硫代磷酸酯類有機磷農藥殘留檢測試劑盒及其應用方法

硫代磷酸酯類有機磷農藥殘留檢測試劑盒及其應用方法
【專利摘要】本發明涉及檢測農藥殘留領域，特別涉及一種硫代磷酸酯類有機磷農藥殘留檢測試劑盒及其應用方法。所述試劑盒包括：提取劑、還原劑、前體液、pH調節劑以及滴管和反應管；所述的還原劑為2.4ng/mL～24μg/mL的酪氨酸甲酯接枝透明質酸水溶液。本發明是在納米金粒子的形成過程中加入有機磷農藥，同步化納米金粒子的形成、聚集以及保護層的建立這三個過程，將納米金粒子的聚集程度控制在其形成過程中，并且形成的納米金聚集體表面具有保護層，大大提高了聚集體的穩定性，進而提高檢測穩定性，檢測結果不再受檢測時間的限制，易于重復。
【專利說明】
硫代磯酸醋類有機磯農藥殘留檢測試劑盒及其應用方法
技術領域
[0001] 本發明設及檢測農藥殘留領域，特別設及一種硫代憐酸醋類有機憐農藥殘留檢測 試劑盒及其應用方法。
【背景技術】
[0002] 有機憐農藥因其具有廣譜、高效、價格低廉等特點，已成為當前世界農藥Ξ大支柱 之一。其中，硫代憐酸醋類是有機憐農藥中較為常用的一類，樂果、甲拌憐、馬拉硫憐等毒性 較強，殺蟲效果好的農藥都屬于此類，在保證農業穩產、高產方面發揮著重要作用。然而，由 于使用者缺乏科學使用農藥的知識，片面追求產量，造成市場上流通的農副產品都不同程 度的存在農藥殘留問題，成為威脅人們生命健康的隱患。為保證"舌尖上的安全"，在新修訂 食品安全法和食品安全國家標準的強力推動下，農產品生產基地、批發市場、各級食品檢驗 局、監督局、工商管理、超市、商場等基層單位W及個人用戶，對有機憐農藥現場快速檢測有 很大需求。
[0003] 現有檢測有機憐農藥多基于色譜技術，如氣相色譜、高效液相色譜、超高效液相色 譜、液相色譜等，雖然具有定量準確、靈敏度高等優點，卻依賴于大型儀器，技術要求高，檢 測周期長，在現場快速檢測和大批量樣品篩選中具有局限性，難W滿足預防和控制突發事 件。
[0004] 相比于色譜技術，比色法具有原理簡單，實驗周期短，且結果肉眼可見、無需復雜 儀器測量等優點，非常適合于現場篩查和實時測定，能夠滿足當前社會對農藥殘留分析檢 測技術的需求。作為生化分析中應用最為廣泛的標記材料，納米金具有極高的消光系數和 強烈的粒子間距效應。研究表明：當納米金粒子間的間距明顯超過其粒子平均直徑時，納米 金粒子為分散狀態，其可見吸收光譜譜峰在~52化m，宏觀上溶液呈現紅色；而當納米金粒 子間的間距小于粒子平均直徑時，則納米金粒子聚集呈團聚狀態，其可見吸收光譜譜峰發 生紅移，溶液顏色表現為紫色或藍色，甚至灰色。通過肉眼觀測或可見吸收光譜測量，均可 對納米金變色程度進行測定。基于納米金的運種性質，目前人們主要采用W下兩種途徑來 建立納米金比色法實現有機憐農藥的檢測：第一種是直接法，即先將納米金進行表面功能 化修飾，此時納米金為分散狀態，溶液呈紅色。當加入有機憐后，有機憐直接與納米金表面 的功能配體作用，使納米金團聚，溶液變藍。如公開號為CN104316522A的"采用納米金比色 法快速測定蔬菜中有機憐農藥的方法"專利，公開的通過銅(III)功能化的納米金與有機憐 農藥含氧酸根之間的配位作用使納米金聚集變色的比色檢測方法。第二種是間接法，即有 機憐不與納米金發生直接作用，而是利用其對乙酷膽堿醋酶的抑制作用，間接抑制納米金 顆粒的聚集，從而抑制溶液的變色程度。根據抑制的程度即可測定樣品中的有機憐農藥含 量。如公開號為CN102221529A的"金納米粒子比色法快速檢測蔬菜中有機憐農藥殘留的方 法"專利中，公開的利用乙酷膽堿醋酶催化底物艦化乙酷硫代膽堿水解得到硫代膽堿，硫代 膽堿能使金納米粒子聚集，體系由酒紅色變為灰色，當有機憐農藥作用于乙酷膽堿醋酶時， 會抑制乙酷膽堿醋酶活性，因而可W通過金納米粒子聚集程度的減少來檢測體系中的有機 憐。
