一種蔬菜中丁蟲腈殘留量的gc-ms-ms測定方法
【專利摘要】本發明公開了一種蔬菜中丁蟲腈殘留量的GC?MS?MS測定方法，本方法將改進的QuEChERS樣品前處理方法和GC?MS?MS定性定量檢測方法相結合來測定蔬菜中丁蟲腈殘留量。使用含有1%甲苯的丙酮、乙酸乙酯同體積比混合溶液代替乙腈作為提取液提取蔬菜中殘留的丁蟲腈，d?SPE提取管凈化后氣相色譜?三重四級桿串聯質譜（GC?MS?MS）檢測。本方法平均回收率為81.3％～93.9%，平均相對標準偏差（RSD）為2.96％～8.20％%，定量限0.01mg/kg。具有簡便、快速、靈敏度高、重復性好、定性定量準確的優點。能滿足美國、日本、歐盟等國家對相應食品安全檢測的0.01mg/kg殘留限量，即“一律標準”的技術要求，為保障我國人民食品安全及對外出口貿易健康發展提供有力的技術支撐。
【專利說明】
-種蔬菜中Τ蟲臘殘留量的GC-MS-MS測定方法
技術領域
[0001] 本發明設及一種蔬菜中下蟲臘殘留量的GC-MS-MS測定方法，更具體地設及一種采 用改進的Q址畑ERS方法對樣品進行前處理結合氣相色譜-Ξ重四級桿串聯質譜（GC-MS- MS)定性定量測定蔬菜中殘留的下蟲臘含量的方法，屬于農藥殘留量的測定技術領域。
【背景技術】
[0002] 下蟲臘（Flufiprole)，又名下締氣蟲臘，化學名稱為3-氯基-5-甲代締丙基氨基- 1-(2,6-二氯-4-Ξ氣甲基苯基）-4-Ξ氣甲基亞橫酷基化挫，是在氣蟲臘的基礎上開發出 的活性高、殺蟲譜廣且對人畜及水生生物安全的新型殺蟲劑。CAS登錄號為704886-18-0,分 子量為491.23,結構式為：
下蟲臘是大連瑞澤農藥股份有限公司自主創制的全新化合物，也是國內唯一由農藥生 產企業創制的具有國際知識產權的苯基化挫類新型廣譜殺蟲劑，并且獲得專利，專利證號 (國際專利號:口口7^獅3/00343;中國專利號:02128312.5)。殺蟲機理新穎、獨特、活性高，主 要是阻礙昆蟲丫-氨基下酸控制的氯化物代謝，具有胃毒、觸殺及一定的內吸作用，對菜青 蟲、小菜蛾、懼蟲、粘蟲、褐飛風、葉甲等具有很高的活性，〇.8mg/kg下有的就達到100%的致 死率。可應用于水稻、棉花、蔬菜、玉米、果樹等作物上防治鱗翅目、銷翅目、半翅目等的幼蟲 及成蟲，如水稻二、Ξ化懼，棉鈴蟲、椿象、小菜蛾、菜青蟲潛葉蛹等均有高水平防效，持效期 長，且對作物無藥害。
[0003] 經中國農藥南方創制中屯、浙江基地室內生測試驗，結果顯示5%下蟲臘乳油對二化 懼LC50為0.07478，與銳勁特的活性化050為0.06725)相當，是另一對照藥劑20%立挫憐乳油 的56.91倍;對小菜蛾LD50為0.03362，與銳勁特的活性化D50為0.03536)相當，是另一對照 藥劑5%抑太保乳油的88.10倍。
[0004] 經化學工業農藥安全評價中屯、試驗，下蟲臘5%乳油急性經口LD50為雄性大鼠〉 4640mg/kg，雌性大鼠>4640 mg/kg，經皮LD50雌、雄大鼠均>2150 mg/kg，對眼睛為重度刺 激，對皮膚具有弱致敏性，對蠶的LC50巧000 mg/L，對蜜蜂高毒，鶴譜急性經口雌雄均>2000 mg/kg，斑馬魚LC50(96小時）19.62 mg/L為低毒；原藥大鼠經口、經皮試驗為低毒，皮刺、眼 刺試驗為無刺激性，豚鼠致敏試驗為弱致敏物，Ames試驗及遺傳毒性試驗為陰性。生物活性 測定試驗和毒性試驗結果表明，下蟲臘對鱗翅目等多種害蟲具有較高的活性，特別是對水 稻、蔬菜等方面的害蟲的活性顯現了很高的防治效果，該劑對魚的毒性為低毒級。
