赤子愛勝蚯蚓測定農藥可濕性粉劑毒性的方法
【專利摘要】本發明公開了一種赤子愛勝蚯蚓測定農藥可濕性粉劑毒性的方法，包括以下步驟：將農藥可濕性粉劑溶解，配制成農藥儲備液；將農藥儲備液加入到土壤和水的混合物中配制成梯度濃度的試驗液；挑選有生殖帶的赤子愛勝蚯蚓，隨機加入到生物試驗液中，持續培養14d，于第7d、14d記錄赤子愛勝蚯蚓的生物效應參數；根據赤子愛勝蚯蚓的生物效應參數計算農藥可濕性粉劑對赤子愛勝蚯蚓的半數致死濃度LC50值，判斷農藥可濕性粉劑的毒性；具有易操作、實用性強、速度快、精確度高等優勢，可初步判斷出農藥可濕性粉劑的毒性。
【專利說明】
赤子愛勝蚯蚓測定農藥可濕性粉劑毒性的方法
技術領域
[0001] 本發明涉及養殖技術領域，尤其涉及一種赤子愛勝蚯蚓測定農藥可濕性粉劑毒性 的方法。
【背景技術】
[0002] 赤子愛勝蟲丘蝴(Eisenia foetida)屬于環節動物門寡毛綱正蝴科愛勝蝴屬，赤子 愛勝蚯蚓生命周期短，在20°C的條件下，孵化需要3~4周，7~8周即可發育成熟。它繁殖能 力強，一條艇蝴可以在一周內產2~5個蝴苗，每個蝴苗可孵化出幾條艇蝴。具有繁殖率高、 適應性強，適宜人工養殖等特點。因此，赤子愛勝蚯蚓已成為科學研究中常用的模式生物， 廣泛應用于生命科學、毒理學、環境科學和農業科學等領域。
[0003] 目前，采用赤子愛勝蚯蚓作為農藥可濕性粉劑毒性篩選模型的研究較少，缺乏相 關的研究數據評估模型的實用性和可靠性。因此，提供一種易操作、實用性強的赤子愛勝蚯 蚓測定農藥可濕性粉劑毒性的方法尤其重要。
【發明內容】
[0004] 本發明要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種易操作、實用性強的 赤子愛勝蚯蚓測定農藥可濕性粉劑毒性的方法。
[0005] 為解決上述技術問題，提供了一種赤子愛勝蚯蚓測定農藥可濕性粉劑毒性的方 法，包括以下步驟：
[0006] S1、將農藥可濕性粉劑溶解，配制成農藥儲備液；
[0007] S2、將步驟S1中的所述農藥儲備液加入到土壤和水的混合物中配制成梯度濃度的 試驗液；
[0008] S3、挑選有生殖帶的赤子愛勝蚯蚓，隨機加入到步驟S2的所述試驗液中，持續培養 14d，于第7d、14d記錄赤子愛勝蚯蚓的生物效應參數；
[0009] S4、根據赤子愛勝蚯蚓的生物效應參數計算農藥可濕性粉劑對赤子愛勝蚯蚓的半 數致死濃度LC5Q值，判斷農藥可濕性粉劑的毒性。
[0010]上述的方法，優選的，所述步驟S3中挑選的所述赤子愛勝蚯蚓的體重為0.30g~ 0 · 60g〇
[0011] 上述的方法，優選的，所述步驟S3中所述生物效應參數為赤子愛勝蚯蚓的死亡率 和中毒癥狀。
[0012] 上述的方法，優選的，赤子愛勝蚯蚓的死亡標準為:用針輕觸赤子愛勝蚯蚓尾部無 反應;所述中毒癥狀為:赤子愛勝蚯蚓出現了蠕動能力減弱。
[0013] 上述的方法，優選的，所述步驟S3中，所述持續培養14d的培養條件為:溫度為20 土 l°c、濕度為80%~85%、4001^?~8001^?光強連續光照。
[0014] 上述的方法，優選的，所述步驟S3中所述赤子愛勝蚯蚓在加入所述試驗液的前1 天，將所述赤子愛勝蚯蚓在人工土壤中清腸。
[0015] 上述的方法，優選的，所述步驟S3中所述赤子愛勝蚯蚓于試驗開始前1天在人工土 壤中清腸。
[0016] 上述的方法，優選的，所述步驟S4中，采用統計軟件SPSS，以處理濃度的對數值為 自變量X，以死亡率的機率值為因變量y，計算農藥制劑對赤子愛勝蚯蚓的半數致死濃度LC 50 和95 %置信限。