[0005] 然而納米金比色法在有機憐檢測中尚存在一些不足之處：
[0006] (1)檢測方法穩定性較差。
[0007] 裸露的納米金粒子很容易在范德華力的作用下彼此吸引形成團聚。常規的，在制 備納米金時，一般會加入帶電小分子、聚合物、聚電解質等物質作為穩定劑，W化學鍵、靜電 吸附或物理吸附的方式在納米金粒子表面形成一層保護層，使粒子之間可W通過靜電排 斥、空間位阻或靜電空間雙重排斥的作用下，彼此保持一定的間距，從而使形成的納米金粒 子能穩定分散在溶液中。因此，粒子間的排斥力是其穩定存在于溶液中的關鍵。而無論是直 接法還是間接法為了實現檢測的目的，都采用了降低粒子間排斥力，也就是去除保護的方 式，W使粒子團聚變色。固然達到了較好的變色效果，但是由于保護層遭到破壞而形成了較 大聚集體(一般在200-4(K)nm，更有微米級聚集體形成的情況）。研究表明，運種大的聚集體 在溶液中的穩定性較差，幾個小時內即發生沉淀，而使溶液變為無色。因此，在檢測時，須在 反應進行完全后，立即進行結果讀取。
[000引（2)納米金儲存穩定性較差。
[0009] 在構建納米金比色法時，都需要事先制備好納米金溶液，W備使用。雖然在制備過 程中，納米金表面都被覆蓋上了一層保護性的配體分子。但在儲存時，納米金的穩定性依然 易受溫度的影響。研究表明，避光條件下，4°C時，納米金可W穩定存在20天;室溫(23°C)時， 納米金在第6天即發生聚集，第15天即可看到黑色沉淀。運些都在一定程度上限制了納米金 比色法在有機憐農藥殘留檢測中的應用。

【發明內容】

[0010] 本發明針對現有技術中的不足，提供一種檢測穩定性強、儲存期較長、使用方便的 硫代憐酸醋類有機憐農藥殘留檢測試劑盒及其應用方法。
[0011] 本發明的技術方案是：
[0012] -種硫代憐酸醋類有機憐農藥殘留檢測試劑盒，所述試劑盒包括：提取劑、還原 劑、前體液、pH調節劑W及滴管和反應管;所述的還原劑為2.4ng/mL~2化g/mL的酪氨酸甲 醋接枝透明質酸水溶液。
[0013] 所述的酪氨酸甲醋接枝透明質酸既是還原劑，也是穩定劑。
[0014] 其中，所述提取劑為丙酬:水按體積比為1:1混合而成的丙酬溶液;所述前體液為 0.8~4mM的氯金酸水溶液;所述pH調節劑為3.875~7.75M的氨氧化鋼水溶液。
[0015] 本發明所使用的檢測原理是：酪氨酸甲醋接枝透明質酸中的酪徑基具有還原性， 可將氯金酸中的Ξ價金離子還原成零價納米金。另外，透明質酸不僅是一種帶負電的聚電 解質，而且其所含的簇基和徑基基團與金離子具有親和作用。因此，在納米金的形成過程 中，酪氨酸甲醋接枝透明質酸傾向于結合在納米金表面，發揮穩定劑的功能，使形成的納米 金在靜電空間雙重排斥作用下分散存在于溶液中，溶液呈現粉色、紅色或酒紅色。而當待測 樣品中存在硫代憐酸醋類有機憐農藥時，其化學結構中含有的憐硫基團，W及在堿性條件 下水解產生的琉基基團，均可W與納米金通過金硫鍵相互作用。于是，在多重金硫鍵的作用 下，納米金粒子易于聚集，導致溶液顏色發生變化，從而實現硫代憐酸醋類有機憐農藥檢測 的目的。
[0016] 本發明的另一個目的在于公開應用上述的試劑盒檢測硫代憐酸醋類有機憐農藥 殘留的方法，包括如下步驟：
