基于gc-ms的植物非靶向代謝組學樣品預處理方法
【專利摘要】本發明公開了一種基于GC?MS的植物非靶向代謝組學樣品預處理方法，其包括步驟：1)將植物樣本、內標物和預冷至?20～4℃的親水性有機溶劑混勻并降溫至?80～?10℃，然后研磨粉碎，并冰水浴超聲提取；2)再分別加入親脂性有機溶劑和水，混勻，并冰水浴超聲提取；于0～16℃高速離心，取水相并揮干；3)加入肟化試劑，于30～45℃進行肟化反應；4)最后加入衍生化試劑和正己烷，于60～80℃進行衍生化反應。本發明的預處理方法不僅可充分提取植物樣本的初級代謝物，獲得豐富的代謝物質譜數據信息，而且可盡量避免提取過程中代謝物的變化，以及脂溶性物質對氣相色譜柱的污染，從而獲得較好的樣品重現性。
【專利說明】
基于GC-MS的植物非靶向代謝組學樣品預處理方法
技術領域
[0001] 本發明屬于植物樣本預處理方法領域，具體涉及一種基于GC-MS的植物非靶向代 謝組學樣品預處理方法。
【背景技術】
[0002] 目前，植物代謝組學已由一個充滿假想的概念演變成發展迅速、研究價值巨大的 學術領域。與細菌和酵母僅包含數百種代謝物不同，已知的植物次生代謝物已達約10萬種。 但是，植物代謝組學研究目前仍處于起步階段，在物種鑒定、轉基因植物鑒別、代謝途徑和 基因功能研究等領域有廣闊的應用前景。
[0003] 通過對代謝組研究，不僅可了解植物在不同環境條件下的變化，還可研究同一植 物不同部位或時期的代謝物成分及含量。代謝譜可作為物種鑒定尤其是轉基因個體鑒別的 重要依據，是基因型與表型研究的重要手段。
[0004]植物代謝組學的實驗目的是同時對植物樣本內盡可能多的代謝物進行定性、定量 分析，但是由于植物樣本中代謝物種類很多，含量差別很大，代謝物濃度的動態范圍較寬， 復雜程度較高，而且代謝物受熱容易反應導致結構發生變化。另外，植物組織中含有很多脂 溶性的次級代謝物，這些物質種類繁多，沸點高，而且難以通過衍生化的方法降低沸點，不 適合使用GC-MS(氣相色譜-質譜聯用)檢測。這些物質GC-MS數據庫(Fiehn數據庫、NIST數據 庫等）中的質譜信息少，難以定性，不是普篩的主要目的，容易對初級代謝物的分析產生干 擾。另外，次級代謝物的通路分析復雜，在KEGG數據庫中的次級代謝通路很少，缺少次級代 謝通路的比對依據，故在前處理中盡可能多的提取植物樣本中的初級代謝物，并排除脂溶 性次級代謝物的干擾。但是現有的基于GC-MS的植物非靶向代謝組學樣品預處理方法重現 性不好，通用性不強，提取過程中沒有盡可能的做到低溫提取，沒有嚴格控制操作過程中的 溫度，操作過程中的高溫易導致代謝物的結構發生變化，而且代謝物的提取不夠充分，很難 實現高通量全范圍檢測，對于性質或含量相差大的物質難以同時檢測到，另外提取選擇性 不高，脂溶性的次級代謝物未能剔除，不能避免干擾。
【發明內容】
[0005] 因此，本發明針對現有的基于GC-MS的植物非靶向代謝組學樣品預處理方法存在 的諸多問題，提出了一種通用性強、提取充分、提取選擇性高的重現性好的基于GC-MS植物 非靶向代謝組學樣品預處理方法。
[0006] 本發明的基于GC-MS植物非靶向代謝組學樣品預處理方法，其包括步驟：
[0007] 1)將植物樣本、內標物和預冷至-20~4°C的親水性有機溶劑混勻并降溫至-80~-l〇°C，然后研磨粉碎，并冰水浴超聲提取；
[0008] 2)再分別加入親脂性有機溶劑和水，混勻，并冰水浴超聲提取;于0~16°C高速離 心，取水相并揮干；
[0009] 3)加入肟化試劑，于30~45 °C進行肟化反應；
[0010] 4)最后加入衍生化試劑和正己烷，于60~80°C進行衍生化反應，得到基于GC-MS的 植物非靶向代謝組學樣品。