[0005] 如E化ERS(如ick、Easy、化eap、Effective、Rugged、Safe)，是近年來國際上最新發 展起來的一種用于農產品檢測的快速樣品前處理技術，由美國農業部Anastassiades教授 等于2003年開發的。原理是利用吸附劑填料與基質中的雜質相互作用，吸附雜質從而達到 除雜凈化的目的。傳統的QuECh邸S方法的步驟可W簡單歸納為：（1)樣品粉碎；（2)單一溶 劑乙臘提取分離；（3)加入MgS〇4等鹽類除水；（4)加入乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)等吸附劑 除雜；（5)上清液進行GC-MS、LC-MS檢測。Q址化邸S方法有W下優勢：（1)回收率高，對大多 數農藥品種的回收率大于85%; (2)分析速度快，能在6小時內完成70-80個樣品的處理；（4) 溶劑使用量少，污染小；巧)操作簡便，無需良好訓練和較高技能便可很好地完成；（6)樣品 制備過程中使用很少的玻璃器皿，裝置簡單。傳統的Q址化ERS方法也有兩點不足之處：（1) 僅使用乙臘作為提取溶液，因此，提取液不能直接進行氣相色譜或氣相色譜-質譜分析；（2) 使用GCB吸附色素的同時也吸附了部分具有環狀結構的農藥，因此，具有環狀結構的農藥回 收率偏低。
[0006] 目前關于下蟲臘的檢測方法尚無國家標準頒布。近幾年，有學者利用GC-ECD和GC- MS技術對蔬菜稻谷等基質中的下蟲臘進行了檢測，取得了不錯的效果。其中在2009年，曹維 強等利用GC-MS檢測渡菜中的下蟲臘，定量限為0.05mg/kg;2014年，田宏哲等利用GC-ECD檢 測玉米中的下蟲臘，定量限為0.0 lmg/kg。但是，W上兩種方法有其局限性，GC-MS法的靈敏 度比較低，無法滿足美國、日本、歐盟等國家對相應食品安全檢測的O.Olmg/kg殘留限量，即 "一律標準"的技術要求;GC-EC的去的靈敏度雖然較高，但GC法抗干擾能力差，易出現假陽性 的缺點無法克服。另外，利用W上兩種方法，前處理都比較繁瑣，不能夠完成對于大批量樣 品的快速檢測工作，因此，一種簡便、快速、靈敏度高、重復性好、定性定量準確的方法亟待 開發出來。
【發明內容】
[0007] 本發明的目的在于克服上述現有技術的不足之處，而提供一種簡便、快速、靈敏度 高、重復性好、定性定量準確的蔬菜中下蟲臘殘留量的測定方法。
[0008] 為實現W上目的，本發明所采用的技術方案是：一種蔬菜中下蟲臘殘留量的GC- MS-MS測定方法，包括如下步驟： (1) 提取及凈化，準確稱取5. Og氯化鋼和1.Og乙酸鋼于lOOmL離屯、管中，再稱取10.00 g (精確至0.01 g)均質試樣，加入50 mL提取液(加入1%甲苯的丙酬、乙酸乙醋同體積比混合 溶液），勻漿機高速勻漿提取1 min，4000r/min離屯、5min，取上清液lOmL于d-Sro凈化管 (15mL Tube，900mg MgS04/450mg PSA/300mg C18/50mg GCB)中，充分震蕩 1 min后靜置 30min，靜置完成后，取適量上清液過濾置于進樣瓶中待測； (2) 標準工作溶液的配制，將不含下蟲臘的同種類基質空白樣品按上述步驟（1)處理， 