[0017] 步驟1:待測樣品加入到待測樣品質量4~6倍體積的提取劑中，攬拌5-lOmin后靜 置3-5min;
[0018] 步驟2:用滴管在反應管中依次滴加等體積的前體液、還原劑、步驟1所述的液體W 及抑調節劑，混合均勻，觀察顏色變化；
[0019] 步驟3:若步驟2中所述的反應管中的溶液顯紫色、藍色或灰色，則樣品中殘留有硫 代憐酸醋類有機憐農藥;若步驟2中所述的反應管中的溶液顯粉紅、紅色或酒紅色，則樣品 中無硫代憐酸醋類有機憐農藥殘留。
[0020] 本發明的第Ξ個目的在于公開制備還原劑酪氨酸甲醋接枝透明質酸的方法，包括 如下步驟：
[0021] 步驟①:配制2-(N-嗎啡嘟）乙橫酸鋼(MES)的水溶液；
[0022] 步驟②:攬拌下向步驟①得到的水溶液中加入透明質酸、1-乙基-(3-二甲基氨基 丙基)碳二亞胺鹽酸鹽化DC)和N-徑基班巧酷亞胺(NHS)，反應120~150min，得到一種混合 溶液；
[0023] 步驟③:攬拌下向步驟②得到的混合溶液中加入酪氨酸甲醋，反應300~480min， 得到一種混合溶液.
[0024] 步驟④:將步驟③得到的混合溶液置于透析袋中，并將透析袋置于超純水中，透析 2 ~3d;
[0025] 步驟⑤:將步驟④得到的透析袋中的溶液，置于-80°C冰箱中，快速冷凍后，放入真 空冷凍干燥器中，真空干燥2~3d，制得酪氨酸甲醋接枝透明質酸。
[0026]
[0027]為考察酪氨酸甲醋是否成功接枝到透明質酸上，使用賽默飛世爾（Thermo Scientific)Nicolet 6700傅里葉變換紅外光譜儀(FTIR)對酪氨酸甲醋接枝透明質酸官能 團進行表征。
[00%]如圖1所示，純透明質酸光譜a顯示，其簇基伸縮振動峰在leiOcnfi處，固有酷胺鍵 伸縮振動峰在1560cnfi處。簇基是其氨基酸甲醋的作用位點。在酪氨酸甲醋接枝透明質酸光 譜b中，leiOcnfi處的簇基伸縮振動峰依然存在，表明有剩余簇基存在。另外，在1660cnfi處 出現一新峰，文獻顯示，運是酷胺鍵的特征峰，表明酪氨酸甲醋與透明質酸之間形成新的酷 胺鍵。并且，1560cnfi處的酷胺鍵紅外峰進一步增強，亦印證了運一觀點。不僅如此，與酪氨 酸甲醋光譜C對比，酪氨酸甲醋中的1250cnfi處的徑基伸縮峰和1515cnfi處的芳香環紅外峰 均出現在光譜b中，進一步證實了酪氨酸甲醋接枝透明質酸的形成。
[0029] 在W上方案的基礎上，所述的組分按照W下重量份數比：2-(N-嗎啡嘟）乙橫酸鋼 (MES)0.0 41份、透明質酸鋼0.8~1.6份、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽 化D04.2~8.4份和N-徑基班巧酷亞胺(N服)1~2份，酪氨酸甲醋1~2份。
[0030] 優選的，所述的透明質酸鋼的分子量66kDa-99kDa。
[0031] 優選的，所述透析袋的截留分子量為lOkDa。
[0032] 本發明的有益效果是：
[0033] (1)提高檢測方法的穩定性。
[0034] 本發明在納米金粒子的形成過程中加入有機憐農藥，同步化納米金粒子的形成、 聚集W及保護層的建立運Ξ個過程，將納米金粒子的聚集程度控制在其形成過程中，并且 形成的納米金聚集體表面具有保護層，大大提高了聚集體的穩定性，進而提高檢測穩定性， 檢測結果不再受檢測時間的限制。
[0035] (2)提高檢測試劑盒的儲存穩定性。