[0011]所述親水性有機溶劑、所述親脂性有機溶劑和水為提取液，所述親水性有機溶劑 和水用于提取植物樣本中的極性物質（需要提取的初級代謝物），所述親脂性有機溶劑用于 將非極性或弱極性物質(次級代謝物)分離出去。所述親水性有機溶劑可選用與水混溶的甲 醇、丙酮和/或乙醇。所述親水性有機溶劑體積:所述植物樣本重量為〇. 5~lmL: 100mg優選 0.6~0.75mL:100mg。所述親脂性有機溶劑可選用氯仿、乙醚和/或乙酸乙酯。所述親水性有 機溶劑:所述親脂性有機溶劑:水的體積比為1: 〇. 4~0.6:0.8~1.2，優選1:0.5:1。
[0012] 所述內標物應滿足以下條件:不是植物樣本中的成分且不與植物樣本中的代謝物 反應，能溶解于所述親水性有機溶劑，帶有活潑氫能被衍生化。所述內標物可選用氯苯丙氨 酸，氯苯丙氨酸為L-2-氯-苯丙氨酸、3，4-二氯苯丙氨酸、L-4-氯苯丙氨酸、D-4-氯苯丙氨酸 或D-2-氯苯丙氨酸，當然不排除其他類型的可被衍生化的化合物。所述內標物重量:所述植 物樣本重量為10~30yg: 100mg優選20yg: 100mg。因所述內標物用量很少，很難直接稱取，因 此在某些實施例中，所述內標物預先用所述親水性有機溶劑稀釋為溶度為0.2~0.4mg/mL 的內標物溶液，然后再準確量取并與所述植物樣本、所述親水性有機溶劑混合，量取混合用 的所述親水性有機溶劑時扣除所述內標物溶液體積，以此維持所述親水性有機溶劑總的體 積。
[0013] 所述肟化試劑為甲氧胺鹽酸鹽，所述甲氧胺鹽酸鹽重量:所述植物樣本重量為15 ~30:100優選20:100。實際處理過程中可通過添加10~20mg/mL優選15mg/mL的甲氧胺鹽酸 鹽的吡啶溶液來加入所述肟化試劑。
[0014] 所述衍生化試劑為N，0-二(三甲基硅烷）乙酰胺、二甲基二氧硅烷、二甲基二氧硅 烷、六甲基二硅胺、N-甲基-N-(三甲基硅烷)三氟乙酰胺、含1 %三甲基氯硅烷的雙(三甲基 硅烷基）三氟乙酰胺或含1 %三甲基氯硅烷的N-甲基雙（三氟乙酰胺）。所述衍生化試劑體 積:所述植物樣本重量為1~2 uL: lmg，優選1.3uL: lmg。
[0015] 步驟4)中的正己烷的功能是增加烷基化物質的溶劑性，正己烷的用量與衍生化試 劑的用量有關，所述衍生化試劑體積:正己烷體積為2~8:1優選4:1。
[0016] 本發明的一較佳實施例中，步驟1)具體操作為，將所述內標物溶液、所述植物樣本 和預冷至-20~4°C優選-10~0°C的親水性有機溶劑混合并降溫至-80~-10°C優選-60~-40°C，放入研磨機中以40~80Hz優選60Hz頻率研磨粉碎1~4min優選2min，并用冰水浴超聲 提取20~40min優選30min。
[0017] 進一步的，步驟2)具體操作為，加入所述親脂性有機溶劑后于研磨機中以15~ 30Hz優選20Hz頻率禍旋1~4min優選2min進行混勾，再加入水于研磨機中以15~30Hz優選 20Hz頻率禍旋1~4min優選2min進行混勾，然后用冰水浴超聲提取20~40min優選30min;然 后于0~4°C條件下，12000~15000rpm優選14000rpm轉速下離心5~15min優選10min。
[0018] 再進一步的，步驟3)具體操作為，在濕度控制在25~35%優選30%下，加入10~ 2 0mg/mL優選15mg/mL的甲氧胺鹽酸鹽的R比啶溶液，然后于震蕩速度為100~3 0 Or pm優選 200rpm的35~40°C優選37°C震蕩培養箱中進行肟化反應60~120min優選90min。
[0019] 步驟4)具體操作為，在濕度控制在25~35%優選30%下，加入所述衍生化試劑和 正己烷并渦旋震蕩混勻，然后于68~72°C優選70°C衍生化反應45~75min優選60min，冷卻 至室溫，得到基于GC-MS的植物非靶向代謝組學樣品。
[0020] 方法步驟可用于大多數植物葉片、莖部和或根部等的新鮮組織的預處理。對于除 含糖量極高如香蕉果肉、甘蔗等以外的含糖量<15%植物新鮮組織，尤其是含糖量<5%植 物新鮮組織，可充分提取植物組織中的初級代謝物，GC-MS分析可達到較高的重現性。
[0021] 本發明的關鍵點包括以下三點：