配制成至少3個濃度的下蟲臘系列混合標準工作溶液； (3) 測定和結果計算，將步驟(2)中的各濃度梯度的標準工作溶液進行GC-MS-MS測 定，W標準工作溶液的色譜峰面積對其相應濃度進行回歸分析，得到基質標準工作曲線;在 相同條件下將步驟（1)中凈化后的樣品液進行GC-MS-MS測定，測得樣品液中下蟲臘的色譜 峰面積，代入基質標準曲線，得到樣品液中下蟲臘含量，然后根據樣品液所代表試樣的質量 計算得到樣品中下蟲臘殘留量。
[0009]測得樣品溶液中未知組分的保留時間（RT)分別與標準溶液在同一色譜柱上的保 留時間（RT)相比較，如果樣品溶液中某組分的保留時間與標準溶液保留時間相差在± 0.05min內，并且該峰同時具有定量離子對和定性離子對的可認定為該農藥。若上述兩個條 件不能同時滿足，則判斷不含該種農藥。
[0010] 分析條件為：色譜柱：TR-5MS毛細管色譜柱，柱長30m，內徑0.25mm，膜厚0.25皿;進 樣口溫度250°C ;載氣：氮氣（> 99. 999%);不分流模式進樣，進樣量：1化;恒流模式，流速 1.OmL/min;升溫程序:初溫60°C，保持2min，W每分鐘15°C的速度升至150°C，然后W每分鐘 6°C的速度升至280°C，保持lOmin;傳輸線溫度:250°C ;電離模式:EI模式，能量70eV;離子 源溫度230°(：;掃描方式:二級離子監測（5觀）模式;定量離子對為:403~238.77，碰撞電壓 25eV，定性離子對為:421~314.98，碰撞電壓2〇6乂。
[0011] 試樣中被測農藥殘留量W質量分數ω計，單位W毫克每千克(mg/kg)表示，按下式 計算。
[0012] P--標準溶液中農藥的質量濃度，單位為毫克每升(mg/L); A--樣品溶液中被測農藥的峰面積； As--農藥標準溶液中被測農藥的峰面積； V一一提取溶劑總體積，單位為毫升(mL); m-一試樣的質量，單位為克(g)。 計算結果保留兩位有效數字，當結果大于Img/kg時，保留兩位有效數字。
[0013] 本發明所具有的有益效果： 1、本發明采用改進的如E化ERS方法對樣品進行前處理，樣品前處理提取和凈化步驟使 用含有1%甲苯的丙酬、乙酸乙醋同體積比混合溶液代替乙臘作為提取液，直接提取凈化后 去上清液直接進樣而不需要溶劑轉換，克服了乙臘不能直接進GC-MS-MS的缺陷，同時克服 了具環狀結構的農藥回收率偏低的問題。
[0014] 2、本發明采用氣相色譜-Ξ重四級桿串聯質譜（GC-MS-MS)定性定量測定蔬菜中 殘留的下蟲臘含量，平均回收率為81.3%~93.9%，平均相對標準偏差（RSD)為3.42%~ 8.20 % %，靈敏度高、重復性好。
[001引 3、本發明檢出限O.OOlmg/kg，定量檢出限O.Olmg/kg，能夠簡便、快速、定性定量準 確的蔬菜中下蟲臘殘留量，能滿足美國、日本、歐盟等國家對相應食品安全檢測的O.Olmg/ kg殘留限量，即"一律標準"的技術要求，將為保障我國人民食品安全及對外出口貿易健康 發展提供有力的技術支撐。。
【附圖說明】
[0016]圖1下蟲臘標準溶液的GC-MS-MS二級掃描色譜圖； 圖2為不含下蟲臘的芹菜樣品的GC-MS-MS二級掃描色譜圖； 圖3為添加濃度為O.Olyg/mL的下蟲臘芹菜基質GC-MS-MS二級掃描色譜圖； 圖4為W不含下蟲臘的芹菜空白樣品為基質配制的下蟲臘標準工作曲線。 具體實施例
