野生大豆標準樣品的制備方法
【專利摘要】本發明屬于植物檢疫標準樣品技術研發領域，特別涉及大豆標準樣品制備方法。野生大豆標準樣品的制備方法，主要包括：確定專家組，標準樣品來源，標準樣品擴繁，標準樣品篩選，標準樣品生產工藝，標準樣品均勻性檢驗，標準樣品穩定性檢驗和標準樣品儲存，以田間采集的野生大豆種子為原料，通過隔離種植、擴繁、篩選、制備、均勻性檢驗、穩定性檢驗、包裝和儲存等程序制備成具有代表性的野生大豆標準樣品，為植物檢驗檢疫工作提供鑒定依據，為國家物種資源保護提供實物參考。
【專利說明】
野生大豆標準樣品的制備方法
技術領域
[0001]本發明屬于植物檢疫標準樣品技術研發領域，特別涉及大豆標準樣品制備方法。
【背景技術】
[0002]野生大豆(Glycineso ja)，是栽培大豆的原始祖先種。自然條件下生長的野生大豆在遺傳方面從未受到人為選擇的影響，因此很多豐富的功能基因并沒有因為人為的選擇而丟失，這些基因很可能是大豆生存中多迫切需要的關鍵性基因。野生大豆資源中的高蛋白、多抗、廣適應性和繁殖系數高的優良材料可以直接用于栽培大豆的優質、抗病、高產育種研究，野生大豆還是大豆系統發育和演化研究最重要的載體之一，是大豆生產可持續發展的重要遺傳基礎。
[0003]我國擁有世界上已知野生大豆資源的90%以上，逾6000種。然而隨著我國改革開放的深入，國際貿易交流的擴大，我國野生大豆資源流失嚴重，美國曾公布，至2002年6月30日，從中國引進大豆資源4452份，包括野生大豆168份。而中國官方記載同意提供的僅2177份，并且野生大豆并沒有被列入對外提供的品種資源目錄。與此同時，科學家、農學家和育種學家們在全球搜集和交流有價值的大豆種質，包括栽培品種與野生大豆種質等，使得國外一些國家作物基因庫中保存的大豆資源遠遠超過我國，其中很多原產于我國的大豆資源已經成為國外的專利產品并以低價傾銷我國，使我國從世界上最大的大豆出口國變為最大的進口國，給我國大豆產業造成巨大的壓力，同時也給我國大豆種質資源的保護帶來挑戰。
[0004]由于野生大豆在外觀形態上差異很大，有的百粒重達80克，大小象一枚一角錢的硬幣，有的百粒重不足I克，只有芝麻粒大小;顏色有黃色、綠色、黑色;形狀有圓形、橢圓形。這些外部形態各異的大豆，有的根本就不像“豆”。這給我國檢疫機構或實驗室進行野生大豆鑒定時帶來困難，影響檢疫鑒定結果。當前國際上尚無統一的野生大豆標準樣品用于有關部門進行檢疫鑒定。所以，為加強生物物種資源管理，防止生物物種資源流失，研制在形態上典型一致，具有代表性的野生大豆物種材料標準樣品具有重要意義。
【發明內容】
[0005]本發明的目的是提供野生大豆物種材料標準樣品制備方法，促進植物檢疫實驗室檢疫鑒定工作，提高實驗室檢測水平，防止生物物種資源流失。
[0006]本發明為實現上述目的所采用的技術方案是:野生大豆標準樣品的制備方法:第一步確定專家組:專家組人數為5名及以上從事大豆物種鑒定工作的專家；
第二步標準樣品來源:野生大豆物種材料來源于田間采集，種子經專家鑒定及種植驗證后擴繁，收獲后將野生大豆種子進行比較，把形態上相對一致的混合在一起，確認野生大豆真實性；