[0022] 1、提取液的選擇及其用量配比的選擇。為減少對后續分析的干擾，需要將數據庫 中基本上沒有的脂溶性的次級代謝物去除，比如黃酮類等親脂性物質。所述親水性有機溶 劑和水可混溶，而所述親脂性有機溶劑與一定比例混溶的所述親水性有機溶劑-水的混合 相不互溶，所述親水性有機溶劑-水和所述親脂性有機溶劑混合后可分為親水的水相和親 脂的有機相兩層，水相為溶解有極性物質（需要提取的代謝物)的所述親水性有機溶劑-水， 有機相為溶解有親脂性物質的所述親脂性有機溶劑。提取液以甲醇、水、氯仿組合為例，體 積比為1:1的甲醇-水極性較大，能夠更多地提取極性物質，而氯仿能夠溶解非極性或弱極 性的親脂性物質；甲醇、水、氯仿的體積比為2: 2:1時，甲醇-水與氯仿不互溶，溶液分層，上 層水相為溶解有極性物質的甲醇-水，下層有機相為溶解有非極性或弱極性物質的氯仿，取 上層清液即可用于后續處理再進行GC-MS代謝組學分析。具體操作時先加甲醇，能提取到絕 大部分的代謝物，再加不能或不容易提出親水性物質而易提取親脂性的物質的氯仿，最后 加水使水相和有機相分層，可達到較佳的提取分離的效果。
[0023] 2、操作過程中保證低溫。研磨機研磨過程中會產生大量熱量，故研磨前可將植物 樣本放置低溫(-20~_80°C)環境中2min左右。水浴超聲過程中，溫度會升高，可將超聲清洗 儀溫度設至最低(〇°C)，并且加入冰袋，保證整個超聲過程溫度在冰水浴的溫度。高速離心 可保證植物的組織殘渣沉淀完全，同時高速離心也會產生大量熱量，離心溫度可設為0~4 °C。上述各控制溫度的操作可有效避免植物樣本溫度過高而導致代謝物的結構發生變化。 [0024] 3、衍生化過程中的濕度要求嚴格。衍生化試劑遇水立即分解，故加入肟化試劑、衍 生化試劑、正己烷的過程中，實驗室濕度控制在30%左右，且不能超過35%，否則將導致衍 生化不充分，最終導致檢測到的代謝物數量較少。
[0025]另外，采用加有小鋼珠的離心管作為植物樣本處理容器，放到研磨機里研磨，可使 植物組織破壞充分，再經超聲提取，能夠充分提取代謝物。
[0026]本發明的積極進步效果在于:所述基于GC-MS的植物非靶向代謝組學樣品預處理 方法是在低溫條件下對植物樣本的代謝物進行充分提取，可降低高溫對代謝物的結構影 響；并且有效去除的脂溶性的次級代謝物，可避免脂溶性的次級代謝物對氣相色譜柱的污 染而干擾后續分析；另外嚴格控制衍生化過程實驗室濕度以保證充分衍生化。采用本發明 的預處理方法處理的樣品進行GC-MS植物代謝組學分析可獲得較大的代謝物峰數據，而且 樣品重現性較好，可普遍適用于各種植物組織樣品的提取，提高代謝組學中大樣品量的研 究效率。另外本發明的預處理方法操作簡單快捷，所用試劑毒性較小。上述積極進步效果對 促進植物代謝組學研究、建立統一的提取方法標準、加強相關研究者之間進行數據交流具 有重要意義。
【附圖說明】
[0027]圖1A~1F為實例1的茶樹葉片的總粒子流色譜圖。
[0028]圖2A~2F為實例2的西瓜莖的總粒子流色譜圖。
[0029]圖3A~3F為實例3的花椒根的總粒子流色譜圖。
【具體實施方式】
[0030]以下結合具體實施例對本發明的基于GC-MS植物非靶向代謝組學樣品預處理方法 作進一步的說明。
[0031]實施例1茶樹葉片的預處理(含糖量1~5%)
[0032] 采用以下步驟對新鮮茶樹葉片進行預處理并作GC-MS檢測，重復6次（1A~1F)平行 實驗。
[0033]預處理具體步驟為：
[0034] 1)精確稱取茶樹葉片60mg，放入1.5mL的離心管中；依次加入兩顆小鋼珠、360yL 4 °C的甲醇和40yL內標物甲醇溶液(L-2-氯-苯丙氨酸，0.3mg/mL)，在-80 °C冰箱中放置2min; 放入研磨機中研磨(60Hz，2min)，從研磨機中取出，超聲提取30min;
[0035] 2)加入200yL氯仿，放入研磨機中渦旋（20Hz，2min)，加入400yL水，放入研磨機中 渦旋（20Hz，2min)，超聲提取30min;