[0017] 上述的方法，優選的，所述農藥毒級判斷標準為低毒(LC5Q> 10.0 mg a. i . /kg^t)， 中毒（l.OOmg a.i./kg社<LC5〇<10.0mg a.i./kg社），高毒（O.lOOmg a.i./kg社<LC5〇< l.OOmg a.i./kg社），劇毒（LC5〇<0.100mg a.i./kg社）〇
[0018] 上述的方法，優選的，所述赤子愛勝蚯蚓測定農藥可濕性粉劑毒性的方法還設有 空白對照組，所述空白對照組以土壤和水的混合物作為試驗液培養赤子愛勝蚯蚓，所述空 白對照組死亡率不超過10%則證明實驗結果可信。
[0019] 與現有技術相比，本發明的優點在于：
[0020] 本發明提供了一種操作簡便、實用性強的赤子愛勝蚯蚓測定農藥可濕性粉劑毒性 的方法;該方法可初步判斷出農藥可濕性粉劑的毒性，速度快，精確度高。
【具體實施方式】
[0021] 以下結合具體優選的實施例對本發明作進一步描述，但并不因此而限制本發明的 保護范圍。
[0022] 實施例
[0023] 以下實施例中所采用的材料和儀器均為市售。
[0024] 實施例1:
[0025] -種本發明的赤子愛勝蚯蚓測定農藥可濕性粉劑毒性的方法，包括以下步驟： [0026] 1、試驗液配制
[0027]稱取15%炔草酯可濕性粉劑6.6667g，用蒸餾水溶解并定容至100mL容量瓶中，得 到濃度為l〇.〇mg a.i./mL的儲備液。
[0028] 實驗組:取5份1500g的人工土壤(干重），用移液器向1500g人工土壤(干重）中分別 移取1.500、3.000、6.00、12.00、24.0011^上述儲備液得到混合物(標號為1、2、3、4、5)。在分 另IJ向混合物1~5中加入448、447、444、438、426mL的蒸餾水，充分攪拌使藥液、土壤和水混合 均勻，得到濃度分別為10. 〇、20.0、40.0、80.0、160mg a. i . /kg社的試驗液。將上述每組試驗 液平均分為三份，作為平行樣，分別盛裝于1L的標本瓶中。
[0029] 空白對照組(CK):稱取1500g的人工土壤(干重），用量筒向1500g人工土壤(干重） 中加入450mL的蒸餾水，充分攪拌后平均分為三份，分別盛裝于1L的標本瓶中。
[0030] 2、染毒
[0031] 挑選體重0.30~0.60g有生殖帶的健康赤子愛勝蚯蚓于試驗開始前1天在人工土 壤中清腸，然后隨機加入到標本瓶中，每個標本瓶中加入1 〇條赤子愛勝蚯蚓。
[0032] 3、試驗數據記錄
[0033] 在染毒開始時及染毒開始后14d內每天測定并記錄環境的溫度、濕度、光照強度 等。測得試驗期間環境的溫度為：20.1°C~20.6°C，濕度為81.0%~82.5%，光照強度為 656Lux~681Lux，并在該光照強度下連續光照。
[0034] 于染毒后7d、14d觀察并記錄赤子愛勝蚯蚓的中毒癥狀和死亡數，將觀察結果記錄 于表1中。
[0035] 表1:15%炔草酯可濕性粉劑對蚯蚓急性毒性試驗數據記錄表
[0036]
[0037] 同時，在14d的試驗期間，赤子愛勝蚯蚓出現了蠕動能力減弱，尸體腐爛，死亡等生 物效應。
[0038] 4、數據處理
[0039]采用統計軟件SPSS12.0，以處理濃度的對數值為自變量X，以（校正)死亡率的機率 值為因變量y，建立毒力回歸方程，計算15%炔草酯可濕性粉劑對蚯蚓的半數致死濃度LC5〇 和95 %置信限，具體的計算結果參見表2。
[0040]表2:15%炔草酯可濕性粉劑對蚯蚓急性毒性試驗結果表
[0043] 從表2的數據可知：15%炔草酯可濕性粉劑對蚯蚓急性毒性LC5Q(14d)為57.2mg a. i ./kg社，95%置信限為40.6~106mg a. i ./kg社。
[0044] 5、結果評價