第三步標準樣品擴繁:根據當地的氣候條件，選擇不同的播種時期。首先將土壤進行消毒處理，然后把消毒好的土壤裝在大花盆中，再把花盆整齊擺放到隔離網室里，并做好標識;在野生大豆的整個生長季都對其生長情況進行觀察和記錄，并拍攝成圖片，準備作為標準樣品技術資料中的一部分，當野生大豆成熟后，進行采收并晾曬，將晾曬好的野生大豆裝在干燥器中室溫下保存，準備用于標準樣品的篩選和制作；
第四步標準樣品篩選:在進行篩選前，為確保生物安全，首先要對種子進行滅活處理，將經滅活處理的種子倒在白磁盤中進行初篩，初篩過程主要挑選籽粒飽滿、大小適中的種子，將挑選出的種子準備進行細篩，細篩過程要關注種子個體間的形態鑒定特征的細微差別，將經過細篩挑選出的種子分別放到白色磨口瓶內，準備做均勻性和穩定性試驗；
第五步標準樣品生產工藝:將野生大豆物種材料標準樣品鑲嵌在樹脂中，制成水晶標本。
[0007]第六步標準樣品均勻性檢驗:
均勻性檢驗:均勻性檢驗分兩步完成，一是“瓶內”均勻性檢驗，二是“瓶間”均勻性檢驗:
①“瓶內”均勻性檢驗:從上述細篩后的野生大豆中隨機選取100粒進行均勻性檢驗，將100粒野生大豆分成5組，每組20粒，把5組野生大豆種子分別寄給5位專家進行鑒定，要求專家首先對20粒該種子進行形態鑒定，判定其是否是野生大豆，然后給出野生大豆鑒定特征，根據這些鑒定特征，比較野生大豆每個個體間是否存在差異，存在的差異是否會對鑒定結果產生影響，給出野生大豆個體間均勻性結論，最后，專家對100粒野生大豆的鑒定結果沒有疑義，鑒定結論均為野生大豆，每一位專家均認定野生大豆個體間存在的細微差異對該種子形態鑒定結果不會產生影響，野生大豆個體間在形態上是均勻的；
②“瓶間”均勻性檢驗:隨機選取20個已經加工制作完成并帶有外包裝的野生大豆標準樣品，首先肉眼觀察野生大豆的外部形態，并將其與正常的沒有進行包裝處理的野生大豆進行比對，確定鑲嵌在樹脂中的野生大豆與正常沒有進行包裝處理的野生大豆在外部形態上是否存在差異，其次通過解剖鏡進行觀察，確定被鑲嵌在樹脂中的野生大豆與正常裸露的野生大豆在解剖鏡下外部形態是否存在差異，如存在差異確定這些差異對野生大豆的鑒定結果是否會產生影響，通過對20個包裝好的野生大豆標準樣品進行肉眼和解剖鏡下觀察，在外部形態上，鑲嵌在水晶中的野生大豆與正常裸露的野生大豆幾乎沒有差異，說明外部包裝材料對野生大豆的形態鑒定結果沒有影響，野生大豆“瓶間”個體也是均勻的。
[0008]第七步標準樣品穩定性檢驗
驗證野生大豆穩定性的方法需要用肉眼或放大鏡、解剖鏡進行觀察，觀察不同保存條件、不同“瓶間”野生大豆的形態特征是否發生變化，發生的變化是否影響結果鑒定，保存條件的設計充分考慮到標準樣品在儲存、運輸和使用過程中可能遇到的各種情況，設計出光照、溫度、潮濕度、振動等不同條件下，經過一定的時間間隔，對野生大豆的形態均不會產生影響，說明該標準樣品穩定性良好；
第八步標準樣品儲存野生大豆物種材料標準樣品的包裝采用可以長期保存并耐磨損、透光性好的樹脂材料，因此野生大豆物種材料標準樣品保存條件:常溫下保存，防潮，避免陽光直射，有效期7年。
[0009]所述第三步標準樣品擴繁:另外，從該批野生大豆中挑選籽粒飽滿的種子裝在信封中做好標識，作為野生大豆擴繁的種子資源。
[0010]所述第四步標準樣品篩選:滅活處理工藝是將野生大豆種子放置到50°C的恒溫箱中，48h后進行種子發芽試驗，確認種子已經失去活力。
[0011 ] 所述第五步標準樣品生產工藝:具體加工過程如下:
(1)制作模具，將亮漆天然樹脂合成清漆均勻噴涂在模具表面；