[0036] 3)低溫離心1011^11(14000印111，4°(：)，取200~70(^1^上清液，裝入玻璃衍生瓶中，用 快速離心濃縮儀揮干；
[0037] 4)在濕度控制在30%下，向玻璃衍生瓶中加入80yL甲氧胺鹽酸吡啶溶液（15mg/ mL)，渦旋震蕩2min后，于震蕩培養箱中37°C肟化反應90min;
[0038] 5)在濕度控制在30%下，取出后再加入80yL雙(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(含1% 三甲基氯硅烷)和20yL正己烷，渦旋震蕩2min后，于70°C衍生化反應60min后取出，室溫放置 30min，進行GC-MS代謝組學分析。
[0039]檢測結果分析：
[0040] 本實施例的預處理步驟中，提取液甲醇、水、氯仿體積比為2:2:1，通過甲醇和水有 效地提取極性的初級代謝物，并通過氯仿將脂溶性的次級代謝物去除，從而避免對氣相色 譜柱的污染和對后續分析的干擾。操作過程中保證低溫，有效避免高溫導致代謝物的結構 發生變化。而且衍生化過程中的濕度嚴格控制在30 %左右，保證充分衍生化。
[0041] 6次平行預處理后測得的茶樹葉片代謝物的總粒子流色譜圖（Total Particles Chromatogram, TIC)如圖1A~IF所示;茶樹葉片代謝物種類數量的檢測結果如表1所示。檢 測結果顯示內標峰以及已知的假陽性峰(包括噪音、柱流失和衍生物化試劑峰)均從數據矩 陣中去除，并進行去冗余和峰合并后，6次平行實驗均能定性出270種左右的代謝物，其中有 206種代謝物在6次平行實驗中均有檢測到，具有較高重現性。
[0042]表1茶樹葉片的代謝物種類數量檢測結果
[0043]
[0044] 所以使得檢測結果中代謝物數量較多且穩定，樣品重現性好。
[0045] 實施例二西瓜莖的預處理(含糖量2%左右）
[0046] 采用以下步驟對新鮮西瓜莖進行預處理并作GC-MS檢測，重復6次(2A~2F)平行實 驗。
[0047]預處理具體步驟為：
[0048] 1)精確稱取西瓜莖60mg，放入1.5mL的離心管中；依次加入兩顆小鋼珠、360yL-20 °C的乙醇和40yL內標物乙醇溶液(L-4-氯苯丙氨酸，0.3mg/mL)，在-20 °C冰箱中放置2min; 放入研磨機中研磨(60Hz，2min)，從研磨機中取出，超聲提取30min;
[0049] 2)加入200yL乙醚，放入研磨機中渦旋（20Hz，2min)，加入400yL水，放入研磨機中 渦旋（20Hz，2min)，超聲提取30min;
[0050] 3)低溫離心10min(14000rpm，16°C)，取200~700yL下層清液，裝入玻璃衍生瓶中， 用快速離心濃縮儀揮干；
[0051 ] 4)在濕度控制在30%下，向玻璃衍生瓶中加入80yL甲氧胺鹽酸吡啶溶液（15mg/ mL)，渦旋震蕩2min后，于震蕩培養箱中37°C肟化反應90min;
[0052] 5)在濕度控制在30%下，取出后再加入80yL N-甲基雙（三氟乙酰胺）（含1 %三甲 基氯硅烷）和20yL正己燒，禍旋震蕩2min后，于70°C衍生化反應60min后取出，室溫放置 30min，進行GC-MS代謝組學分析。
[0053]檢測結果分析：
[0054] 本實施例的預處理步驟中，提取液乙醇、水、乙醚體積比為2:2:1，通過乙醇和水充 分地提取極性的初級代謝物，并通過乙醚將脂溶性的次級代謝物去除，從而避免對氣相色 譜柱的污染和對后續分析的干擾。操作過程中保證低溫，有效避免高溫導致代謝物的結構 發生變化。而且衍生化過程中的濕度嚴格控制在30 %左右，保證充分衍生化。
[0055] 6次平行預處理后測得的西瓜莖代謝物的總粒子流色譜圖（Total Particles Chromatogram，TIC)如圖2A~2F所示；西瓜莖代謝物種類數量的檢測結果如表1所示。檢測 結果顯示內標峰以及已知的假陽性峰(包括噪音、柱流失和衍生物化試劑峰)均從數據矩陣 中去除，并進行去冗余和峰合并后，6次平行實驗均能定性出200種左右的代謝物，其中有 160種代謝物在6次平行實驗中均有檢測到，具有較高重現性。