[0017]下列實施例是對發明的進一步說明，但本發明不僅限于此。
[001引實施例中使用的儀器： Trace 1310型氣相色譜-TSQ 8000型Ξ重四極桿串聯質譜儀（美國化ermo公司）； Sartorius電子天平（千分之一，北京賽多利斯天平有限公司）；IKA T18 Basic均質器(德 國IKA公司）;MS 3基本型滿旋混合器（IKA，Germany)。
[0019]農藥標準品： 標準品購自天津農業部環境質量監督檢驗測試中屯、（質量濃度均為lOOug/mL)。丙酬、 甲苯(分析純，國藥集團化學試劑有限公司），乙酸乙醋（分析純，天津市廣成化學試劑有限 公司），乙酸鋼、氯化鋼(分析純，天津博迪化工股份有限公司）。
[0020] 單標儲備液的配制：各取ImL標準品置于lOmL容量瓶中，用丙酬定容至刻度，配成 質量濃度為10 mg/L的單標儲備液，于一20°c冰箱中膽存備用。
[0021] 基質匹配標準溶液：用空白樣品基質溶液配成不同濃度的基質混合標準溶液，用 于制作標準工作曲線，不同種類蔬菜制得不同種類的基質校正工作溶液。基質匹配標準溶 液現配現用。供試蔬菜:芹菜、黃瓜和番茄，購自本地超市。
[0022] 實施例1芹菜中下蟲臘殘留量的GC-MS-MS檢測： (1) 提取及凈化:準確稱取5. Og氯化鋼和1.Og乙酸鋼于lOOmL離屯、管中，再稱取10.00 g (精確至0.01 g)均質芹菜試樣，加入50 mL提取液（1%甲苯的丙酬、乙酸乙醋同體積比混合 溶液），勻漿機高速勻漿提取1 min，4000r/min離屯、5min，取上清液lOmL于d-Sro凈化管 (15mL Tube，900mg MgS04/450mg PSA/300mg C18/50mg GCB)中，充分震蕩 1 min后靜置 30min，靜置完成后，取適量上清液過濾置于進樣瓶中待測； (2) 標準工作溶液的配制:將不含下蟲臘的同種類基質空白芹菜樣品按上述步驟（1) 處理，配制成0.01、〇. 02、0.05、0.1、0.2、0.5mg/L基質標準工作溶液濃度的下蟲臘系列混合 標準工作溶液； (3) 測定和結果計算:將步驟(2)中的各濃度梯度的標準工作溶液進行GC-MS-MS測 定，W標準工作溶液的色譜峰面積對其相應濃度進行回歸分析，得到基質標準工作曲線;在 相同條件下將步驟（1)中凈化后的樣品液進行GC-MS-MS測定，測得樣品液中下蟲臘的色譜 峰面積，代入基質標準曲線，得到樣品液中下蟲臘含量，然后根據樣品液所代表試樣的質量 計算得到樣品中下蟲臘殘留量。
[0023] 測得樣品溶液中未知組分的保留時間（RT)分別與標準溶液在同一色譜柱上的保 留時間（RT)相比較，如果樣品溶液中某組分的保留時間與標準溶液保留時間相差在± 0.05min內，并且該峰同時具有定量離子對和定性離子對的可認定為該農藥。若上述兩個條 件不能同時滿足，則判斷不含該種農藥。
[0024] 分析條件為:色譜柱:TR-5MS毛細管色譜柱，柱長30m，內徑0.25mm，膜厚0.25μπι;進 樣口溫度250°C ;載氣：氮氣（> 99. 999%);不分流模式進樣，進樣量：1化;恒流模式，流速 1.OmL/min;升溫程序:初溫60°C，保持2min，W每分鐘15°C的速度升至150°C，然后W每分鐘 6°C的速度升至280°C，保持lOmin;傳輸線溫度:250°C ;電離模式:EI模式，能量70eV;離子 源溫度230°C;掃描方式:二級離子監測（SRM)模式;定量離子對為:403~238.77,碰撞電壓 25eV，定性離子對為:421~314.98，碰撞電壓2〇6乂。