[0036] 本發明的檢測試劑盒中無提前制備好的納米金溶液，而是一些制備納米金所需的 有機溶劑(提取劑）、高分子(還原劑）、強酸(前體液）、強堿(P的周節劑)等化學試劑，運些試 劑的性質穩定，可長期儲存。
【附圖說明】
[0037] 圖1為純透明質酸、酪氨酸甲醋接枝透明質酸和酪氨酸甲醋的FTIR圖譜對比圖。
[0038] 其中，（a)純透明質酸，（b)酪氨酸甲醋接枝透明質酸，（C)酪氨酸甲醋。
[0039] 圖2空白對照溶液、樣品檢測溶液、放置兩天后的樣品檢測溶液W及儲存Ξ個月后 的檢測試劑盒應用時獲得的樣品檢測溶液的可見吸收光譜圖；
[0040] 圖3透射電鏡表征圖；
[0041] 其中，（a)為空白對照溶液；（b)為樣品檢測溶液。
【具體實施方式】
[0042] 下面結合具體實施例對本發明做進一步說明。但本發明并不僅限于下述實施例。 所述實施例中所設及的實驗方法，如無特殊說明，均為常規方法。
[0043] 實施例1:
[0044] 一種有機憐農藥殘留檢測試劑盒，包括提取劑、還原劑、前體液、抑調節劑W及ImL 滴管和5mL反應管。其中，提取劑為5~lOmL丙酬:水按體積比為1:1混合而成的丙酬溶液;還 原劑為2.4ng/mL~24yg/mL的酪氨酸甲醋接枝透明質酸水溶液;前體液為0.8~4mM的氯金 酸水溶液;pH調節劑為3.875~7.75M的氨氧化鋼水溶液。
[0045] 其中，酪氨酸甲醋接枝透明質酸的制備方法為：①先在反應容器中，加入超純水 4.2份，加入0.041份2-(N-嗎啡嘟）乙橫酸鋼(MES)，充分溶解后，得到一種水溶液；
[0046] ②攬拌下向步驟①得到的水溶液中加入透明質酸(分子量66kDa-99kDa)l. 2份、1- 乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽化DC)6.8份和N-徑基班巧酷亞胺(NHSH.5份， 反應130min，得到一種混合溶液；
[0047] ③攬拌下向步驟②得到的混合溶液中加入酪氨酸甲醋1.5份，反應420min，得到一 種混合溶液；
[0048] ④將步驟③得到的混合溶液置于透析袋(截留分子量為lOkDa)中，并將透析袋置 于超純水中，透析2.5d;
[0049] ⑤將步驟④得到的透析袋中的溶液，置于-80°C冰箱中，快速冷凍后，放入真空冷 凍干燥器中，真空干燥2~3d，制得酪氨酸甲醋接枝透明質酸。
[(K)加 ]
[0051] 應用上述的試劑盒檢測硫代憐酸醋類有機憐農藥殘留的方法，包括如下步驟：
[0052] 步驟l:lg油菜用清水洗去表面泥±，加入5mL的提取劑，攬拌5-lOmin后靜置3- 5min；
[0053] 步驟2:用滴管在反應管中依次滴加等體積的前體液、還原劑、步驟1所述的液體W 及抑調節劑，混合均勻，觀察顏色變化；
[0054] 步驟3:若步驟2中所述的反應管中的溶液顯紫色、藍色或灰色，則樣品中殘留有硫 代憐酸醋類有機憐農藥;若步驟2中所述的反應管中的溶液顯粉紅、紅色或酒紅色，則樣品 中無硫代憐酸醋類有機憐農藥殘留。
[0055] 結果發現，混合均勻的瞬間，樣品檢測溶液即開始從無色，逐漸顯現紅色，并逐漸 加深;反應進行5min后，溶液開始呈現藍色；lOmin后，溶液依然為藍色，顏色不再發生變化。
[0056] 說明:該檢測油菜中殘留有硫代憐酸醋類有機憐農藥。
[0化7] 實施例2:
[005引一種有機憐農藥殘留檢測試劑盒，包括提取劑、還原劑、前體液、抑調節劑W及ImL 滴管和5mL反應管。其中，提取劑為5~lOmL丙酬:水按體積比為1:1混合而成的丙酬溶液;還 原劑為2.4ng/mL~24yg/mL的酪氨酸甲醋接枝透明質酸水溶液;前體液為0.8~4mM的氯金 酸水溶液;pH調節劑為3.875~7.75M的氨氧化鋼水溶液。
[0059] 其中，酪氨酸甲醋接枝透明質酸的制備方法為：
[0060] ①先在反應容器中，加入超純水4.2份，加入0.041份2-(N-嗎啡嘟）乙橫酸鋼 (MES)，充分溶解后，得到一種水溶液；
[0061 ] ②攬拌下向步驟①得到的水溶液中加入透明質酸鋼(分子量66kDa-99kDa) 0.8份、 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽化D04.2份和N-徑基班巧酷亞胺(NHS)l份， 反應130min，得到一種混合溶液；
[0062] ③攬拌下向步驟②得到的混合溶液中加入酪氨酸甲醋1份，反應420min，得到一種 混合溶液；
[0063] ④將步驟③得到的混合溶液置于透析袋(截留分子量為lOkDa)中，并將透析袋置 于超純水中，透析2.5d;
[0064] ⑤將步驟④得到的透析袋中的溶液，置于-80°C冰箱中，快速冷凍后，放入真空冷 凍干燥器中，真空干燥2~3d，制得酪氨酸甲醋接枝透明質酸。
[0065] 應用上述的試劑盒檢測硫代憐酸醋類有機憐農藥殘留的方法，包括如下步驟：
[0066] 步驟l:lg蘋果皮，加入樣品質量6mL提取劑，攬拌5-lOmin后靜置3-5min;
[0067] 步驟2:用滴管在反應管中依次滴加等體積的前體液、還原劑、步驟1所述的液體W 及抑調節劑，混合均勻，觀察顏色變化；
[0068] 步驟3:若步驟2中所述的反應管中的溶液顯紫色、藍色或灰色，則樣品中殘留有硫 代憐酸醋類有機憐農藥;若步驟2中所述的反應管中的溶液顯粉紅、紅色或酒紅色，則樣品 中無硫代憐酸醋類有機憐農藥殘留。
[0069] 結果發現，混合均勻的瞬間，樣品檢測溶液即開始從無色，逐漸顯現紅色，并逐漸 加深;反應進行5min后，溶液開始呈現藍色；lOmin后，溶液依然為藍色，顏色不再發生變化。
[0070] 說明:該檢測蘋果皮中殘留有硫代憐酸醋類有機憐農藥。
[0071] 實施例3:
[0072] 一種有機憐農藥殘留檢測試劑盒，包括提取劑、還原劑、前體液、抑調節劑W及ImL 滴管和5mL反應管。其中，提取劑為5~lOmL丙酬:水按體積比為1:1混合而成的丙酬溶液;還 原劑為2.4ng/mL~24yg/mL的酪氨酸甲醋接枝透明質酸水溶液;前體液為0.8~4mM的氯金 酸水溶液;pH調節劑為3.875~7.75M的氨氧化鋼水溶液。
[0073] 其中，酪氨酸甲醋接枝透明質酸的制備方法為：
[0074] ①先在反應容器中，加入超純水4.2份，加入0.041份2-(N-嗎啡嘟）乙橫酸鋼 (MES)，充分溶解后，得到一種水溶液；
[0075] ②攬拌下向步驟①得到的水溶液中加入透明質酸鋼(分子量66kDa-99kDa)1.6份、 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽化DC)8.4份和N-徑基班巧酷亞胺(NHS)2份， 反應130min，得到一種混合溶液；
[0076] ③攬拌下向步驟②得到的混合溶液中加入酪氨酸甲醋2份，反應420min，得到一種 混合溶液；
[0077] ④將步驟③得到的混合溶液置于透析袋(截留分子量為lOkDa)中，并將透析袋置 于超純水中，透析2.5d;
