一種半定量檢測蛋白質溶液濃度的方法
【專利摘要】一種半定量檢測蛋白質溶液濃度的方法，包括如下步驟：配置不同濃度的標準蛋白質溶液，所述標準蛋白質溶液濃度為0.1?10μg/μL；分別將不同濃度的標準蛋白質溶液、待測樣品滴加在濾紙上，放置≥10秒，其中，兩者的滴加量相同；用染色液對上述濾紙進行染色，染色時間≥2秒，待濾紙吸飽染色液；染色后1小時之內用水沖洗染色后的濾紙，直到露出濾紙上的顯色斑點；通過待測樣品與不同濃度的標準蛋白質溶液在濾紙上顯色斑點的顏色對比來判定待測樣品中蛋白質濃度的半定量結果。本發明的半定量檢測方法所需樣品量少、靈敏度可達0.1μg/μL，且具有快速、簡單、不需要昂貴的儀器等優點。
【專利說明】
一種半定量檢測蛋白質溶液濃度的方法
技術領域
[0001] 本發明屬于蛋白質技術領域，具體涉及一種半定量檢測蛋白質溶液濃度的方法。
【背景技術】
[0002] 蛋白質溶液濃度檢測是一種常用的生物學檢測方法。目前主要的檢測方法有如下 幾種:第一:檢測蛋白質溶液在280nm處的吸光值（即A280數值）。一般情況下，A280 = 1時，蛋 白質溶液的濃度為1μg/μL，其原理是蛋白質分子中常含有酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸等苯環 結構，在紫外280nm波長處有最大吸收峰，其光吸收值與蛋白質濃度成正比，故可以用280nm 波長吸收值大小來測定蛋白質濃度。該方法使用紫外分光光度計，普通的紫外分光光度計 操作復雜，而且只能檢測?〇〇μ1以上樣品，而檢測微量樣品（比如?μL溶液樣品）的紫外分光 光度計價格昂貴，比如美國賽默飛(Thermo Fisher)Nanodrop 2000型號的紫外分光光度計 價格在10萬元以上。因此，該方法存在如下缺陷：必須配備紫外分光光度計，且普通的紫外 分光光度計需要樣品量大，而高端的紫外分光光度計則非常昂貴。
[0003] 第二，檢測溶液中蛋白質的質量，再結合溶液體積計算蛋白質溶液的濃度。其原理 是將一定濃度的標準蛋白質溶液與待測樣品一起進行聚丙烯酰胺凝膠分析，然后使用軟件 對比標準蛋白質溶液與待測樣品在凝膠上的蛋白質質量，獲得待測樣品蛋白質質量，再結 合溶液體積獲得蛋白質溶液的濃度。但該方法需要進行聚丙烯酰胺凝膠電泳，步驟繁多，整 個實驗需要3個小時以上，花費時間比較長。
[0004]第三，考馬斯亮蘭法(Bradford法)檢測蛋白質濃度，其原理是將標準蛋白質溶液 與待測樣品分別加入Bradf ord檢測液中，混勻，檢測混合溶液在595nm處的吸光值（即A595 數值），作標準蛋白質溶液與吸光值相關性的標準曲線。然后，根據標準曲線推導蛋白質溶 液濃度與吸光值相關性的公式，將待測樣品吸光值導入公式計算出樣品蛋白質溶液的濃 度。但該方法在檢測微量樣品（例如小于50yL的蛋白質溶液)時必須配備酶標儀，設備比較 昂貴，比如美國博騰(BioTek) Epoch型號的酶標儀價格在30萬元以上。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的在于提供一種半定量檢測蛋白質溶液濃度的方法，該方法具有快 速、簡單、成本低、樣品量小、靈敏度高等優點。
[0006] 為了實現上述目的，本發明的主要技術方案如下：
[0007] 本發明基于如下理論和方法實現:染色液中的考馬斯亮藍和蛋白質中的芳香族氨 基酸殘基結合，當它與蛋白質結合后，蛋白質和色素的結合物為藍色，其顏色的深淺與蛋白 質含量成正比，而且在室溫下蛋白質和色素的結合物比較穩定（1小時內）。因此，考馬斯亮 藍可用于蛋白質的定量測定。