[0025]試樣中被測農藥殘留量W質量分數ω計，單位W毫克每千克(mg/kg)表示，按下式 計算。
[00%] P一一標準溶液中農藥的質量濃度，單位為毫克每升(mg/L); A一一樣品溶液中被測農藥的峰面積； As一一農藥標準溶液中被測農藥的峰面積； V一一提取溶劑總體積，單位為毫升(mL); m--試樣的質量，單位為克(g)。 計算結果保留兩位有效數字，當結果大于Img/kg時，保留兩位有效數字。
[0027] W標準工作溶液的色譜峰面積對其相應濃度進行回歸分析，得到標準工作曲線如 表1。
[002引表1芹菜空白基質中下蟲臘的標準曲線
加標回收率和重復性： 在不含下蟲臘的芹菜中加入0.01、0.05和0.2111肖/1^3個濃度水平的下蟲臘標準溶液，待 農藥添加30min后按上述處理步驟進行殘留量測定，0.2mg/kg添加濃度的樣品待測液用測 定前，用1%甲苯的丙酬、乙酸乙醋同體積比混合溶劑將凈化定容液稀釋至殘留量在線性范 圍之內。將測定濃度與農藥理論添加濃度進行比較，得到農藥添加回收率，每個添加水平平 行測定6次，得其相對標準偏差，測定結果見表2。由表2可W看出，在3個加標水平上，下蟲臘 的平均回收率為84.1 %~93.4%，平均相對標準偏差(RSD)為3.42%~6.38 %，說明本發明 方法的回收率較高，重復性好。
[0029]表2下蟲臘的回收率和重復性（n = 6)
實施例2黃瓜中下蟲臘殘留量的GC-MS-MS檢測： (1)提取及凈化:準確稱取5.0g氯化鋼和1 .Og乙酸鋼于lOOmL離屯、管中，再稱取10.00 g (精確至ο.01 g)均質黃瓜試樣，加入50 mL提取液（1%甲苯的丙酬、乙酸乙醋同體積比混合 溶液），勻漿機高速勻漿提取1 min，4000r/min離屯、5min，取上清液lOmL于d-Sro凈化管 (15mL Tube，900mg MgS04/450mg PSA/300mg C18/50mg GCB)中，充分震蕩 1 min后靜置 30min，靜置完成后，取適量上清液過濾置于進樣瓶中待測； (2) 標準工作溶液的配制:將不含下蟲臘的同種類基質空白黃瓜樣品按上述步驟（1) 處理，配制成0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5mg/L六個濃度的基質標準工作溶液濃度的下蟲 臘系列混合標準工作溶液； (3) 測定和結果計算:將步驟(2)中的各濃度梯度的標準工作溶液進行GC-MS-MS測 定，W標準工作溶液的色譜峰面積對其相應濃度進行回歸分析，得到基質標準工作曲線;在 相同條件下將步驟（1)中凈化后的樣品液進行GC-MS-MS測定，測得樣品液中下蟲臘的色譜 峰面積，代入基質標準曲線，得到樣品液中下蟲臘含量，然后根據樣品液所代表試樣的質量 計算得到樣品中下蟲臘殘留量。
[0030] 測得樣品溶液中未知組分的保留時間（RT)分別與標準溶液在同一色譜柱上的保 留時間（RT)相比較，如果樣品溶液中某組分的保留時間與標準溶液保留時間相差在± 0.05min內，并且該峰同時具有定量離子對和定性離子對的可認定為該農藥。若上述兩個條 件不能同時滿足，則判斷不含該種農藥。
