEA檢測線的包被膜置于烘箱中，進 行干燥平衡；
[0054] 將樣品墊和吸水紙依次搭接并粘貼于干燥平衡后的所述包被膜上，所述樣品墊設 置于所述標記線的一端，所述吸水紙設置于所述CEA檢測線的一端；
[0055] 將所述包被膜粘貼于底襯上，形成試紙條；
[0056] 將卡殼設置于所述試紙條的外圍，包圍所述試紙條。
[0057] 在本實施例中，參照圖1和圖2,在標記線10221的制備過程中，用熒光稀釋液稀 釋標記有第二AFP單克隆抗體的熒光膠乳、標記有第二CEA單克隆抗體的熒光膠乳和標 記有兔IgG抗體的熒光膠乳，劃線于包被膜上形成標記線10221 ;其中熒光膠乳標記的第 二AFP單克隆抗體和熒光膠乳標記的第二CEA單克隆抗體的濃度均為0. 25-1. Omg/ml， 用量均為〇? 02-0. 1 y g/cm2;熒光膠乳標記的兔IgG抗體的濃度為0? 25-1. Omg/ml，用 量為0.001-0. 025 yg/cm 2;所述熒光稀釋液中含有1.0% -1.5% BSA，2. 5% -5 %蔗糖， 0? 1% -0? 5% Tween-20,0. 08-0. 1% NaN3,余量為 0? 01-0. 02M、pH7. 2 的 PBS ;質控線 10222 和檢測線的制備過程中，用包被緩沖液稀釋兔IgG抗體（購自Hytest公司）、能與待檢 測抗原AFP特異結合的檢測線上的第一 AFP單克隆抗體（購自杭州啟泰生物技術有限公 司）、以及能與待檢測抗原CEA特異結合的檢測線上的第一 CEA單克隆抗體（購自Hytest 公司），并將稀釋后的三種抗體分別依次平行地劃線于包被膜上形成質控線10222、AFP 檢測線10223和CEA檢測線10224;其中，質控線10222包被的羊抗兔IgG抗體的濃度為 0. 25-1. Omg/ml，用量為20 y l/27-35cm ;AFP檢測線10223包被的第一 AFP單克隆抗體的 濃度為0. 25-1. Omg/ml，用量為20 y l/27-35cm ;CEA檢測線10224包被的第一 CEA單克隆 抗體的濃度為0. 25-1. Omg/ml，用量為20 y l/27-35cm ;所述包被緩沖液中含有0. 08-0. 1 % NaN3，余量為0. 01-0. 02M、pH7. 2的PBS ;所述標記線10221和所述質控線10222之間、所述 質控線10222和所述AFP檢測線之間以及所述AFP檢測線10223和所述CEA檢測線10224 之間的間隔設置為標記線10221、質控線10222、AFP檢測線10223、CEA檢測線 10224在包被膜的制備過程中，將包被好標記線10221、質控線10222、AFP檢測線10223、CEA 檢測線10224的包被膜置于濕度〈30%的烘箱，且烘箱的溫度設定在35-45°(：，干燥24-3611 后，于2°C -30°C密封干燥平衡7天以上。在試紙條的制備過程中，將樣品墊1021和吸水紙 1023依次搭接并粘貼于干燥平衡后的包被膜102上，在包被膜102靠近CEA檢測線10224 的一端搭接粘貼吸水紙1023,即可制成試紙條10。將得到的試紙條10與預制成的卡殼20 相匹配，即可得到試劑盒。
[0058] 在其中一個實施例中，所述熒光膠乳標記抗體的制備步驟為：將常規方法共價活 化后的熒光膠乳超聲波200W-400W處理20-30秒后，按照50-200 y g標記抗體/100 y 1熒 光膠乳的比例加入第二AFP單克隆抗體（購自杭州啟泰生物技術有限公司）、第二CEA單克 隆抗體（購自Hytest公司）和兔IgG抗體（購自Hytest公司），混勾后室溫攪拌反應2h， 離心洗滌3次，每次10000-15000xg、離心10min，沉淀用PBS-TBN溶解并超聲波100W處理 30s，用PBS-TBN恢復離心前體積，4°C保存，備用。