[0045] 根據1^5〇值判斷農藥毒級。毒性分級標準為:低毒(]^5〇>10.〇11^3.;[./1^社)，中 毒（l.OOmg a.i./kg社<LC50<10.0mg a.i./kg社），高毒（O.lOOmg a.i./kg社<LC50< l.OOmg a.i./kg社），劇毒（LC50<0.100mg a.i./kg社）0
[0046] 在本實施例的試驗條件下，15%炔草酯可濕性粉劑對蚯蚓急性毒性的LC5Q(14d)為 57.2mg a.i./kg社，大于lO.Omg a.i./kg社，毒性等級為"低毒"。
[0047] 實施例2
[0048] -種本發明的赤子愛勝蚯蚓測定農藥可濕性粉劑毒性的方法，包括以下步驟：
[0049] 1、試驗液配制
[0050] 稱取50%呋蟲胺可濕性粉劑0.1000g，用蒸餾水溶解并定容至50mL容量瓶中，得到 濃度為l.OOmg a.i./mL的儲備液。
[00511 實驗組:取5份1500g的人工土壤(干重），用移液器向1500g人工土壤(干重）中分別 移取0.150、0.270、0.486、0.874、1.580mL上述儲備液得到混合物(標號為1、2、3、4、5)。向混 合物1~5中均加入395mL的蒸餾水，充分攪拌使藥液、土壤和水混合均勻，得到濃度分別為 0.100、0.180、0.324、0.583、1.050mg a. i . /kg社的試驗液。將上述每組試驗液平均分為三 份，作為平行樣，分別盛裝于1L的標本瓶中。
[0052] 空白對照組(CK):稱取1500g的人工土壤(干重），用量筒向1500g人工土壤(干重） 中加入450mL的蒸餾水，充分攪拌后平均分為三份，分別盛裝于1L的標本瓶中。
[0053] 2、染毒
[0054] 挑選體重0.30~0.60g有生殖帶的健康赤子愛勝蚯蚓于試驗開始前1天在人工土 壤中清腸，然后隨機加入到標本瓶中，每個標本瓶中加入1 〇條赤子愛勝蚯蚓。
[0055] 3、試驗數據記錄
[0056] 在染毒開始時及染毒開始后14d內每天測定并記錄環境的溫度、濕度、光照強度 等。測得試驗期間環境的溫度為：19.5°C~20.6°C，濕度為81.3 %~82.7 %，639Lx~663Lux 連續光照。
[0057]于染毒后7d、14d觀察并記錄赤子愛勝蚯蚓的中毒癥狀和死亡數，將觀察結果記錄 于表3中。
[0058]表3:50 %呋蟲胺可濕性粉劑對蚯蚓急性毒性試驗數據記錄表 [0059]
[0060]同時，在14d的試驗期間，赤子愛勝蚯蚓出現了蠕動能力減弱，尸體腐爛，死亡等生 物效應。
[0061 ] 4、數據處理
[0062]采用統計軟件SPSS12.0，以處理濃度的對數值為自變量X，以（校正)死亡率的機率 值為因變量y，建立毒力回歸方程。計算50%呋蟲胺可濕性粉劑對蚯蚓的半數致死濃度LC5〇 和95%置信限，具體的計算結果參見表4。
[0063] 表4:50 %呋蟲胺可濕性粉劑對蚯蚓急性毒性試驗結果表
[0064]
[0065] 通過上述方法計算得到50 %呋蟲胺可濕性粉劑對蚯蚓急性毒性LC5Q(14d)為 0· 324mga. i ·/kg=fy；，95%置信限為0· 270~0·402mg a. i ·/kg=fy；。
[0066] 5、結果評價
[0067] 根據LC5Q值判斷農藥毒級。毒性分級標準為:低毒(LC5Q> 10.Omg a. i ./kg#)，中 毒（l.OOmg a.i./kg社<LC5〇<10.0mg a.i./kg社），高毒（O.lOOmg a.i./kg社<LC5〇< l.OOmg a.i./kg社），劇毒（LC5〇<0.100mg a.i./kg社）〇