[0008] 本發明將蛋白質吸附到濾紙上后，加入染色液，在濾紙上形成蛋白質和色素的結 合物，然后使用自來水沖洗濾紙。由于蛋白質和色素的結合物分子量較大，難以沖洗。因此， 自來水沖洗濾紙后，濾紙上大部分染色液被去除，留下蛋白質和色素的結合物顯色，可以從 顯示顏色的深淺判斷蛋白質溶液濃度范圍。
[0009] -種半定量檢測蛋白質溶液濃度的方法，其包括如下步驟：
[0010] 1)配置不同濃度的標準蛋白質溶液，所述標準蛋白質溶液濃度為〇.i-i〇yg/yL;分 別將至少兩種不同濃度的標準蛋白質溶液、待測樣品滴加在濾紙上，放置2 10秒，其中，不 同濃度的標準蛋白質溶液和待測樣品的滴加量相同；
[0011] 2)用染色液對上述濾紙進行染色，染色時間2 2秒，待濾紙吸飽染色液;染色后1小 時之內用水沖洗染色后的濾紙，直到露出濾紙上的顯色斑點；
[0012] 3)通過待測樣品與不同濃度的標準蛋白質溶液在濾紙上顯色斑點的顏色對比來 判定待測樣品中蛋白質濃度的半定量結果。
[0013] 進一步，步驟1)中，所述標準蛋白質溶液和所述待測樣品的滴加量均2 UiL。
[0014] 步驟2)中，所述染色液包括0.01-0.1 %考馬斯亮藍R-250，0.01-0.1 %考馬斯亮藍 G-250，5-40 % 酒精，5-40 % 冰醋酸。
[0015] 又，所述濾紙為慢速定量濾紙、中速定量濾紙、快速定量濾紙、慢速定性濾紙、中速 定性濾紙或快速定性濾紙。
[0016] 優選的，所述濾紙為慢速定性濾紙。
[0017] 本發明通過將蛋白質溶液中蛋白質吸附在濾紙上后，利用染色液使不同濃度的蛋 白質溶液在濾紙上的顯色深淺不同，再與標準蛋白質溶液在濾紙上的顯色比對來確定待測 樣品中蛋白質濃度范圍，如果待測樣品的顯色深淺處于兩個不同濃度的標準蛋白質溶液的 顯色之間，則待測樣品的蛋白質濃度處于該標準蛋白質溶液的兩個不同濃度之間。
[0018] 本發明的有益效果：
[0019] 本發明所提供的檢測方法需要的樣品量少，IyL樣品量即可進行半定量檢測;靈敏 度尚，具體可以達到〇. 1μg/μL，可檢測微克級的蛋白質;檢測結果的準確性不受標準蛋白質 溶液的緩沖液種類的影響;成本低，不需要昂貴的儀器和設備即可操作。
[0020] 本發明所需的標準蛋白質溶液配置完成后，可以儲存于-20°C冰箱中，備用；染色 液儲存于室溫中，備用。因此，本發明通過事先配置好的標準蛋白質溶液和染色液用于該半 定量檢測過程中，實驗步驟少，操作簡單，整個過程只需要2分鐘，并且樣品數量的增加不會 導致實驗時間的大量增加，大大節約了時間。
【附圖說明】
[0021 ]圖1為本發明實施例1不同類型濾紙上的檢測結果圖。
[0022]圖2為本發明實施例2不同緩沖液配置標準蛋白質溶液后的檢測結果圖。
[0023]圖3本發明實施例3的檢測結果圖。
[0024]圖4為對比例2中BSA標準蛋白質溶液和待測樣品的聚丙烯酰胺凝膠圖。
[0025]圖5為對比例3中BSA標準蛋白質溶液的A595吸光值和濃度相關標準直線圖。
【具體實施方式】
[0026] 下面結合實施例和附圖對本發明做進一步說明。
[0027] 下列實施例中如無特殊說明，均為《分子克隆實驗指南（第三版）》（科學出版社， 2002年)所記載的方法。
[0028] 以下實施例中，化學試劑和實驗材料從杭州南天生物科技有限公司購買。使用美 國賽默飛（Thermo Fisher)Nanodrop2000型號的紫外分光光度計檢測蛋白質溶液濃度中 A280數值，檢測蛋白質溶液中蛋白質含量的聚丙烯酰胺凝膠電泳槽和電泳儀為美國伯樂 (BioRad)Mini Protean 3 Cell型號電泳槽和Powerpac型號電泳儀，使用美國伯樂 (BioRad)QuentityOne凝膠分析軟件檢測和對比蛋白質溶液中蛋白質含量。聚丙稀酰胺凝 膠染色和脫色使用華城潤華TY-80A/S型號水平搖床。移液槍為德國Eppendorf公司的 Research Plus系列。