[0059] 本發明所述基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒原理是雙抗夾心法；首先將直 徑范圍0. 01um-l. 5um的膠乳與AFP抗體以及各類不同的熒光素共價結合形成物質A，然后 將直徑范圍0. 〇lum-l. 5um的膠乳與CEA抗體以及各類不同的熒光素共價結合形成物質B， 由于膠乳本身具有羧基、氨基等基團，當物質A再與相應的AFP抗原結合，利用熒光素在激 發光下發射熒光；同樣，當物質B再與相應的CEA抗原結合，利用熒光素在激發光下也可以 發射熒光。當熒光膠乳標記的第二AFP抗體與檢測樣品（例如：血液中的全血、血清或血 漿）中的足夠的AFP抗原結合形成復合物A1，該復合物A1在層析的作用下轉移至AFP檢測 線處，與第一 AFP抗體（該抗體會結合在AFP抗原的另一表位上）結合，從而形成雙抗體夾 心的復合物A2,該復合物A2聚集在此處后，受到光源激發釋放出相應波長的發射光，將該 試紙條放于專門的熒光信號讀取儀器中，即可讀取熒光信號的大小，從而進行定量測定。同 樣的當熒光膠乳標記的第二CEA抗體與檢測樣品（例如：血液中的全血、血清或血漿）中的 足夠的CEA抗原結合形成復合物B1，該復合物B1在層析的作用下轉移至CEA檢測線處，與 第一 CEA抗體（該抗體會結合在CEA抗原的另一表位上）結合，從而形成雙抗體夾心的復 合物B2,該復合物B2聚集在此處后，受到光源激發釋放出相應波長的發射光，將該試紙條 放于專門的熒光信號讀取儀器中，即可讀取熒光信號的大小，從而進行定量測定。
[0060] 熒光信號讀取儀器的主要工作原理是該儀器的熒光光源系統能夠發出單色激發 光，照射在待檢測的試紙條AFP檢測線和CEA檢測線處，此時檢測線AFP和CEA通過反應凝 集的熒光乳膠在單色激發光的作用下，發出熒光信號，該熒光信號被該儀器的檢測系統捕 獲，檢測系統接收熒光信號后，由檢測系統中的光電倍增管實現光信號的放大，然后由該儀 器的固態檢測器進行光電信號的轉化，由電信號讀出電路將電信號輸出，再有自動軟件分 析控制系統處理，在顯示屏處顯示結果，從而實現對樣品的精確定量。
[0061 ] 1、用德靈DN-100特種蛋白測定儀對134例臨床AFP和CEA樣本（例如：血液中的 全血、血清或血漿）作為檢測標準，表1采用本發明較佳實施例的試劑盒對10個樣本的AFP 定量測定結果；表2采用本發明較佳實施例的試劑盒對10個樣本的CEA定量測定結果。 [0062] 表1采用本發明較佳實施例的試劑盒對10個樣本的AFP定量測定結果
[0064] 表2采用本發明較佳實施例的試劑盒對10個樣本的CEA定量測定結果
[0066] 從表1和表2可知，采用較佳實施例的試劑盒對樣本進行測定時，可以得到與檢測 標準相當的結果，說明本發明的試劑盒可以實現準確定量測量。
[0067] 2、對試劑盒進行性能方面的測定一最低檢測限度
[0068] 圖3為采用本發明基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒與德靈儀器針對相同 臨床樣本測量出的AFP的相關性圖；圖4為采用本發明基于生物標志物的腫瘤早期檢測試 劑盒與德靈儀器針對相同臨床樣本測量出的CEA的相關性圖。參照圖3和圖4,在本實施例 中，AFP以德靈公司的特種蛋白分析儀測試60份臨床樣本（例如：血液中的全血、血清或血 漿），這兩種產品的結果相關系數為R2>0. 996,且Y = 0. 05+0. 984X ;CEA以德靈公司的特種 蛋白分析儀測試60份臨床樣本（例如：血液中的全血、血清或血漿），這兩種產品的結果相 關系數為R2>0. 994,，且Y = 0. 263+0. 983X ;因此，該實施例的試劑盒跟對照試劑的相關性 好，AFP的最低檢測限度為0. 05mg/l，CEA的最低檢測限度為0. lng/1。
