一種應用于膠體金免疫層析的硝酸纖維素膜預處理方法
【技術領域】 [0001] 本發明屬于膠體金免疫層析技術，具體涉及一種應用于膠體金免疫層析的硝酸纖維素 膜預處理方法。
【背景技術】
[0002] 膠體金免疫層析技術以其特異性強、靈敏度高、操作簡捷等特點，在醫學、農牧業、 環境及食品檢測等領域被廣泛應用。膠體金技層析術的反應過程是一個由納米金顆粒、抗 原與抗體在試紙上結合層析的反應過程，在這個過程中每個環節的好壞都直接影響檢測結 果的準確性。
[0003] 硝酸纖維素膜材料因為擁有低成本、毛細流動穩定、高蛋白結合能力、處理相對容 易(有聚酯背襯的膜)和擁有不同的吸水速率和表面活性組分的特點，從而被大多數免疫層 析診斷產品系統選用。
[0004] 盡管硝酸纖維素膜有這些積極的特性，硝酸纖維素膜也有許多的缺陷。這些缺陷 包括:功能易受環境變化(例如濕度)影響，批內批間性能和重復性差。
[0005] 現有的膠體金免疫層析方法中，剛生產出的膜一般含有5-10%的水分。關于膜的老 化機理，有個理論支持，不過爭議比較大。理論認為：膜的老化是因為膜上的水分蒸發，使 膜變得疏水，帶電荷并變脆。儲存膜一般要求是避光，密封。過干或過濕都不利。在這種保存 條件下，一般可以放置兩年。濕度過低，膜上容易聚集靜電荷，點膜容易出現散點，導致測試 會出現疏水斑。濕度過高，膜上毛細作用加強，點膜容易引起CT線變寬甚至擴散。為了保證 點樣時膜濕度的均一性，改善批內重復性和批間重復性，本專利發明了一種新的硝酸纖維 素膜預處理方方法。
[0006]
【發明內容】
[0007] 1、本發明的目的是針對現有技術的上述不足，提供一種應用于膠體金免疫層析的 硝酸纖維素膜預處理方法。
[0008] 2、一種膠體金免疫層析的硝酸纖維素膜預處理方法，依次包括如下步驟：（1)粘 膜:硝酸纖維素膜與背襯、PVC板粘在一起（2)干燥:粘好的硝酸纖維素膜放入鼓風干燥箱 20°C-37°C干燥4-10小時(3)平衡:干燥后的硝酸纖維素膜放在溫度為18°C_28°C，濕度60%-70%狀態下，避光平衡1 -2小時(4 )點膜。
[0009] 3、所述的干燥溫度優選20~37°C，干燥時間優選4~10小時。
[0010] 4、所述的干燥溫度進一步優選20°C，干燥時間進一步優選4小時。
[0011] 5、所述的平衡溫度18°C_28°C，濕度60%-70%狀態下，避光平衡卜2小時。
[0012] 6、所述的平衡溫度進一步優選為20°C，濕度65%狀態下，避光平衡1小時。
[0013] 7、所述點膜為標準的臺式或者連續點膜機點膜。
[0014] 本發明的有益效果:硝酸纖維素膜通過預處理，批內硝酸纖維素膜在劃膜過程中， 劃膜液出現疏水斑率和擴散率明顯下降；硝酸纖維素膜通過預處理后制成的膠體金試紙 卡，加入樣品檢驗，其批內重復性和批間重復性得到進一步優化，可以明顯提高膠體金試紙 檢測的準確性和檢測效率。
[0015]
【具體實施方式】 [0016] 實施例1 1、粘膜:將PVC底板上的膜片位置的保護層揭掉，露出黏合劑，將硝酸纖維素膜與PVC底 板相應位置對齊黏貼。
[0017] 2、干燥:將粘好硝酸纖維素膜的PVC底板放入鼓風干燥箱內干燥，選擇溫度20°C， 干燥4小時，將干燥后的硝酸纖維素膜放入裝有干燥劑的鋁箱袋內密封保存，有效期為3個 月。