[0078] ⑤將步驟④得到的透析袋中的溶液，置于-80°C冰箱中，快速冷凍后，放入真空冷 凍干燥器中，真空干燥2~3d，制得酪氨酸甲醋接枝透明質酸。
[0079] 應用上述的試劑盒檢測硫代憐酸醋類有機憐農藥殘留的方法，包括如下步驟：
[0080] 步驟l:lg渡菜，加入4mL的提取劑，攬拌5-lOmin后靜置3-5min;
[0081] 步驟2:用滴管在反應管中依次滴加等體積的前體液、還原劑、步驟1所述的液體W 及抑調節劑，混合均勻，觀察顏色變化；
[0082] 步驟3:若步驟2中所述的反應管中的溶液顯紫色、藍色或灰色，則樣品中殘留有硫 代憐酸醋類有機憐農藥;若步驟2中所述的反應管中的溶液顯粉紅、紅色或酒紅色，則樣品 中無硫代憐酸醋類有機憐農藥殘留。
[0083] 結果發現，混合均勻的瞬間，樣品檢測溶液即開始從無色，逐漸顯現粉色，并逐漸 加深;反應進行5min后，溶液開始呈現紅色；lOmin后，溶液依然為紅色，顏色不再發生變化。
[0084] 說明:該檢測渡菜中無殘留硫代憐酸醋類有機憐農藥。
[0085] W本發明實施例1的檢測試劑盒為例，
[0086] 為了證實運種顏色變化來自納米金聚集體的形成，做進一步表征分析：
[0087] 首先，使用島津(SHIMADZU)UV-2450紫外可見分光光度計采集其吸收光譜信息。如 圖2所示，樣品檢測溶液的吸收光譜整體較為平緩，且最大吸收已偏離520nm發生紅移，且在 650-800nm具有較強吸收，表明存在納米金聚集體的可能性。
[008引使用日本電子(巧化)JEM 2100-UHR透射電子顯微鏡進行納米結構形貌表征，進一 步印證了納米金聚集體的形成，如圖3a所示。并且，由于聚集發生在納米金形成過程中，聚 集體并不大，其直徑不超過50nm，易于穩定存在于溶液中。
[0089] 不僅如此，為了證實納米金聚集的原因來自樣品，做了如下空白對照試驗：即直接 在5mL反應管中，用ImL滴管依次滴加一滴前體液、還原劑、提取劑W及抑調節劑，混合均勻， 即開始觀察顏色變化。
[0090] 結果發現，混合均勻的瞬間，反應管中的空白對照溶液即開始從無色，逐漸顯現紅 色；lOmin后，溶液依然為紅色，并不再發生變化。
[0091] 對此空白對照溶液依然進行吸收光譜和透射電鏡表征。從其吸收光譜（圖2)上看， 空白對照溶液在519皿處形成一明顯吸收峰，而在650-800皿吸收非常弱。參考文獻報道，猜 測空白對照溶液中可能有納米金粒子形成，其尺寸約13皿，且呈分散狀態。透射電鏡表征圖 (圖3b)進一步印證了運一結果。
[0092] 圖2空白對照溶液、樣品檢測溶液、放置兩天后的樣品檢測溶液W及儲存Ξ個月后 的檢測試劑盒應用時獲得的樣品檢測溶液的可見吸收光譜圖。
[0093] 圖3空白對照溶液(a)和樣品檢測溶液(b)的透射電鏡表征圖。
[0094] 綜上所述，本發明的檢測試劑盒及其應用方法實現了通過納米金分散-聚集狀態 的改變而引起的顏色變化進行硫代憐酸醋類農藥殘留檢測的目的。
[0095] 在檢測穩定性方面，用本發明實施例1的檢測試劑盒，按照其應用方法進行試驗所 得到的含有納米金聚集體的檢測溶液，在避光、室溫(23°C)條件下，放置兩天后，溶液依然 呈現藍色，且未發現任何沉淀產生。測量其可見吸收光譜，如圖2所示，該樣品檢測溶液放置 兩天后，吸收光譜基本不變。相比現有技術中形成的較大聚集體在幾個小時內即發生沉淀， 使溶液變無色。本發明提供的檢測試劑盒及其應用方法大大提高了檢測穩定性。
