生物組織樣本制備套液的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種生物組織樣本制備套液，包括固定液和透明液，以體積份數計，所述固定液包括無水乙醇45～50份、無水甲醇20～25份、聚乙二醇400 15份、純化水10～20份和表面活性劑0.03～0.05份；所述透明液包括D?檸烯90份、異丙醇10份和表面活性劑0.03～0.05份。本發明的生物組織樣本制備套液，可以滿足各級醫院病理科及科研院所對組織樣本處理的環保型病理學組織學試劑，可滿足常規病理診斷、免疫組織化學診斷技術、分子生物學診斷技術要求，處理組織的效果優于傳統技術。
【專利說明】
生物組織樣本制備套液
技術領域
[0001]本發明涉及醫療器械中的體外診斷試劑，特別涉及一種生物組織樣本制備套液。
【背景技術】
[0002]組織病理學的誕生已有150多年的歷史，在所有的醫院，只要有手術，均由醫院病理科對手術組織樣本作出組織病理學診斷。常規石蠟包埋HE染色制片仍是當前用以處理組織樣本的最基本技術，它是病理診斷方法學的基礎，也是許多新方法、新技術優劣的評定參照標準。目前，全國乃至全世界依然在使用傳統的方法，即:將組織樣本放置處理液的缸中，依次倒入或調入不同處理液，樣本依次在每個試劑中按規定浸泡不同時間完成處理切片、染色、封片等，全程需要30幾個步驟。整個過程大量使用甲醛、二甲苯、氧化汞、氨水有毒害化學試劑，病理技術人員長期置身于有毒環境;試劑寬容度差、操作復雜、不易控制，病理制片質量差，影響診斷；試劑耗量大，過多排放，嚴重污染環境。同時絕大數醫院自行配制試劑，缺乏統一標準。因此病理行業所用產品標準化、規范化、低毒化、低排放，是行業發展的必然趨勢。
【發明內容】
[0003]本發明的一個目的是解決至少上述問題和/或缺陷，并提供至少后面將說明的優點。
[0004]本發明還有一個目的是提供一種生物組織樣本制備套液，可以滿足各級醫院病理科及科研院所對組織樣本處理的環保型病理學組織學試劑，可滿足常規病理診斷、免疫組織化學診斷技術、分子生物學診斷技術要求，處理組織的效果優于傳統技術。
[0005]為此，本發明提供的技術方案為:
[0006]—種生物組織樣本制備套液，包括固定液和透明液，以體積份數計，
[0007]所述固定液包括無水乙醇45?50份、無水甲醇20?25份、聚乙二醇400 15份、純化水10?20份和表面活性劑0.03?0.05份；
[0008]所述透明液包括D-檸烯90份、異丙醇10份和表面活性劑0.03?0.05份。
[0009]優選的是，所述的生物組織樣本制備套液中，還包括脫水液，以體積份數計，所述脫水液包括無水乙醇45?55份、叔丁醇15?25份、甲基環己燒10?20份、丙酮6?9份和異丙醇6?10份。
[0010]優選的是，所述的生物組織樣本制備套液中，所述脫水液包括無水乙醇50份、叔丁醇20份、甲基環己烷15份、丙酮7份和異丙醇8份。
[0011]優選的是，所述的生物組織樣本制備套液中，還包括浸蠟液，以重量份數計，所述浸蠟液包括全精煉石蠟70份、半全精煉石蠟20份和精煉蜜蓋蜂蠟10份和石蠟改性劑，所述石蠟改性劑的用量與所述全精煉石蠟、半全精煉石蠟和精煉蜜蓋蜂蠟的總重量的比為3:1OOOo
[0012]優選的是，所述的生物組織樣本制備套液中，所述浸蠟液的制備方法具體為:將浸蠟液的原料熔化后混溶均勻，并于恒溫75°C下放置8?12h，常溫冷卻成型，以得到所述浸蠟液。
[0013]優選的是，所述的生物組織樣本制備套液中，所述固定液中還包含無水碳酸鈉3?5g/L和三氯乙酸6?8g/L。
[0014]優選的是，所述的生物組織樣本制備套液中，所述固定液中包括無水乙醇45份、無水甲醇25份、聚乙二醇400 15份和純化水15份，所述無水碳酸鈉的濃度為3g/L，所述三氯乙酸的濃度為7.5g/L。
[0015]優選的是，所述的生物組織樣本制備套液中，所述固定液還包括冰醋酸3份、4份PBS緩沖液和乙酸5份，所述PBS緩沖液中的磷酸根濃度為0.05?0.07mol/L。