[0069] 3、對試劑盒進行性能方面的測定一精密度
[0070] 采用較佳實施例的試劑盒對含量分別是高值、低值和中值的樣本，連續至少檢測 10次，計算變異系數（CV)。
[0071] 對于AFP含量的較高值選擇為（115.01mg/l)、中值選擇為（16. 14mg/l)、低 值選擇為（〇.41mg/l)，將上述3個血液樣本分別測定10次，根據其測定數據，利用 SPSS軟件統計得出高值（115.54±9. 13mg/l)，CV 2.41% ;同樣的利用SPSS軟件統計 得出中值（16. 2±0.82mg/l)，CV 3.06% ;同樣的利用SPSS軟件統計得出低值選擇為 (0.41±0.03mg/l)，CV 2. 1% ;;檢測結果 CV 值均小于 12%。
[0072] 對于CEA含量的較高值選擇為（42. 51mg/l)、中值選擇為（5.4mg/l)、低值選 擇為（0. 40mg/l)，將上述3個血液樣本分別測定10次，根據其測定數據，利用SPSS軟 件統計得出高值（42. 51 ±4. 74mg/l)，CV 3.21% ;同樣的利用SPSS軟件統計得出中值 (5. 4±0. 51mg/l)，CV 3. 3% ;同樣的利用SPSS軟件統計得出低值選擇為（0? 40±0. 05mg/ 1)，CV 2.40%;;檢測結果CV值均小于12%。以上結果說明較佳實施例的試劑盒的精密 度良好。
[0073] 本發明實施例基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒，包括試紙條和卡殼，卡殼 設置于試紙條的外圍，包圍試紙條；試紙條包括底襯以及設置于底襯上的包被膜，包被膜上 依次設置有樣品墊、包被線區和吸水紙；包被線區依次設置為標記線、質控線、AFP檢測線 和CEA檢測線；標記線包括被熒光膠乳標記的第二AFP單克隆抗體、第二CEA單克隆抗體和 兔IgG抗體，質控線包括羊抗兔IgG抗體;AFP檢測線和CEA檢測線分別包括能與待檢測抗 原AFP特異性結合的第一 AFP單克隆抗體和能與待檢測抗原CEA特異性結合的第一 CEA單 克隆抗體。通過AFP與CEA兩項聯檢，對于腫瘤發生的判斷起到協同互補作用，可以根據實 際檢測結果，為腫瘤早期提供輔助判斷，縮短檢測周期，增加了檢測的靈敏度，方便了用戶 使用。
[0074] 以上僅為本發明的優選實施例，并非因此限制本發明的專利范圍，凡是利用本發 明說明書及附圖內容所作的等效結構或等效流程變換，或直接或間接運用在其他相關的技 術領域，均同理包括在本發明的專利保護范圍內。
【主權項】
1. 一種基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒，其特征在于，所述基于生物標志物的 腫瘤早期檢測試劑盒包括試紙條和卡殼： 所述卡殼設置于所述試紙條的外圍，包圍所述試紙條； 所述試紙條包括底襯以及設置于所述底襯上的包被膜，所述包被膜上依次設置有樣品 墊、包被線區和吸水紙； 所述包被線區依次設置有標記線、質控線、AFP檢測線和CEA檢測線。2. 如權利要求1所述的基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒，其特征在于，所述AFP 檢測線包括能與待檢測抗原AFP特異性結合的第一 AFP單克隆抗體；所述CEA檢測線包括 能與待檢測抗原CEA特異性結合的第一 CEA單克隆抗體。3. 如權利要求2所述的基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒，其特征在于，所述待 檢測抗原AFP為人源AFP，所述待檢測抗原CEA為人源CEA。