[0031] 分析條件為:色譜柱:TR-5MS毛細管色譜柱，柱長30m，內徑0.25mm，膜厚0.25μπι;進 樣口溫度250°C ;載氣：氮氣（> 99. 999%);不分流模式進樣，進樣量：1化;恒流模式，流速 1.OmL/min;升溫程序:初溫60°C，保持2min，W每分鐘15°C的速度升至150°C，然后W每分鐘 6°C的速度升至280°C，保持lOmin;傳輸線溫度:250°C ;電離模式:EI模式，能量70eV;離子 源溫度230°(：;掃描方式:二級離子監測（5觀）模式;定量離子對為:403~238.77，碰撞電壓 25eV，定性離子對為:421~314.98，碰撞電壓2〇6乂。
[0032] 試樣中被測農藥殘留量W質量分數ω計，單位W毫克每千克(mg/kg)表示，按下式 計算。
[0033] P--標準溶液中農藥的質量濃度，單位為毫克每升(mg/L); A--樣品溶液中被測農藥的峰面積； As--農藥標準溶液中被測農藥的峰面積； V一一提取溶劑總體積，單位為毫升(mL); m-一試樣的質量，單位為克(g)。 計算結果保留兩位有效數字，當結果大于Img/kg時，保留兩位有效數字。
[0034] W標準工作溶液的色譜峰面積對其相應濃度進行回歸分析，得到標準工作曲線如 表3。
[0035] 表3黃瓜空白基質中下蟲臘的標準曲線
加標回收率和重復性： 在不含下蟲臘的黃瓜中加入0.01、0.05和0.2111肖/1^3個濃度水平的下蟲臘標準溶液，待 農藥添加30min后按上述處理步驟進行殘留量測定，0.2mg/kg添加濃度的樣品待測液用 測定前，用1%甲苯的丙酬、乙酸乙醋同體積比混合溶劑將凈化定容液稀釋至殘留量在線性 范圍之內。將測定濃度與農藥理論添加濃度進行比較，得到農藥添加回收率，每個添加水平 平行測定6次，得其相對標準偏差，測定結果見表4。由表4可W看出，在3個加標水平上，下 蟲臘的平均回收率為81.3 %~90.1 %，平均相對標準偏差(RSD)為5.12 %~8.20 %，說明本 發明方法的回收率較高，重復性好。
[0036] 表4下蟲臘的回收率和重復性（n = 6)
實施例3番茄中下蟲臘殘留量的GC-MS-MS檢測： (1) 提取及凈化:準確稱取5. Og氯化鋼和1.Og乙酸鋼于lOOmL離屯、管中，再稱取10.00 g (精確至0.01 g)均質番茄試樣，加入50 mL提取液（1%甲苯的丙酬、乙酸乙醋同體積比混合 溶液），勻漿機高速勻漿提取1 min，4000r/min離屯、5min，取上清液lOmL于d-Sro凈化管 (15mL Tube，900mg MgS04/450mg PSA/300mg C18/50mg GCB)中，充分震蕩 1 min后靜置 30min，靜置完成后，取適量上清液過濾置于進樣瓶中待測； (2) 標準工作溶液的配制:將不含下蟲臘的同種類基質空白番茄樣品按上述步驟（1) 處理，配制成0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5mg/L基質標準工作溶液濃度的下蟲臘系列混 合標準工作溶液； (3) 測定和結果計算:將步驟(2)中的各濃度梯度的標準工作溶液進行GC-MS-MS測 定，W標準工作溶液的色譜峰面積對其相應濃度進行回歸分析，得到基質標準工作曲線;在 相同條件下將步驟（1)中凈化后的樣品液進行GC-MS-MS測定，測得樣品液中下蟲臘的色譜 峰面積，代入基質標準曲線，得到樣品液中下蟲臘含量，然后根據樣品液所代表試樣的質量 計算得到樣品中下蟲臘殘留量。