[0029] 實施例1.檢測的蛋白質溶液濃度范圍和最佳濾紙類型
[0030] 本實施例使用慢速、中速、快速的定量濾紙和定性濾紙（購自GE公司的Wha tman牌 濾紙)進行試驗，檢測濾紙對蛋白質的吸附力以及自來水沖洗后的檢測效果。
[0031] 配置不同濃度的標準蛋白質溶液，檢測本發明可以檢測到的蛋白質溶液濃度范 圍，本實施例中使用模式蛋白質牛血清白蛋白（BSA)為標準蛋白質溶液。為了檢測不同濾紙 對蛋白質的吸附力，蛋白質溶液的體積從實驗室可操作的最低量IyL逐漸遞增到3yL。
[0032] 具體試驗步驟如下：
[0033] 1)配置標準蛋白質溶液牛血清白蛋白BSA，濃度設置為0.1 ygAiL、2yg/yL、5yg/yL。
[0034] 2)對濾紙進行編號：慢速定量濾紙（1號）、中速定量濾紙（2號）、快速定量濾紙（3 號）、慢速定性濾紙(4號）、中速定性濾紙(5號）、快速定性濾紙(6號）。
[0035] 3)使用I-IOyL量程的移液槍分別將lyL、2yL、3yL的步驟1)配置的不同濃度BSA標 準蛋白質溶液加在1-6號濾紙上，放置10秒以上，讓蛋白質充分吸附在濾紙上。
[0036] 4)將1-6號濾紙放置在培養皿中，加入2mL染色液對濾紙進行染色5秒以上，濾紙吸 飽染色液即可，對染色液的量，沒有要求;只要在1個小時內進行后續實驗，對結果不會產生 影響。
[0037] 本實施例中染色液包括0.05 %考馬斯亮藍R-250，0.05 %考馬斯亮藍G-250，20 % 酒精，10 %冰醋酸。
[0038] 5)自來水沖洗濾紙，直至可以看到蛋白質溶液的顯色斑點即藍色圓點，具體結果 如圖1所示，對比不同濾紙上圓點顏色，結合BSA標準蛋白質溶液濃度進行分析。
[0039] 圖1中，每張濾紙上第1行從左至右分別為：lyL、2yL、3yL的5yg/yL BSA標準蛋白質 溶液添加位置;每張濾紙上第2行從左至右分別為:3yL、2yL、IyL的2yg/yL BSA標準蛋白質 溶液添加位置;每張濾紙上第3行從左至右分別為：lyL、2yL、3yL的0.1 ygAxL的BSA標準蛋白 質溶液添加位置。
[0040] 從圖1可以看出：1 -6號濾紙上，IyL、2yL、3yL的5yg/yL標準蛋白質溶液，IyL、2yL、3 yL的2yg/yL標準蛋白質溶液，I yL、2yL、3yL的0.1 yg/yL標準蛋白質溶液在1 -6號不同濾紙上 均能顯色（其中，圖1中各顯色實際為藍色，轉換為黑白照片后，導致其中1-6號濾紙上第三 行IyL、2yL、3yL的0. 1μg/μL標準蛋白質溶液的顯色不明顯），說明1 -6號濾紙均可用于本發 明提供的半定量檢測方法中。
[0041 ]同時，從圖1可以看出：當蛋白質溶液體積為I_3yL、濃度為0. 1μg/μL時，溶液中蛋 白質的質量為0.1-0.3yg，蛋白質溶液在濾紙上顯示的藍色圓點顏色很淡，說明0. UigAiL濃 度的蛋白質溶液是本發明檢測方法的檢測下限，靈敏度較高。
[0042] 從圖1中4號慢速定性濾紙上可以看出，IyL的5yg/yL、2yg/yL、0. 1μg/μL的蛋白質 溶液顯色斑點處的藍色深淺不同，足夠區分不同的濃度，所以，本發明所提供的檢測方法中 所需樣品量僅為UiL即可，從節約樣品的角度出發，可使用體積量為UiL作為最佳檢測體積。 [0043]當蛋白質溶液體積為3yL，濃度為5yg/yL時，溶液中蛋白質的量最大達到15yg，此 時，只有慢速定性濾紙(4號）仍然可以顯示藍色，說明慢速定性濾紙沒有飽和吸附蛋白質， 存在大量蛋白質-色素復合體。其他濾紙在蛋白質溶液體積2此，濃度為5ygAxL的情況下顯 示白色，說明這些濾紙已經飽和吸附蛋白質，只有少量染色液可以吸附在表面上，存在少量 蛋白質-色素復合體。該結果說明，慢速定性濾紙(4號）的蛋白質吸附能力最強，其原因是定 性濾紙中的灰分含量(0.13% )遠大于定量濾紙(0.0009% )，這部分灰分可以吸附蛋白質。 而慢速濾紙中纖維之間的空隙小于中速和快速濾紙，可以更好地固定蛋白質-染料復合物， 使其不被自來水洗脫。因此，慢速定性濾紙可作為本發明最佳的蛋白質溶液載體。