4. 如權利要求1~3任一項所述的基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒，其特征在 于，所述標記線包括被熒光膠乳標記的第二AFP單克隆抗體、第二CEA單克隆抗體和兔IgG 抗體。5. 如權利要求1~3任一項所述的基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒，其特征在 于，所述質控線包括羊抗兔IgG抗體。6. 如權利要求1~3任一項所述的基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒，其特征在 于，所述卡殼包括加樣區和視窗區： 所述加樣區設置于所述試紙條的樣品墊處，用于滴加樣品； 所述視窗區設置于所述試紙條的包被線區，用于觀測實驗結果。7. 如權利要求1~3任一項所述的基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒，其特征在 于，所述標記線和所述質控線之間、所述質控線和所述AFP檢測線之間以及所述AFP檢測線 和所述CEA檢測線之間的間隔設置為2mm-5mm。8. -種基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，所述腫瘤早 期檢測試劑盒的制備方法包括以下步驟： 將稀釋過的標記有第二AFP單克隆抗體的熒光膠乳、標記有第二CEA單克隆抗體的熒 光膠乳和標記有兔IgG抗體的熒光膠乳，劃線包被于包被膜上的包被線區，形成標記線； 稀釋羊抗兔IgG抗體，并將稀釋過的所述羊抗兔IgG抗體劃線包被于包被膜上的包被 線區，形成質控線； 稀釋能與待檢測抗原AFP特異結合的第一 AFP單克隆抗體，并將稀釋過的所述能與待 檢測抗原AFP特異結合的第一 AFP單克隆抗體包被于包被膜上的包被線區，形成AFP檢測 線； 稀釋能與待檢測抗原CEA特異結合的第一 CEA單克隆抗體，并將稀釋過的所述能與待 檢測抗原CEA特異結合的第一 CEA單克隆抗體劃線包被于包被膜上的包被線區，形成CEA 檢測線； 將包被有所述標記線、質控線、AFP檢測線和CEA檢測線的包被膜置于烘箱中，進行干 燥平衡； 將樣品墊和吸水紙依次搭接并粘貼于干燥平衡后的所述包被膜上，所述樣品墊設置于 所述標記線的一端，所述吸水紙設置于所述CEA檢測線的一端； 將所述包被膜粘貼于底襯上，形成試紙條； 將卡殼設置于所述試紙條的外圍，包圍所述試紙條。9. 如權利要求8所述的基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒的制備方法，其特征在 于，所述待檢測抗原AFP為人源AFP，所述待檢測抗原CEA為人源CEA。10. 如權利要求8或9所述的基于生物標志物的腫瘤早期檢測試劑盒的制備方法，其 特征在于，所述標記線和所述質控線之間、所述質控線和所述AFP檢測線之間以及所述AFP 檢測線和所述CEA檢測線之間的間隔設置為2_-5_。
【文檔編號】G01N33/574GK105891481SQ201510292617
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2015年5月30日
【發明人】張貫京, 陳興明, 葛新科, 克里斯基捏·普拉紐克, 艾琳娜·古列莎, 王海榮, 張少鵬, 方靜芳, 高偉明, 程金兢, 梁艷妮, 周榮, 李慧玲, 邢立立, 波達別特·伊萬, 徐之艷, 周亮, 梁昊原, 肖應芬, 鄭慧華, 唐小浪, 李瀟云
【申請人】深圳市貝沃德克生物技術研究院有限公司