[0056] 表2西瓜莖代謝物種類數量檢測結果
[0057]
[0058]實施例三花椒根的預處理(含糖量1 %左右）
[0059] 采用以下步驟對新鮮花椒根進行預處理并作GC-MS檢測，重復6次平行實驗(3A~ 3F)〇
[0060] 預處理具體步驟為：
[0061 ] 1)精確稱取花椒根60mg，放入1.5mL的離心管中；依次加入兩顆小鋼珠、360yL-10 °(：的丙酮和4(^1^內標物丙酮溶液（3,4-二氯苯丙氨酸，0.311^/11^)，在-10°(：冰箱中放置 2min;放入研磨機中研磨(60Hz，2min)，從研磨機中取出，超聲提取30min;
[0062] 2)加入200yL乙酸乙酯，放入研磨機中渦旋（20Hz，2min)，加入400yL水，放入研磨 機中渦旋(20Hz，2min)，超聲提取30min;
[0063] 3)低溫離心10min(14000rpm，10°C)，取200~700μ下層清液，裝入玻璃衍生瓶中， 用快速離心濃縮儀揮干；
[0064] 4)在濕度控制在30%下，向玻璃衍生瓶中加入80yL甲氧胺鹽酸吡啶溶液（15mg/ mL)，渦旋震蕩2min后，于震蕩培養箱中37°C肟化反應90min;
[0065] 5)在濕度控制在30%下，取出后再加入80yL N-甲基-N-(三甲基硅烷)三氟乙酰胺 和20yL正己烷，渦旋震蕩2min后，于70°C衍生化反應60min后取出，室溫放置30min，進行GC-MS代謝組學分析。
[0066]檢測結果分析：
[0067] 本實施例的預處理步驟中，提取液丙酮、水、乙酸乙酯體積比為2:2:1，通過丙酮和 水充分地提取極性的初級代謝物，并通過乙酸乙酯將脂溶性的次級代謝物去除，從而避免 對氣相色譜柱的污染和對后續分析的干擾。操作過程中保證低溫，有效避免高溫導致代謝 物的結構發生變化。而且衍生化過程中的濕度嚴格控制在30%左右，保證充分衍生化。 [0068] 6次平行預處理后測得的花椒根代謝物的總粒子流色譜圖（Total Particles Chromatogram, TIC)如圖3A~3F所示;花椒根代謝物種類數量的檢測結果如表1所示。檢測 結果顯示內標峰以及已知的假陽性峰(包括噪音、柱流失和衍生物化試劑峰)均從數據矩陣 中去除，并進行去冗余和峰合并后，6次平行實驗均能定性出270種左右的代謝物，其中有 211種代謝物在6次平行實驗中均有檢測到，具有較高重現性。
[0069] 表3花椒根代謝物種類數量檢測結果
[0070]
[0071] 由上述三個實施例的檢測結果可知，本發明的預處理方法可充分提取新鮮植物組 織(包括葉片、莖部和根部）中的代謝物，可檢測到較多種類的代謝物，代謝物種類和相對含 量均具有較高的重現性，可適用于除含糖量極高的果肉（如梨果肉、西瓜果肉、甜瓜果肉等） 以外的植物鮮樣的GC-MS植物非靶向代謝組學樣品的處理。
【主權項】
1. 一種基于GC-MS的植物非靶向代謝組學樣品預處理方法，其特征在于包括如下步驟： 1) 將植物樣本、內標物和預冷至-20~4°C的親水性有機溶劑混勻并降溫至-80~-10 °C，然后研磨粉碎，并冰水浴超聲提取； 2) 再分別加入親脂性有機溶劑和水，混勻，并冰水浴超聲提取;于0~16°C高速離心，取 水相并揮干； 3) 加入肟化試劑，于30~45 °C進行肟化反應； 4) 最后加入衍生化試劑和正己烷，于60~80°C進行衍生化反應，得到基于GC-MS的植物 非靶向代謝組學樣品。2. 如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1)中，所述親水性有機溶劑為甲醇、丙酮 或乙醇，所述親水性有機溶劑體積：所述植物樣本重量為0.5~lmL : 100mg優選0.6~ 0.75mL: lOOmg;所述內標物為氯苯丙氨酸，所述內標物重量:所述植物樣本重量為10~30μ g: 1 OOmg 優選 20yg: 1 OOmg。