[0016]優選的是，所述的生物組織樣本制備套液中，所述透明液還包括丙酮5份和松節油3份。
[0017]優選的是，所述的生物組織樣本制備套液中，所述浸蠟液還包括十六烷酸8份。
[0018]本發明至少包括以下有益效果:
[0019]本發明的生物組織樣本制備套液為無毒害環保型試劑。在滿足病理學常規診斷同時，又能滿足免疫組織化學、分子生物學實驗研究的要求。在常規組織樣本處理上杜絕了傳統技術對組織樣本處理中經常出現的使組織樣本縮、硬、裂、脆現象，使細胞及組織結構更接近原生形態，對組織結構固定完好、脫水徹底;在免疫組織化學實驗技術上由于本技術不使用甲醛，因此既避免了甲醛的毒害作用，又消除了甲醛對抗原物質的遮蓋，能夠更好的保存抗原;在分子生物學實驗和研究方面，實驗證明該系列試劑處理的組織可以很好的保存細胞的核酸結構，有利于核酸的分離、提取、及相關分子病理學實驗。經過此試劑處理后的組織軟硬適度，既提高了切片質量，又大幅度節約切片機刀片(主要指子宮肌瘤、纖維肌瘤、皮膚等硬組織)，解決了困擾病理技術人員多年的脂肪組織不易上色的問題。整個生物組織制備過程從傳統技術的13個步驟，縮減到4個步驟。本系列試劑是采用的不同功能、并互溶的有機化學試劑混溶的復合型產品。其原料97%以上為一類化學試劑，其余為二類化學試劑，擯棄三類化學試劑。較單一使用甲醛固定，乙醇脫水，二甲苯透明的功效明顯提高。該系列試劑特點為:低毒、可降解、無污染、減少排放。將傳統技術中使用的有毒有害、嚴重污染環境的甲醛、二甲苯試劑全部擯棄，消除由此產生的職業環境污染，從源頭上杜絕有毒有害物質排放，大量減少試劑消耗。
[0020]本發明生物組織樣本制備套液環保、無甲醛、無苯，可完全替代傳統的制備套液。同時，本發明的制備套液安全、穩定性好，配置后長時間性質保持不變，性能維持良好，具有良好的市場價值。。
[0021]本發明的其它優點、目標和特征將部分通過下面的說明體現，部分還將通過對本發明的研究和實踐而為本領域的技術人員所理解。
【附圖說明】
[0022]圖1為本發明其中一個實施例中利用本發明的制備套液制備的皮膚組織切片的顯微照片，放大倍數為200倍。
[0023]圖2為本發明其中一個實施例中利用本發明的制備套液制備的皮膚組織切片的顯微照片，放大倍數為200倍。
【具體實施方式】
[0024]下面結合附圖對本發明做進一步的詳細說明，以令本領域技術人員參照說明書文字能夠據以實施。
[0025]應當理解，本文所使用的諸如“具有”、“包含”以及“包括”術語并不配出一個或多個其它元件或其組合的存在或添加。
[0026]本發明提供一種生物組織樣本制備套液，包括固定液和透明液，以體積份數計，
[0027]所述固定液包括無水乙醇45?50份、無水甲醇20?25份、聚乙二醇400 15份、純化水10?20份和表面活性劑0.03?0.05份;所述透明液包括D-檸烯90份、異丙醇10份和表面活性劑0.03?0.05份。
[0028]在本發明的其中一個實施例中，作為優選，還包括脫水液，以體積份數計，所述脫水液包括無水乙醇45?55份、叔丁醇15?25份、甲基環己燒10?20份、丙酮6?9份和異丙醇6?10份。
[0029]在本發明的其中一個實施例中，作為優選，所述脫水液包括無水乙醇50份、叔丁醇20份、甲基環己烷15份、丙酮7份和異丙醇8份。
[0030]在本發明的其中一個實施例中，作為優選，還包括浸蠟液，以重量份數計，所述浸蠟液包括全精煉石蠟70份、半全精煉石蠟20份和精煉蜜蓋蜂蠟10份和石蠟改性劑，所述石蠟改性劑的用量與所述全精煉石蠟、半全精煉石蠟和精煉蜜蓋蜂蠟的總重量的比為3:1OOOo
[0031]在本發明的其中一個實施例中，作為優選，所述浸蠟液的制備方法具體為:將浸蠟液的原料熔化后混溶均勻，并于恒溫75°C下放置8?12h，常溫冷卻成型，以得到所述浸蠟液。
[0032]在本發明的其中一個實施例中，作為優選，所述固定液中還包含無水碳酸鈉3?5g/L和三氯乙酸6?8g/L。