(2)清潔模具后裝好外模；
(3)將聚丙烯樹脂加入納米無塵填充料聚苯乙烯:
(4)加入固化劑T31、促進劑N-環己基-2-苯并噻唑次磺酰胺、消泡劑有機硅氧烷、透明母料等配料，按主料:固化劑:促進劑等=100:79:1配比，并攪均勻;所述樹脂加入配料時，一定要注意比例，比例不正常將導致開裂或粘手，因樹脂凝固時間短，一定要將加入配料的樹脂一次性用完，否則無法再次使用。
[0012](5)將樹脂倒入模具后，搖動模具，使模具內樹脂流動均勻，均勻后將模具放正，防止樹脂凝固過程中變形，在樹脂凝固過程中請勿移動模具；
(6)將種子放入樹脂內；
(7)樹脂完全凝固后，脫去模具；
(8)將產品打磨，拋光。
[0013]本發明與同類技術相比較，具有突顯著的效果:本發明首次將我國生物物種保護資源野生大豆鑲嵌在水晶樹脂中，制備成標準樣品。其優點有三，一樹脂原料是呈液體狀的，具有非常好的流動性，能夠充分充斥樣品表面，而干固成膜后不再溶于水，保證了樣品的穩定性;樹脂透明度極高，便于觀察里面標準樣品的細微結構，保證了樣品的可視性及完整性;樹脂具有阻燃、耐老化、無毒、抗氧化、耐熱、絕緣等優良性能，保證了樣品的安全性及長期有效性。二本發明野生大豆標準樣品的制備方法工藝簡單，降低了標準樣品的成本，確保了標準樣品的可普及性;三本發明野生大豆標準樣品，消除了各檢測機構由于使用不同參照物而造成的結果差異，保證了鑒定結果的溯源性，對確保野生大豆形態鑒定結果的準確性和可靠性具有重要作用，對填補國內外物種鑒定標準樣品研制的空白，規范我國生物物種鑒定工作具有重要意義。
【具體實施方式】
[0014]下面結合具體實施例對本發明作進一步詳細說明，但本發明并不局限于具體實施例。
[0015]實施例1
第一步在大豆物種鑒定領域中，挑選5位技術專家，專家分別從事大豆物種鑒定工作10年及以上，并技術職稱為副高級及以上，組成野生大豆評定專家組；
第二步標準樣品來源:將田間采集的野生大豆種子經專家鑒定后，在生長季進行隔離種植，根據整個植株及花果特征對其進行進一步驗證，確認野生大豆的真實性。
[0016]第三步標準樣品擴繁:土壤消毒處理?裝入花盆中?放入隔離網室?植入野生大豆種子?觀察、記錄?收獲、瞭曬?保存;根據當地的氣候條件，選擇不同的播種時期。首先將土壤進行消毒處理，這樣可以殺死土壤中的其它雜草籽和病原菌，然后把消毒好的土壤裝在大花盆中，再把花盆整齊擺放到隔離網室里，并做好標識。在野生大豆的整個生長季都對其生長情況進行觀察和記錄，并拍攝成圖片，準備作為標準樣品技術資料中的一部分。當野生大豆成熟后，進行采收并晾曬。將晾曬好的野生大豆裝在干燥器中室溫下保存，準備用于標準樣品的篩選和制作。另外，從該批野生大豆中挑選籽粒飽滿的種子裝在信封中做好標識，作為野生大豆擴繁的種子資源
第四步標準樣品篩選:首先對野生大豆種子進行滅活處理。將種子放置到50°C的恒溫箱中，48h后進行種子發芽試驗，確認種子已經失去活力。將經滅活處理的野生大豆種子倒在白磁盤中進行初篩。初篩過程主要挑選籽粒飽滿、大小適中的種子，將挑選出的種子準備進行細篩。細篩過程要關注種子個體間的形態鑒定特征的細微差別。將經過細篩挑選出的種子分別放到白色磨口瓶內，準備做均勻性和穩定性試驗。
[0017]第五步標準樣品均勻性檢驗:
均勻性檢驗:從上述細篩后的野生大豆中隨機選取100粒，分成5組，每組20粒，把5組野生大豆分別寄給5位專家進行鑒定。專家認定個體間存在的細微差異對野生大豆形態鑒定結果沒有影響，個體間在形態上是均勻的。
[0018]第六步標準樣品生產工藝:
(I)制作模具，將亮漆天然樹脂合成清漆均勻噴涂在模具表面。
[0019](2)清潔模具后裝好外模。
[0020](3)將聚丙烯樹脂加入納米無塵填充料聚苯乙烯，可根據要求填入有色漿及其它填充料。
[0021](4)加入固化劑環氧樹脂、促進劑N-環己基-2-苯并噻唑次磺酰胺、消泡劑有機硅氧烷、透明母料等配料并攪均勻。樹脂加入配料時，一定要注意比例，比例不正常將導致開裂或粘手，因樹脂凝固時間短，一定要將加入配料的樹脂一次性用完，否則無法再次使用。
[0022](5)將樹脂倒入模具后，搖動模具，使模具內樹脂流動均勻，均勻后將模具放正，防止樹脂凝固過程中變形。在樹脂凝固過程中請勿移動模具。
[0023](6)將長方體模具按8等分挖槽;將野生大豆物種材料各I粒放入樹脂內。
[0024](7 )樹脂完全凝固后，脫去模具。
[0025](8)將產品打磨，拋光。
[0026]第七步標準樣品穩定性檢驗
隨即選取20個包裝制作完成的野生大豆標準樣品，分別通過肉眼或使用放大鏡、解剖鏡對其外部形態進行觀察，并將其與沒有包裝處理的樣品進行比對，二者在外部形態上沒有差異，說明此樣品穩定性良好。
[0027]第八步標準樣品儲存
野生大豆物種材料標準樣品的包裝采用可以長期保存并耐磨損、透光性好的樹脂材料，因此野生大豆物種材料標準樣品保存條件:常溫下保存，防潮，避免陽光直射，有效期10年。
【主權項】
1.野生大豆標準樣品的制備方法，其特征是: 第一步確定專家組:專家組人數為5名及以上從事大豆物種鑒定工作的專家； 第二步標準樣品來源:野生大豆物種材料來源于田間采集，種子經專家鑒定及種植驗證后擴繁，收獲后將野生大豆種子進行比較，把形態上相對一致的混合在一起，確認野生大豆真實性； 第三步標準樣品擴繁:根據當地的氣候條件，選擇不同的播種時期；首先將土壤進行消毒處理，然后把消毒好的土壤裝在大花盆中，再把花盆整齊擺放到隔離網室里，并做好標識;在野生大豆的整個生長季都對其生長情況進行觀察和記錄，并拍攝成圖片，準備作為標準樣品技術資料中的一部分，當野生大豆成熟后，進行采收并晾曬，將晾曬好的野生大豆裝在干燥器中室溫下保存，準備用于標準樣品的篩選和制作； 第四步標準樣品篩選:在進行篩選前，為確保生物安全，首先要對種子進行滅活處理，將經滅活處理的種子倒在白磁盤中進行初篩，初篩過程主要挑選籽粒飽滿、大小適中的種子，將挑選出的種子準備進行細篩，細篩過程要關注種子個體間的形態鑒定特征的細微差別，將經過細篩挑選出的種子分別放到白色磨口瓶內，準備做均勻性和穩定性試驗； 第五步標準樣品生產工藝:將野生大豆物種材料標準樣品鑲嵌在樹脂中，制成水晶標本； 第六步標準樣品均勻性檢驗: 均勻性檢驗:均勻性檢驗分兩步完成，一是“瓶內”均勻性檢驗，二是“瓶間”均勻性檢驗: ①“瓶內”均勻性檢驗:從上述細篩后的野生大豆中隨機選取100粒進行均勻性檢驗，將100粒野生大豆分成5組，每組20粒，把5組野生大豆種子分別寄給5位專家進行鑒定，要求專家首先對20粒該種子進行形態鑒定，判定其是否是野生大豆，然后給出野生大豆鑒定特征，根據這些鑒定特征，比較野生大豆每個個體間是否存在差異，存在的差異是否會對鑒定結果產生影響，給出野生大豆個體間均勻性結論，最后，專家對100粒野生大豆的鑒定結果沒有疑義，鑒定結論均為野生大豆，每一位專家均認定野生大豆個體間存在的細微差異對該種子形態鑒定結果不會產生影響，野生大豆個體間在形態上是均勻的； ②“瓶間”均勻性檢驗:隨機選取20個已經加工制作完成并帶有外包裝的野生大豆標準樣品，首先肉眼觀察野生大豆的外部形態，并將其與正常的沒有進行包裝處理的野生大豆進行比對，確定鑲嵌在樹脂中的野生大豆與正常沒有進行包裝處理的野生大豆在外部形態上是否存在差異，其次通過解剖鏡進行觀察，確定被鑲嵌在樹脂中的野生大豆與正常裸露的野生大豆在解剖鏡下外部形態是否存在差異，如存在差異確定這些差異對野生大豆的鑒定結果是否會產生影響，通過對20個包裝好的野生大豆標準樣品進行肉眼和解剖鏡下觀察，在外部形態上，鑲嵌在水晶中的野生大豆與正常裸露的野生大豆幾乎沒有差異，說明外部包裝材料對野生大豆的形態鑒定結果沒有影響，野生大豆“瓶間”個體也是均勻的； 第七步標準樣品穩定性檢驗 驗證野生大豆穩定性的方法需要用肉眼或放大鏡、解剖鏡進行觀察，觀察不同保存條件、不同“瓶間”野生大豆的形態特征是否發生變化，發生的變化是否影響結果鑒定，保存條件的設計充分考慮到標準樣品在儲存、運輸和使用過程中可能遇到的各種情況，設計出光照、溫度、潮濕度、振動等不同條件下，經過一定的時間間隔，對野生大豆的形態均不會產生影響，說明該標準樣品穩定性良好； 第八步標準樣品儲存 野生大豆物種材料標準樣品的包裝采用可以長期保存并耐磨損、透光性好的樹脂材料，因此野生大豆物種材料標準樣品保存條件:常溫下保存，防潮，避免陽光直射，有效期10年。2.根據權利要求1所述的野生大豆標準樣品的制備方法，其特征是:所述第三步標準樣品擴繁:另外，從該批野生大豆中挑選籽粒飽滿的種子裝在信封中做好標識，作為野生大豆擴繁的種子資源。3.根據權利要求1所述的野生大豆標準樣品的制備方法，其特征是:所述第四步標準樣品篩選:滅活處理工藝是將野生大豆種子放置到50°C的恒溫箱中，48h后進行種子發芽試驗，確認種子已經失去活力。4.根據權利要求1所述的野生大豆標準樣品的制備方法，其特征是:所述第五步標準樣品生產工藝:具體加工過程如下: (1)制作模具，將亮漆天然樹脂合成清漆均勻噴涂在模具表面； (2)清潔模具后裝好外模； (3)將聚丙烯樹脂加入納米無塵填充料聚苯乙烯 (4)加入固化劑T31、促進劑N-環己基-2-苯并噻唑次磺酰胺、消泡劑有機硅氧烷、透明母料等配料，按主料:固化劑:促進劑等=100:79:1配比，并攪均勻； (5)將樹脂倒入模具后，搖動模具，使模具內樹脂流動均勻，均勻后將模具放正，防止樹脂凝固過程中變形，在樹脂凝固過程中請勿移動模具； (6)將種子放入樹脂內； (7 )樹脂完全凝固后，脫去模具； (8)將產品打磨，拋光。5.根據權利要求4所述的野生大豆標準樣品的制備方法，其特征是:所述第六步標準樣品生產工藝中第(4)步:所述樹脂加入配料時，主料與配料比例是，主料:固化劑:促進劑等=100:79:1,比例不正常將導致開裂或粘手，因樹脂凝固時間短，一定要將加入配料的樹脂一次性用完，否則無法再次使用。
【文檔編號】G01N1/36GK105842024SQ201610162534
【公開日】2016年8月10日
【申請日】2016年3月22日
【發明人】王有福, 劉卉秋, 胡強, 李鑫
【申請人】王有福