[0044] 實施例2.檢測的蛋白質溶液濃度不受溶液緩沖液的影響
[0045] 蛋白質溶液的緩沖液需要根據蛋白質的不同用途進行配置，尤其是在操作蛋白質 過程中需要使用不同的緩沖液。本實施例通過實驗驗證不同緩沖液對本發明檢測方法的影 響。具體試驗步驟如下：
[0046] 1)配置6種不同常用蛋白質緩沖液：酸鹽緩沖液（IOmM Na2HP〇4, IOOmM NaCl， pH7 · 4)、膜蛋白緩沖液（IOmM Na2HP〇4，IOOmM NaCl，1 %DDM，10 % 甘油，pH8 · 0)、Histag純化 洗脫液（50mM Na2HP〇4,500mM NaCl，500mM咪唑，pH8.0)、變性蛋白緩沖液（IOOmM Na2HP〇4, IOOmM NaCl，8M尿素，pH7.0)、GSTtag純化洗脫液（50mM Tris-Cl，IOmM還原型谷胱甘肽， pH8.0)、Tris緩沖液（IOOmM Tris-Cl，IOOmM NaCl，pH8.0)。可以為其他緩沖液，不止限于上 述所示緩沖液。
[0047] 2)使用步驟1)的不同蛋白質緩沖液分別配置濃度為2ygAxL的BSA標準蛋白質溶 液，得到酸鹽緩沖液配置的BSA標準蛋白質溶液、膜蛋白緩沖液配置的BSA標準蛋白質溶液、 Histag純化洗脫液配置的BSA標準蛋白質溶液、變性蛋白緩沖液配置的BSA標準蛋白質溶 液、GSTtag純化洗脫液配置的BSA標準蛋白質溶液、Tris緩沖液配置的BSA標準蛋白質溶液。 [0048] 3)使用I-IOyL量程的移液槍分別將IyL 6種緩沖液配置的BSA標準蛋白質溶液加 在慢速定性濾紙上，放置10秒以上，讓蛋白質和濾紙充分吸附。在濾紙上，酸鹽緩沖液配置 的BSA標準蛋白質溶液添加位置編號為1、膜蛋白緩沖液配置的BSA標準蛋白質溶液添加位 置編號為2、Histag純化洗脫液配置的BSA標準蛋白質溶液添加位置編號為3、變性蛋白緩沖 液配置的BSA標準蛋白質溶液添加位置編號為4、GSTtag純化洗脫液配置的BSA標準蛋白質 溶液添加位置編號為5、Tris緩沖液配置的BSA標準蛋白質溶液添加位置編號為6。
[0049] 4)將濾紙放置在培養皿中，加入2ml染色液對濾紙進行染色5秒以上，濾紙吸飽染 色液即可，對染色液的量，沒有要求；只要在1個小時內進行后續實驗，對結果不會產生影 響。
[0050] 本實施例中染色液包括0.1 %考馬斯亮藍R-250，0.1 %考馬斯亮藍G-250，30 %酒 精，20 %冰醋酸。
[0051] 5)自來水沖洗濾紙，直至可以看到蛋白質溶液的的顯色斑點即藍色圓點，具體結 果如圖2,對比濾紙上不同顯色斑點顏色深淺，進行分析。
[0052]由圖2可看出：濾紙上6個樣品的顯色斑點上的顏色相近，說明不同緩沖液中的蛋 白質濃度相同，其原因是蛋白質可以特異性地與色素結合，而緩沖液中的成分不會影響這 種結合。因此，本發明的檢測結果的準確性不受標準蛋白質溶液的緩沖液種類的影響。
[0053]實施例3.檢測純化蛋白質溶液樣品的濃度
[0054]蛋白質純化步驟根據QIAGEN公司的Hi stag蛋白純化手冊進行，最終獲得蛋白質純 化溶液(緩沖液為實施例2中的把8七38純化洗脫液(5〇1111似2即〇4,50〇111]\1似(：1，50〇111]\1咪唑， PH8.0))，以此為樣品進行檢測。具體試驗步驟如下：
[0055] 1)配置牛血清白蛋白BSA的標準蛋白質溶液，濃度設置為IygAiL、5yg/yL、10yg/y L0