[0033]在本發明的其中一個實施例中，作為優選，所述固定液中包括無水乙醇45份、無水甲醇25份、聚乙二醇400 15份和純化水15份，所述無水碳酸鈉的濃度為3g/L，所述三氯乙酸的濃度為7.5g/L。
[0034]在本發明的其中一個實施例中，作為優選，所述固定液還包括冰醋酸3份、4份PBS緩沖液和乙酸5份，所述PBS緩沖液中的磷酸根濃度為0.05?0.07mol/L。
[0035]在本發明的其中一個實施例中，作為優選，所述透明液還包括丙酮5份和松節油3份。
[0036]在本發明的其中一個實施例中，作為優選，所述浸蠟液還包括十六烷酸8份。
[0037]實施例1
[0038]本發明的生物組織樣本制備套液，包括:
[0039]固定液:以體積計，包括無水乙醇45份、無水甲醇25份、聚乙二醇40015份、純化水15份和表面活性劑0.03份；以及無水碳酸鈉3g/L、三氯乙酸7.5g/L，常溫下按體積比混溶均勻即得，成品pH值7?7.5。
[0040]脫水液:以體積份數計，無水乙醇50份、叔丁醇20份、甲基環己烷15份、丙酮7份、異丙醇8份，常溫下按體積比混溶均勻即得。
[0041]透明液:以體積份數計，D-檸烯90份、異丙醇10份、表面活性劑0.03?0.05份，常溫下按體積比混溶均勻即得。
[0042]浸蠟:以重量份數計，56#全精煉石蠟70份、56#半全精煉石蠟20份、精煉蜜蓋蜂蠟10份;石蠟改性劑0.3g/kg、上述原料置于靜置桶內，熔化后混溶均勻，恒溫75°C下8?12h，常溫冷卻成型，熔點:56?58°C。
[0043]具體操作方法
[0044]為表述清楚，將組織樣本處理部分各種功能試劑進行編號。具體為:組織固定液設定編號為第一缸，組織脫水液為第二缸，組織透明液為第三缸，組織浸蠟液為第四缸。在生物組織樣本進行處理時，生物組織樣本依次分別放入第一缸至第四缸，其操作要求如下:
[0045]第一缸浸泡時間:3?4h、第二缸浸泡時間:2.5?3h、第三缸浸泡時間:2?3h;第四缸浸泡時間:3?4h。以上為生物組織樣本組織處理過程(上述浸泡時間是指標準組織塊體積1.5X 1.0X0.3;浸泡時間可以根據不同組織、組織塊大小不同，做適當調整)。
[0046]實施例2
[0047]—種生物組織樣本制備套液，包括固定液和透明液，以體積份數計，
[0048]所述固定液包括無水乙醇50份、無水甲醇20份、聚乙二醇400 15份、純化水1份和表面活性劑.05份;和無水碳酸鈉3g/L和三氯乙酸6g/L
[0049]脫水液，以體積份數計，所述脫水液包括無水乙醇45份、叔丁醇15份、甲基環己烷10份、丙酮6份和異丙醇6份。
[0050]透明液包括D-檸烯90份、異丙醇10份和表面活性劑0.03?0.05份。
[0051 ]浸蠟液，以重量份數計，所述浸蠟液包括全精煉石蠟70份、半全精煉石蠟20份和精煉蜜蓋蜂蠟10份和石蠟改性劑，所述石蠟改性劑的用量與所述全精煉石蠟、半全精煉石蠟和精煉蜜蓋蜂蠟的總重量的比為3:1000。所述浸蠟液的制備方法具體為:將浸蠟液的原料熔化后混溶均勻，并于恒溫75°C下放置8?12h，常溫冷卻成型，以得到所述浸蠟液。
[0052]實施例3
[0053]一種生物組織樣本制備套液，包含:
[0054]固定液，以體積份數計，包括無水乙醇47份、無水甲醇22份、聚乙二醇40015份、純化水20份和表面活性劑0.04份;及無水碳酸鈉5g/L和三氯乙酸8g/L。
[0055]脫水液，以體積份數計，包括無水乙醇55份、叔丁醇25份、甲基環己烷20份、丙酮9份和異丙醇1份。
[0056]透明液，以體積份數計，包括D-檸烯90份、異丙醇10份和表面活性劑0.04份。
[0057]浸蠟液，以重量份數計，所述浸蠟液包括全精煉石蠟70份、半全精煉石蠟20份和精煉蜜蓋蜂蠟10份和石蠟改性劑，所述石蠟改性劑的用量與所述全精煉石蠟、半全精煉石蠟和精煉蜜蓋蜂蠟的總重量的比為3:1000。浸蠟液的制備方法具體為:將浸蠟液的原料熔化后混溶均勻，并于恒溫75°C下放置8?12h，常溫冷卻成型，以得到所述浸蠟液。
[0058]實施例4
[0059]一種生物組織樣本制備套液，包含:
[0060]固定液，以體積份數計，包括無水乙醇47份、無水甲醇22份、聚乙二醇40015份、冰醋酸3份、4份PBS緩沖液、乙酸5份、純化水20份和表面活性劑0.04份;及無水碳酸鈉5g/L和三氯乙酸8g/L。所述PBS緩沖液中的磷酸根濃度為0.05?0.07mol/L。本發明的固定液可快速對生物組織樣本實現固定，對生物組織樣本的活性物質影響很小。
[0061]脫水液，以體積份數計，包括無水乙醇55份、叔丁醇25份、甲基環己烷20份、丙酮9份和異丙醇1份。
[0062]透明液，以體積份數計，包括D-檸烯90份、異丙醇10份、丙酮5份、松節油3份和表面活性劑0.04份。透明液中全部組分均為無毒無害的化學試劑，共同對生物組織樣本起到透明作用。
[0063]浸蠟液，以重量份數計，所述浸蠟液包括全精煉石蠟70份、半全精煉石蠟20份和精煉蜜蓋蜂蠟10份、十六烷酸8份和石蠟改性劑，所述石蠟改性劑的用量與所述全精煉石蠟、半全精煉石蠟和精煉蜜蓋蜂蠟的總重量的比為3:1000。浸蠟液的制備方法具體為:將浸蠟液的原料熔化后混溶均勻，并于恒溫75°C下放置8?12h，常溫冷卻成型，以得到所述浸蠟液。
[0064]這里說明的模塊數量和處理規模是用來簡化本發明的說明的。對本發明的固定液、脫水液、透明液和浸蠟液的應用、修改和變化對本領域的技術人員來說是顯而易見的。
[0065]盡管本發明的實施方案已公開如上，但其并不僅僅限于說明書和實施方式中所列運用，它完全可以被適用于各種適合本發明的領域，對于熟悉本領域的人員而言，可容易地實現另外的修改，因此在不背離權利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發明并不限于特定的細節和這里示出與描述的圖例。
【主權項】
1.一種生物組織樣本制備套液，包括固定液和透明液，其特征在于，以體積份數計， 所述固定液包括無水乙醇45?50份、無水甲醇20?25份、聚乙二醇400 15份、純化水10?20份和表面活性劑0.03?0.05份； 所述透明液包括D-檸烯90份、異丙醇10份和表面活性劑0.03?0.05份。2.如權利要求1所述的生物組織樣本制備套液，其特征在于，還包括脫水液，以體積份數計，所述脫水液包括無水乙醇45?55份、叔丁醇15?25份、甲基環己烷10?20份、丙酮6?9份和異丙醇6?10份。3.如權利要求2所述的生物組織樣本制備套液，其特征在于，所述脫水液包括無水乙醇50份、叔丁醇20份、甲基環己烷15份、丙酮7份和異丙醇8份。4.如權利要求1所述的生物組織樣本制備套液，其特征在于，還包括浸蠟液，以重量份數計，所述浸蠟液包括全精煉石蠟70份、半全精煉石蠟20份和精煉蜜蓋蜂蠟10份和石蠟改性劑，所述石蠟改性劑的用量與所述全精煉石蠟、半全精煉石蠟和精煉蜜蓋蜂蠟的總重量的比為3:1000。5.如權利要求1所述的生物組織樣本制備套液，其特征在于，所述浸蠟液的制備方法具體為:將浸蠟液的原料熔化后混溶均勻，并于恒溫75°C下放置8?12h，常溫冷卻成型，以得到所述浸蠟液。6.如權利要求1所述的生物組織樣本制備套液，其特征在于，所述固定液中還包含無水碳酸鈉3?5g/L和三氯乙酸6?8g/L。7.如權利要求6所述的生物組織樣本制備套液，其特征在于，所述固定液中包括無水乙醇45份、無水甲醇25份、聚乙二醇400 15份和純化水15份，所述無水碳酸鈉的濃度為3g/L，所述三氯乙酸的濃度為7.5g/L。8.如權利要求1所述的生物組織樣本制備套液，其特征在于，所述固定液還包括冰醋酸3份、4份PBS緩沖液和乙酸5份，所述PBS緩沖液中的磷酸根濃度為0.05?0.07mol/L。9.如權利要求1所述的生物組織樣本制備套液，其特征在于，所述透明液還包括丙酮5份和松節油3份。10.如權利要求4所述的生物組織樣本制備套液，其特征在于，所述浸蠟液還包括十六烷酸8份。
【文檔編號】G01N1/28GK105823665SQ201610319967
【公開日】2016年8月3日
【申請日】2016年5月13日
【發明人】李明, 王德田
【申請人】北京九州柏林生物科技有限公司