[0018] 3、平衡:取出干燥過的硝酸纖維素膜在溫度20 °C，濕度65%，避光的環境中放置1小 時平衡。
[0019] 4、質控線工作液的制備：以3%海藻糖的ros溶液做溶劑配制0.9mg/ml的羊抗鼠多 克隆抗體溶液。
[0020] 5、檢測線工作液的制備：以3%海藻糖的PBS溶液做溶劑配制0.7mg/ml的降鈣素原 單克隆抗體溶液。
[0021] 6、點膜:利用臺式點膜噴金機將事先配制好的質控線和檢測線工作液在平衡過的 硝酸纖維素膜上點膜，點膜速度為lul/cm，質控線與檢測線平行，兩線相隔6mm，細致均勻， 放入鼓風干燥箱內37 °C鼓風干燥20小時。
[0022] 實施例2 1、為了進一步說明運用在膠體金免疫層析法中的硝酸纖維素膜預處理的優越性，我 們采用了將同樣的膠體金免疫層析法，將硝酸纖維素膜預處理改成對硝酸纖維素膜不進行 預處理方法，運用到降鈣素原檢測試劑卡的實際應用中， 膠體金試紙條的具體制備方法如下： 1)包被膜的制備： a) 粘膜:將PVC底板上的膜片位置的保護層揭掉，露出黏合劑，將硝酸纖維素膜與PVC底 板相應位置對齊黏貼，將粘好的硝酸纖維素膜分成兩份，一份直接放入鋁箱袋內密封保存， 另一份按照實施例1方法對硝酸纖維素膜進行預處理； b) 質控線工作液的制備：以3%海藻糖的PBS溶液做溶劑配制0.9mg/ml的羊抗鼠多克隆 抗體溶液； c) 檢測線工作液的制備：以3%海藻糖的PBS溶液做溶劑配制0.7mg/ml的降鈣素原單克 隆抗體溶液； d) 點膜:利用臺式點膜噴金機將事先配制好的質控線和檢測線工作液分別在預處理過 的硝酸纖維素膜和未預處理過的硝酸纖維素膜上點膜，點膜速度為lul/cm，質控線與檢測 線平行，兩線相隔6mm，細致均勻，放入鼓風干燥箱內37°C鼓風干燥20小時； e)將上訴干燥后的硝酸纖維素膜放在裝有干燥劑的鋁箱袋內，密封保存。
[0023] 2)涂覆金標抗體的聚醋|吳的制備： a) 氯金酸水溶液的配制:將10g氯金酸1000ml的三蒸水溶解，配成1 %的水溶液，置于4 °C備用，有效期3個月； b) 檸檬酸三鈉的配制：用三蒸水溶解檸檬酸三鈉，配成1%的水溶液，置于4°C備用，有 效期7天； c) l %碳酸鉀水溶液的配制:將lg碳酸鉀用100ml用三蒸水溶解，置于4°C備用，有效期 為7天； d) 金標抗體保存液的配制:將15g的蔗糖，20u 1的疊氮鈉，在100ml的pH=7.4的1 % BSA溶 解，置于4°C備用，有效期為7天； e) 膠體金的顆粒的制備：用三蒸水將1 %氯金酸稀釋成0.01 %，置于95°C反應10 分鐘，加入lml檸檬酸三鈉，繼續反應15分鐘，待膠體金溶液顏色由藍經紫變紅后，冷卻 后加入2ml 1 %碳酸鉀溶液備用。外觀廊純凈，透亮，無沉淀和漂浮物； f) 金標抗體的制備：用1%碳酸鉀溶液調節膠體金pH值至7.5,加入適合的降鈣素原單 克隆抗體溶液充分混勻，調節pH至5.0，反應10~30分鐘后，冷卻后，邊攪拌邊用1%碳酸鉀水 溶液緩慢滴加，調節溶液PH至7.5，穩定攪拌10分鐘，然后置于25°C水浴反應30分鐘后再加 入5%BSA，封閉20分鐘后，離心取沉淀，用BSA恢復其終濃度為1 %，4°C保存備用； g) 將標記好抗體膠體金均勻的鋪在聚酯膜上，噴量為l.Oul/cm，干燥，封袋，備用。