[0037] 測得樣品溶液中未知組分的保留時間（RT)分別與標準溶液在同一色譜柱上的保 留時間（RT)相比較，如果樣品溶液中某組分的保留時間與標準溶液保留時間相差在± 0.05min內，并且該峰同時具有定量離子對和定性離子對的可認定為該農藥。若上述兩個條 件不能同時滿足，則判斷不含該種農藥。
[003引分析條件為:色譜柱:TR-5MS毛細管色譜柱，柱長30m，內徑0.25mm，膜厚0.25μπι;進 樣口溫度250°C ;載氣：氮氣（> 99. 999%);不分流模式進樣，進樣量：1化;恒流模式，流速 1.OmL/min;升溫程序:初溫60°C，保持2min，W每分鐘15°C的速度升至150°C，然后W每分鐘 6°C的速度升至280°C，保持lOmin;傳輸線溫度:250°C ;電離模式:EI模式，能量70eV;離子 源溫度230°(：;掃描方式:二級離子監測（5觀）模式;定量離子對為:403~238.77，碰撞電壓 25eV，定性離子對為:421~314.98，碰撞電壓206乂。
[0039] 試樣中被測農藥殘留量W質量分數ω計，單位W毫克每千克(mg/kg)表示，按下式 計算。
[0040] P一一標準溶液中農藥的質量濃度，單位為毫克每升(mg/L); A一一樣品溶液中被測農藥的峰面積； As一一農藥標準溶液中被測農藥的峰面積； V一一提取溶劑總體積，單位為毫升(mL); m--試樣的質量，單位為克(g)。 計算結果保留兩位有效數字，當結果大于Img/kg時，保留兩位有效數字。
[0041] W標準工作溶液的色譜峰面積對其相應濃度進行回歸分析，得到標準工作曲線如 表5。
[0042] 表5番茄空白基質中下蟲臘的標準曲線
加標回收率和重復性： 在不含下蟲臘的番茄中加入入0.01、0.05和0.2111肖/1^3個濃度水平的下蟲臘標準溶液， 待農藥添加30min后按上述處理步驟進行殘留量測定，0.2mg/kg添加濃度的樣品待測液 用測定前，用1%甲苯的丙酬、乙酸乙醋同體積比混合溶劑將凈化定容液稀釋至殘留量在線 性范圍之內。將測定濃度與農藥理論添加濃度進行比較，得到農藥添加回收率，每個添加水 平平行測定6次，得其相對標準偏差，測定結果見表6。由表6可W看出，在3個加標水平上， 下蟲臘的平均回收率為84.9%~93.9%，平均相對標準偏差(RSD)為2.96%~5.96%，說明 本發明方法的回收率較高，重復性好。
[0043] 表6下蟲臘的回收率和重復性（n = 6)
數據表明，將實施例方法配制的ο .01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5mg/L六種濃度基質匹 配標準溶液W待測物定量離子的峰面積(y)對質量濃度(x，mg/L)做標準曲線，得到下蟲臘 在Ξ種蔬菜中含量的線性方程及相關系數。結果顯示，下蟲臘在0. 01~0.5 mg/L范圍內線 性關系良好，其相關系數(r2 )均大于0. 95。在空白基質中添加0. 01、0.05、0.2Ξ個濃度的 標準溶液，按照實驗方法進行提取、凈化、上機檢測。下蟲臘的定量限化0D)為0.01 mg/kg， 方法的靈敏度可滿足國際農藥殘留的監控要求。