[0096]在儲存穩定性方面，將本發明實施例1中的檢測試劑盒，在避光、4°C條件下，儲存 Ξ個月后。再按照其應用方法進行試驗。結果顯示，與不經儲存檢測試劑盒的樣品檢測溶液 的可見吸收光譜相比，儲存Ξ個月后的檢測試劑盒應用時獲得的樣品檢測溶液，其吸收光 譜基本不變(如圖2所示）。運說明本發明檢測試劑盒在儲存過程中性質穩定，儲存Ξ個月后 仍能有效應用。
【主權項】
1. 一種硫代磷酸酯類有機磷農藥殘留檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括:提取 劑、還原劑、前體液、pH調節劑以及滴管和反應管;所述的還原劑為2.4ng/mL~24yg/mL的酪 氨酸甲酯接枝透明質酸水溶液。2. 根據權利要求1所述的硫代磷酸酯類有機磷農藥殘留檢測試劑盒，其特征在于，所述 提取劑為丙酮:水按體積比為1:1混合而成的丙酮溶液。3. 根據權利要求1硫代磷酸酯類有機磷農藥殘留檢測試劑盒，其特征在于，所述前體液 為0.8~4mM的氯金酸水溶液。4. 根據權利要求1硫代磷酸酯類有機磷農藥殘留檢測試劑盒，其特征在于，所述pH調節 劑為3.875~7.75M的氫氧化鈉水溶液。5. -種應用權利要求1所述的試劑盒檢測硫代磷酸酯類有機磷農藥殘留的方法，其特 征在于，包括如下步驟： 步驟1:待測樣品加入到所述待測樣品質量4~6倍體積的提取劑中，攪拌5-10min后靜 置3-5min; 步驟2:用滴管在反應管中依次滴加等體積的前體液、還原劑、步驟1所述的液體以及pH 調節劑，混合均勻，觀察顏色變化； 步驟3:若步驟2中所述的反應管中的溶液顯藍色，則樣品中殘留有硫代磷酸酯類有機 磷農藥;若步驟2中所述的反應管中的溶液顯粉紅、紅色或酒紅色，則樣品中無硫代磷酸酯 類有機磷農藥殘留。6. -種制備還原劑酪氨酸甲酯接枝透明質酸的方法，其特征在于，包括如下步驟： 步驟①:配置2-(N-嗎啡啉）乙磺酸鈉 MES的水溶液； 步驟②:攪拌下向步驟①得到的水溶液中加入透明質酸、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基） 碳二亞胺鹽酸鹽EDC和N-羥基琥珀酰亞胺NHS，反應120~150min，得到一種混合溶液； 步驟③:攪拌下向步驟②得到的混合溶液中加入酪氨酸甲酯，反應300~480min，得到 一種混合溶液； 步驟④:將步驟③得到的混合溶液置于透析袋中，并將透析袋置于超純水中，透析2~ 3d； 步驟⑤:將步驟④得到的透析袋中的溶液，_80°C快速冷凍，真空冷凍干燥器，制得酪氨 酸甲酯接枝透明質酸。7. 根據權利要求6所述的制備還原劑酪氨酸甲酯接枝透明質酸的方法，其特征在于，所 述的組分按照以下重量份數比：2-(N-嗎啡啉）乙磺酸鈉 MES 0.041份、透明質酸鈉0.8~1.6 份、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽EDC 4.2~8.4份和N-羥基琥珀酰亞胺NHS 1~2份，酪氨酸甲酯1~2份。8. 根據權利要求6所述的制備還原劑酪氨酸甲酯接枝透明質酸的方法，其特征在于，所 述的透明質酸鈉的分子量66kDa_99kDa。9. 根據權利要求6所述的制備還原劑酪氨酸甲酯接枝透明質酸的方法，其特征在于，所 述透析袋的截留分子量為10kDa。
【文檔編號】G01N21/78GK105823775SQ201610165270
【公開日】2016年8月3日
【申請日】2016年3月22日
【發明人】楊麗敏, 姜磊, 張曉慧, 李慧萍, 李碩
【申請人】中國石油大學(華東)