[0024] 3)樣品墊的處理 將樣品墊用100mM PBs緩沖液浸泡數小時，取出干燥后。
[0025] 4)膠體金試紙條的組裝： 底襯1，樣品墊2和吸水紙5是本領域通用的部件。將上述樣品墊2、涂覆有金標抗體的聚 酯膜3、包被膜4及吸水紙5順次相互搭接粘貼得到試紙板，最后將試紙板切割成不同寬度的 試紙條即可。
[0026]將經預處理過的硝酸纖維素膜和未處理過的硝酸纖維素膜制備好的試紙條進行 重復性的對比。通過對比，我們可以看到經處理過的硝酸纖維素膜的疏水斑率和擴散率比 未處理過的硝酸纖維素膜低；同時，經預處理過的硝酸纖維素膜制成的試紙卡的批內重復 性和我批間重復性明顯低于未處理過的硝酸纖維素膜制成的試紙卡，我們從中得出硝酸纖 維素膜經過處理后制成的膠體金試紙，其質量和準確度較未處理的硝酸纖維素膜有很大提 高。對比數據如下： 表一、硝酸纖維素膜無預處理
表二、硝酸纖維素膜有預處理
備注:硝酸纖維素膜局部過于干燥就會產生疏水斑，過于濕潤劃膜線就會擴散開來，以 30cm長度為一條的硝酸纖維素膜計算，出現斷點的總長度除以30得到百分位數即為疏水斑 率，劃膜寬度為1mm，超過1.5mm區域的總長度除以30得到百分位素即為擴散率。
[0027] 在以上的實施例中，未詳細描述的各種過程和方法是本領域中公知的常規方法。
[0028] 以上所述，僅是本發明的較佳實施例而己，并非是對本發明作其它形式的限制，任 何熟悉本專業的技術人員可能利用上述揭示的技術內容加以變更或改型為等同變化的等 效實施例。但是凡是未脫離本發明技術方案內容，依據本發明的技術實質對以上實施例所 作的任何簡單修改、等同變化與改型，仍屬于本發明技術方案的保護范圍。
【主權項】
1. 一種應用于膠體金免疫層析的硝酸纖維素膜預處理方法，其特征在于：依次包括如 下步驟:粘膜:硝酸纖維素膜與背襯、PVC板粘在一起；（2)干燥:粘好的硝酸纖維素膜放入 鼓風干燥箱中干燥；（3)平衡；（4)點膜。2. 根據權利要求1所述的一種應用于膠體金免疫層析的硝酸纖維素膜預處理方法，其 特征在于:所述的干燥條件為鼓風干燥機中，溫度為20°C_37°C，干燥時間為4-10分鐘。3. 根據權利要求1所述的一種應用于膠體金免疫層析的硝酸纖維素膜預處理方法，其 特征在于:所述的平衡條件為:避光或者紅光條件，溫度為18°C_28°C，濕度為60%-70%，平衡 時間為1-2小時。4. 根據權利要求1所述的一種應用于膠體金免疫層析的硝酸纖維素膜預處理方法，其 特征在于:所述的點膜可以用連續點膜機、臺式點膜機設備點膜。
【專利摘要】本發明公開了一種應用于膠體金免疫層析的硝酸纖維素膜預處理方法，該方法這一次包括如下步驟：1、硝酸纖維素膜與背襯、PVC板粘在一起；2、粘好的硝酸纖維素膜放入鼓風干燥箱20°C-37°C干燥4-10小時；3、干燥后的硝酸纖維素膜放在溫度為18℃-28℃，濕度60%-70%狀態下，避光平衡1-2小時；4、點膜，本發明硝酸纖維素酶預處理方法一方面提高點膜線的質量，另一方面又產品的重復性和批間差。
【IPC分類】G01N33/531
【公開號】CN105606796
【申請號】CN201610066693
【發明人】王峰, 王玉立, 卜天
【申請人】蘇州東尼生物技術有限公司
【公開日】2016年5月25日
【申請日】2016年2月1日