[0044]上述實施例僅是對本發明的優選實施方式進行描述，并非對本發明的范圍進行限 定，在不脫離本發明設計精神的前提下，本領域普通工程技術對本發明的技術方案作出的 各種變型和改進，均應落入本發明的權利要求書確定的保護范圍內。
【主權項】
1. 一種蔬菜中丁蟲腈殘留量的GC-MS-MS測定方法，其特征在于，所述方法包括以下步 驟:1)提取及凈化:準確稱取一定量氯化鈉和乙酸鈉于離心管中，再稱取均質試樣，加入提 取液后勻漿機高速勻漿提取1 min后離心處理取上清液于d-SPE凈化管中，充分震蕩后靜 置，取適量上清液過濾置于進樣瓶中待測；2)標準工作溶液的配制:將不含丁蟲腈的同種 類基質空白樣品按上述步驟1)處理，配制成至少3個濃度的丁蟲腈系列混合標準工作溶液； 3)測定和結果計算，將步驟2)中的各濃度梯度的標準工作溶液進行GC-MS-MS測定，以標準 工作溶液的色譜峰面積對其相應濃度進行回歸分析，得到基質標準工作曲線;在相同條件 下將步驟1)中凈化后的樣品液進行GC-MS-MS測定，測得樣品液中丁蟲腈的色譜峰面積，代 入基質標準曲線，得到樣品液中丁蟲腈含量，然后根據樣品液所代表試樣的質量計算得到 樣品中丁蟲臆殘留量。2. 根據權利要求1所述的一種蔬菜中丁蟲腈殘留量的GC-MS-MS測定方法，其特征在于： 步驟1)中所述的提取液為丙酮、乙酸乙酯同體積比混合溶液。3. 根據權利要求1所述的一種蔬菜中丁蟲腈殘留量的GC-MS-MS測定方法，其特征在于， 步驟1)所述的提取液為加入1%甲苯的丙酮、乙酸乙酯同體積比混合溶液。4. 根據權利要求1所述的一種蔬菜中丁蟲腈殘留量的GC-MS-MS測定方法，其特征在于： 步驟1)中準確稱取5.0g氯化鈉和1 .Og乙酸鈉于lOOmL離心管中，再稱取10.00 g(精確至 0.01 g)均質試樣，加入50 mL提取液，勾衆機高速勾衆提取1 min，4000r/min離心5min，取 上清液 10mL于d-SPE凈化管（15mL Tube，900mg MgS04/450mg PSA/300mg C18/50mg GCB) 中，充分震蕩1 min后靜置30min，靜置完成后，取適量上清液過濾置于進樣瓶中待測。5. 根據權利要求1、2、3、4任意一項所述的一種蔬菜中丁蟲腈殘留量的GC-MS-MS測定方 法，其特征在于，步驟3)中GC-MS-MS分析條件為:色譜柱:TR-5MS毛細管色譜柱，柱長30m，內 徑0.25mm，膜厚0.25μπι;進樣口溫度250 °C ;載氣:氦氣（2 99.999%);不分流模式進樣，進樣 量：lyL;恒流模式，流速1. OmL/min;升溫程序:初溫60°C，保持2min，以每分鐘15°C的速度升 至150°C，然后以每分鐘6°C的速度升至280°C，保持10min;傳輸線溫度:250°C ;電離模式:EI 模式，能量70eV;離子源溫度230°C;掃描方式:二級離子監測（SRM)模式;定量離子對為： 403~238.77，碰撞電壓25eV，定性離子對為:421~314.98，碰撞電壓20eV。
【文檔編號】G01N27/62GK105823835SQ201610137096
【公開日】2016年8月3日
【申請日】2016年3月11日
【發明人】官帥, 陳子雷, 董嶄, 李慧冬, 方麗萍, 杜紅霞
【申請人】山東省農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所