[0056] 2)使用I-IOyL量程的移液槍將IyL上述不同濃度的BSA標準蛋白質溶液和IyL待測 樣品溶液加在同一慢速定性濾紙上，放置10秒以上，讓蛋白質和濾紙充分吸附。
[0057] 其中，IyL濃度為IOygAiL的BSA標準蛋白質溶液添加位置編號為I，IyL濃度為5yg/ yL的BSA標準蛋白質溶液添加位置編號為2，IyL濃度為1μg/μL的BSA標準蛋白質溶液添加位 置編號為3, IyL待測樣品溶液添加位置編號為4。
[0058] 3)將濾紙放置在培養皿中，加入2mL染色液對該濾紙進行染色5秒以上，濾紙吸飽 染色液即可，對染色液的量，沒有要求；只要在1個小時內進行后續實驗，對結果不會產生影 響。
[0059] 本實施例中染色液包括0.01 %考馬斯亮藍R-250，0.01 %考馬斯亮藍G-250，5 %酒 精，5%冰醋酸。
[0060] 4)自來水沖洗步驟3)染色后的濾紙，直至可以看到蛋白質溶液的顯色斑點即藍色 圓點，如圖3所示。
[0061] 5)對比濾紙上待測樣品與不同濃度的BSA標準蛋白質溶液的圓點顏色的深淺，進 行分析：
[0062] 由圖3可知：濾紙上待測樣品添加位置4的顏色深淺在BSA標準蛋白質溶液添加位 置2和3的顏色之間，這說明待測樣品中的蛋白質濃度在1μg/μL~5yg/yL之間。
[0063] 為了驗證本發明檢測方法的準確性，使用常用的3個方法對待測樣品進行定量分 析，具體參見對比例1、2、3。
[0064]對比例1.利用A280吸光值檢測純化蛋白質溶液樣品的濃度
[0065] 對比例1使用美國賽默飛（Thermo Fisher)Nanodrop 2000型號的紫外分光光度計 檢測蛋白質溶液A280吸光值，具體試驗步驟如下：
[0066] 1)使用I -1 OyL量程的移液槍將IyL體積的Hi s tag純化洗脫液（50mM Na2HP04， 500mM NaCl，500mM咪唑，pH8.0)加入儀器中，進行空白校正。
[0067] 2)使用I-IOyL量程的移液槍將IyL純化蛋白質溶液樣品（即實施例3中的待測樣 品）加入儀器中，讀取A280吸光值=1.5，說明樣品中蛋白質濃度為1.6yg/yL。
[0068] 該對比例1結果與實施例3中的檢測結果相符。
[0069] 對比例2.利用聚丙烯酰胺凝膠分析純化蛋白質溶液樣品的濃度
[0070] 本對比例2比較BSA標準蛋白質溶液和待測樣品在聚丙烯酰胺凝膠上的量，計算待 測樣品蛋白質質量，從而獲得蛋白質溶液的濃度。具體試驗步驟如下：
[0071] 1)配置834的標準蛋白質溶液，濃度設置為0.2以8/^1^、0.5以8/^1^、1以8/^1^、2以8/^1^、4 yg/yL、8ygAiL。將80yL不同濃度的BSA標準蛋白質溶液以及實施例3中的待測樣品分別加入 1.5ml離心管中，然后每管加入20yL的5 X蛋白質上樣緩沖液(250mMTris-HCl，10% (W/V) SDS，O · 5 % (W/V)BPB，50 % (V/V)甘油，5 % (W/V)，β-巰基乙醇（2-ME)，pH6 · 8)。將離心管95 °C 加熱15分鐘，然后10000轉/分鐘離心10分鐘，取上清IOyL作為上樣液。
[0072 ] 2)制12 %蛋白質聚丙稀酰胺膠，將B SA標準蛋白質溶液、待測樣品和蛋白質Mar ker 分別加入12 %聚丙烯酰胺膠凝膠加樣孔，將凝膠放入含有I X PAGE (25m M Tr i s，25OmM GIycine，0.1 % (W/V) SDS)電泳液的電泳槽中，以120V電壓電泳1個小時。
[0073] 3)將凝膠取出，放入含有染色液的染色槽中，然后，將染色槽放在水平搖床上染色 2個小時。
[0074] 4)將凝膠取出，自來水沖洗后放入含有脫色液的染色槽中，然后，將脫色槽放在水 平搖床上染色3個小時。