[0068] 在本實施例的試驗條件下，50%呋蟲胺可濕性粉劑對蚯蚓急性毒性的LC5Q(14d)為 0.324mg a.i./kg社，處于0.100~l.OOmg a.i./kg社之間，毒性等級為"高毒"。
[0069] 以上所述，僅是本發明的較佳實施例而已，并非對本發明作任何形式上的限制。雖 然本發明已以較佳實施例揭示如上，然而并非用以限定本發明。任何熟悉本領域的技術人 員，在不脫離本發明的精神實質和技術方案的情況下，都可利用上述揭示的方法和技術內 容對本發明技術方案做出許多可能的變動和修飾，或修改為等同變化的等效實施例。因此， 凡是未脫離本發明技術方案的內容，依據本發明的技術實質對以上實施例所做的任何簡單 修改、等同替換、等效變化及修飾，均仍屬于本發明技術方案保護的范圍內。
【主權項】
1. 赤子愛勝蚯蚓測定農藥可濕性粉劑毒性的方法，其特征在于，包括以下步驟： 51、 將農藥可濕性粉劑溶解，配制成農藥儲備液； 52、 將步驟S1中的所述農藥儲備液加入到土壤和水的混合物中配制成梯度濃度的試驗 液； 53、 挑選有生殖帶的赤子愛勝蚯蚓，隨機加入到步驟S2的所述試驗液中，持續培養14d， 于第7d、14d記錄赤子愛勝蚯蚓的生物效應參數； 54、 根據赤子愛勝蚯蚓的生物效應參數計算農藥可濕性粉劑對赤子愛勝蚯蚓的半數致 死濃度LC5Q值，判斷農藥可濕性粉劑的毒性。2. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟S3中挑選的所述赤子愛勝蚯蚓的 體重為0 · 30g~0 · 60g。3. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟S3中所述生物效應參數為赤子愛 勝蚯蚓的死亡率和中毒癥狀。4. 根據權利要求3所述的方法，其特征在于，赤子愛勝蚯蚓的死亡標準為：用針輕觸赤 子愛勝蚯蚓尾部無反應;所述中毒癥狀為:赤子愛勝蚯蚓出現了蠕動能力減弱。5. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟S3中，所述持續培養14d的培養條 件為:溫度為20 ± 1°C、濕度為80 %~85 %、400Lux~800Lux光強連續光照。6. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟S3中所述赤子愛勝蚯蚓在加入所 述試驗液的前1天，將所述赤子愛勝蚯蚓在人工土壤中清腸。7. 根據權利要求1至6中任一項所述的方法，其特征在于，所述步驟S4中，采用統計軟件 SPSS，以處理濃度的對數值為自變量X，以死亡率的機率值為因變量y，計算農藥制劑對赤子 愛勝蚯蚓的半數致死濃度LC5Q和95 %置信限。8. 根據權利要求1至6中任一項所述的方法，其特征在于，所述農藥毒級判斷標準為低 毒（LC5〇>10.0mg a.i./kg社），中毒（l.OOmg a.i./kg社<LC5〇<10.0mg a.i./kg社），高毒 (O.lOOmg a.i./kg社<LC5〇<1.00mg a.i./kg社），劇毒（LC5〇<0.100mg a.i./kg社）〇9. 根據權利要求1至6中任一項所述的方法，其特征在于，所述赤子愛勝蚯蚓測定農藥 可濕性粉劑毒性的方法還設有空白對照組，所述空白對照組以土壤和水的混合物作為試驗 液培養赤子愛勝蚯蚓，所述空白對照組死亡率不超過10 %則證明實驗結果可信。
【文檔編號】G01N33/50GK105866399SQ201610185991
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年3月29日
【發明人】陳昂, 劉勇, 張德詠, 奚慶, 羅源華, 羅香文, 劉志邦, 嚴清平, 何安頔, 劉建宇
【申請人】湖南省植物保護研究所