3. 如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述氯苯丙氨酸為L-2-氯-苯丙氨酸、3，4-二 氯苯丙氨酸、L-4-氯苯丙氨酸、D-4-氯苯丙氨酸或D-2-氯苯丙氨酸。4. 如權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟1)中，所述內標物預先用所述親水性有 機溶劑稀釋為溶度為〇. 2~0.4mg/mL優選0.3mg/mL的內標物溶液，然后再準確量取并與所 述植物樣本、所述親水性有機溶劑混合，量取混合用的所述親水性有機溶劑時扣除所述內 標物溶液體積，以此維持所述親水性有機溶劑總的體積;步驟1)具體操作為，將所述內標物 溶液、所述植物樣本和預冷至-20~4°C優選-10~0°C的親水性有機溶劑混合并降溫至-80 ~-l〇°C優選-60~-40°C，放入研磨機中以40~80Hz優選60Hz頻率研磨粉碎1~4min優選 2min，并用冰水浴超聲提取20~40min優選30min。5. 如權利要求2~4任一項所述的方法，其特征在于，步驟2)中，所述親脂性有機溶劑為 氯仿、乙醚和/或乙酸乙酯，所述親水性有機溶劑:所述親脂性有機溶劑：水的體積比為1: 0.4~0.6:0.8~1.2,優選1:0.5:1。6. 如權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟2)具體操作為，加入所述親脂性有機溶 劑后于研磨機中以15~30Hz優選20Hz頻率禍旋1~4min優選2min進行混勾，再加入水于研 磨機中以15~30Hz優選20Hz頻率渦旋1~4min優選2min進行混勻，然后用冰水浴超聲提取 20~40min優選30min;然后于0~4°C條件下，12000~15000rpm優選14000rpm轉速下離心5 ~15min 優選 10min〇7. 如權利要求6所述的方法，其特征在于，步驟3)中，所述肟化試劑為甲氧胺鹽酸鹽，所 述甲氧胺鹽酸鹽重量:所述植物樣本重量為1.5~3:100優選2:100;步驟3)具體操作為，在 濕度控制在25~35%優選30%下，加入10~20mg/mL優選15mg/mL的甲氧胺鹽酸鹽的吡啶溶 液，然后于震蕩速度為100~300rpm優選200rpm的35~40°C優選37°C震蕩培養箱中進行肟 化反應60~120min優選90min。8. 如權利要求7所述的方法，其特征在于，步驟4)中，所述衍生化試劑為N，0-二(三甲基 硅烷）乙酰胺、二甲基二氧硅烷、二甲基二氧硅烷、六甲基二硅胺、N-甲基-N-(三甲基硅烷） 三氟乙酰胺、含1 %三甲基氯硅烷的雙(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺或含1%三甲基氯硅烷的 N-甲基雙（三氟乙酰胺）；所述衍生化試劑體積：所述植物樣本重量為1~2uL: lmg，優選 1.3uL: lmg;所述衍生化試劑體積:正己烷體積為2~8:1優選4:1;步驟4)具體操作為，在濕 度控制在25~35%優選30%下，加入所述衍生化試劑和正己烷并渦旋震蕩混勻，然后于68 ~72°C優選70°C衍生化反應45~75min優選60min，冷卻至室溫，得到基于GC-MS的植物非靶 向代謝組學樣品。9. 如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述植物樣本為植物葉片、莖部或根部的新 鮮組織。10. 如權利要求9所述的方法，其特征在于，所述新鮮組織的含糖量< 15 %，優選< 5 %。
【文檔編號】G01N30/06GK105866299SQ201610196406
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年3月31日
【發明人】白嫻, 舒烈波, 彭章曉, 楊卓, 郭峻杰
【申請人】上海青鹿投資有限公司