[0075] 5)將凝膠置于美國伯樂(BioRad)凝膠成像系統上進行拍照，具體結果如圖4所示， 利用BioRadQuentityOne凝膠分析軟件對比分析，獲得樣品的濃度為1.5yg/yL。
[0076] 該對比例2結果與實施例3、對比例1的檢測結果相符。
[0077]對比例3.利用Bradford法檢測純化蛋白質溶液樣品的濃度
[0078] 本對比例3比較BSA標準蛋白質和待測樣品分別與Bradford檢測液混合后的A595 吸光值，作標準蛋白質溶液濃度的標準曲線，根據標準曲線公式，計算出樣品蛋白質溶液濃 度。具體試驗步驟如下：
[0079] 1)配置BSA的標準蛋白質溶液，濃度設置為0 · 06ygAiL、0 · 08ygAiL、0 · IygAiL。將實 施例3中的待測樣品溶液稀釋到1倍，1 /5倍，I /10倍，1 /20倍，1 /30倍。
[0080] 2)用移液槍分別取50yL不同濃度的BSA標準蛋白質溶液和待測樣品，加入酶標板 中。
[0081 ] 3)加入200yL Bradford檢測液（購自上海生工生物技術有限公司），混勻，靜置 IOmin0
[0082] 4)將酶標板置入酶標儀(美國博騰(BioTek)公司的Epoch酶標儀）中，檢測溶液的 A595吸光度，獲得標準蛋白質溶液和待測樣品的A595吸光值數值，具體數值參見表1。
[0083] 5)根據BSA標準蛋白質溶液的A595吸光值和濃度，利用Excel軟件制作標準曲線， 計算標準曲線公式，具體參見圖5。
[0084] 6)分析表1中的結果，待測樣品溶液稀釋到1倍、1/5倍、1/10倍的值不在OygAiL-0.1 ygAiL BSA的標準蛋白質溶液的范圍內，只能夠取待測樣品溶液稀釋到1/20倍、1/30倍 的數值。將待測樣品稀釋到1/20倍、1/30倍的數值代入公式，并乘以稀釋倍數，計算獲得濃 度分別為1.63以8/^1^、1.56以8/^1^，取平均值，最終計算待測樣品中蛋白質濃度為1.595以 8/^ L0
[0085] 本對比例3結果與實施例3、對比例1、對比例2的檢測結果相符。
[0086] 表 1
【主權項】
1. 一種半定量檢測蛋白質溶液濃度的方法，其包括如下步驟： 1) 配置至少兩種不同濃度的標準蛋白質溶液，所述標準蛋白質溶液濃度為〇. i-i〇yg/y L;分別將不同濃度的標準蛋白質溶液、待測樣品滴加在濾紙上，放置2 10秒，其中，標準蛋 白質溶液和待測樣品的滴加量相同； 2) 用染色液對上述濾紙進行染色，染色時間2 2秒，待濾紙吸飽染色液;染色后1小時之 內用水沖洗染色后的濾紙，直到露出濾紙上的顯色斑點； 3) 通過待測樣品與不同濃度的標準蛋白質溶液在濾紙上顯色斑點的顏色對比來判定 待測樣品中蛋白質濃度的半定量結果。2. 根據權利要求1所述的半定量檢測蛋白質溶液濃度的方法，其特征在于，步驟1)中， 所述標準蛋白質溶液和所述待測樣品的滴加量均2 lyL。3. 根據權利要求1所述的半定量檢測蛋白質溶液濃度的方法，其特征在于，步驟2)中， 所述染色液包括0.01-0.1 %考馬斯亮藍R-250，0.01-0.1 %考馬斯亮藍G-250，5-40%酒精， 5-40 %冰醋酸。4. 根據權利要求1所述的半定量檢測蛋白質溶液濃度的方法，其特征在于，所述濾紙為 慢速定量濾紙、中速定量濾紙、快速定量濾紙、慢速定性濾紙、中速定性濾紙或快速定性濾 紙。5. 根據權利要求1或4所述的半定量檢測蛋白質溶液濃度的方法，其特征在于，所述濾 紙為慢速定性濾紙。
【文檔編號】G01N21/78GK105842238SQ201610156683
【公開日】2016年8月10日
【申請日】2016年3月18日
【發明人】王新其, 方軍
【申請人】上海市農業科學院