復方氨基酸注射液18aa-ii含量測定方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及藥品制備領域，特別涉及一種復方氨基酸注射液18AA-II含量測定方 法。
[0002]
【背景技術】
[0003] 氨基酸是蛋白質的基本結構單位和生物代謝過程中的重要物質，氨基酸分析技術 對蛋白質化學、生物化學和整個生命科學研究以及產品開發、質量控制盒生產管理等具有 重要意義，廣泛地應用于食品加工、醫藥衛生行業的醫藥、食品、保健品等的分析。其分析測 定方法，按照檢測方法可分為化學分析法、電化學分析法、分光光度法等；按照衍生反應的 先后，可分為柱前衍生和柱后衍生。
[0004] 以上分析方法中，化學分析法、電化學分析法以及分光光度法的專屬性差，不能實 現多種氨基酸同時分離測定；柱前衍生法，雖然可以使用自動進樣器與色譜聯用實現多種 氨基酸的分離測定，但是衍生技術較為復雜，周期較長，衍生條件不易控制，重復性較差，難 以推廣。
[0005] 氨基酸的分離分析方法很多，近年一般認為離子交換色譜法是比較準確的定量方 法，氨基酸分析儀和HPLC法使用較為普遍。但是HPLC法衍生技術較為復雜，周期較長，衍 生條件不易控制，重復性較差，難以推廣。相對于HPLC法，氨基酸分析儀靈敏快速提供數據 準確可靠：分辨率高操作簡單分析周期短；保留時間，峰面積，重現性好檢出限可達3pmol， 不存在液級衍生物的問題，峰型顯高斯分布，體系穩定快。
[0006] 常規的氨基酸含量測定，通常采用的都是氨基酸分析儀儀器廠家本身推薦的分離 條件，包括緩沖液pH值、緩沖液變換時間以及柱溫等等。
[0007] 但是，在使用氨基酸分析儀對復方氨基酸注射液（18AA-II)進行含量測定時，由于 胱氨酸含量較小，并且胱氨酸出峰時間正好在流動相轉化時間附近，使用儀器本身的分離 條件進行試驗，導致胱氨酸與纈氨酸分析效果不佳，達不到試驗對組分分離度的要求，同時 胱氨酸含量波動較大，致使含量測定結果準確度不佳，重現性差。
[0008]
【發明內容】
[0009] 針對現有技術的不足，本發明提供一種復方氨基酸注射液18AA-II含量測定方 法。
[0010] 為實現上述目的，本發明采用的技術方案如下： 一種復方氨基酸注射液18AA-II含量測定方法，采用離子交換樹脂柱，柱溫57°C，流 量為0· 4ml/min，檢測波長是570nm和440nm，流動相是由緩沖液Bl、B2、B3、B4、B5組成， 洗脫時間為60分鐘，0-2. 5分鐘采用100%的B1進行洗脫，2. 6-5分鐘采用100%的B2進 行洗脫，5. 1-13. 6分鐘采用100%的B3進行洗脫，13. 7-27. 8分鐘采用100%的Μ進行洗 脫，27. 9-33. 8分鐘采用100%的B5進行洗脫，33. 9-34. 8分鐘采用100%的B2進行洗脫， 34. 9-53. 8分鐘采用100%的B1進行洗脫； 所述緩沖液B1組成為6. 19g檸檬酸鈉· 2H20、1M NaOH 6-7 mL、5. 66g氯化鈉、19. 80g 檸檬酸· H20、135. 0ml乙醇，用蒸餾水將其配制成1000mL溶液； 所述緩沖液B2組成為7. 74g檸檬酸鈉· 2H20、1M NaOH 20-22 mL、7. 07g氯化鈉、 22. 00g檸檬酸· H20、25. 0ml乙醇，用蒸餾水將其配制成1000mL溶液； 所述緩沖液B3組成為13. 31g檸檬酸鈉 · 2H20、3. 74g氯化鈉、12. 80g檸檬酸· H20、 9. 00ml乙醇，用蒸餾水將其配制成1000mL溶液； 所述緩沖液Μ組成為26. 67g檸檬酸鈉· 2H20、54. 35g氯化鈉、6. 10g檸檬酸· H20，用 蒸餾水將其配制成l〇〇〇mL溶液； 所述緩沖液B5組成為8. 00g NaOH、100. 0ml乙醇，用蒸餾水將其配制成1000mL溶液。
[0011] 本發明的有益效果： 本發明在緩沖液從B2向B3轉換的時間推后0. 5min，在緩沖液從B3向Μ轉換的時間 推后0. 8min，分離柱溫度達到57度時，各組分間的分離效果更好，使胱氨酸與纈氨酸二者 分離度滿足含量測定的要求，同時使得胱氨酸受流動相轉換的干擾降低，使其在含量較低 的情況下也能準確定量，最終實現了氨基酸分析儀對復方氨基酸注射液（18AA-II) 16種氨 基酸含量的準確測定。
【附圖說明】
[0012] 附圖1為氨基酸分析儀推薦的分離條件的分離圖譜； 附圖2為本發明的分離條件的分離圖譜。
【具體實施方式】
[0013] 以下結合實施例進一步闡述本發明的【具體實施方式】如下，分離圖譜如圖2所示： 采用日立L-8900氨基酸分析儀 試驗樣品：復方氨基酸注射液（18AA-II)(華仁藥業股份有限公司生產） 對照品：來源中檢所，批號140624-200805,純度100% ; 柱壓：泵1的柱壓為llMpa左右，泵2柱壓為2. OMpa ; 上樣量：10 μ L 采用離子交換樹脂柱(購自日立)，柱溫57°C，流量為0. 4ml/min，檢測波長是570nm和 440nm，流動相是由緩沖液B1、B2、B3、B4、B5組成，洗脫時間為60分鐘，0-2. 5分鐘采用100% 的B1進行洗脫，2. 6-5分鐘采用100%的B2進行洗脫，5. 1-13. 6分鐘采用100%的B3進行 洗脫，13. 7-27. 8分鐘采用100%的Μ進行洗脫，27. 9-33. 8分鐘采用100%的B5進行洗脫， 33. 9-34. 8分鐘采用100%的Β2進行洗脫，34. 9-53. 8分鐘采用100%的Β1進行洗脫； 表1 :洗脫體系
注：表中的％指體積百分比。
[0014] 所述緩沖液B1組成為6. 19g檸檬酸鈉· 2H20、1M NaOH 6-7 mL、5. 66g氯化鈉、 19. 80g檸檬酸· H20、135. 0ml乙醇，用蒸餾水將其配制成lOOOmL溶液； 所述緩沖液B2組成為7. 74g檸檬酸鈉· 2H20、1M NaOH 20-22 mL、7. 07g氯化鈉、 22. 00g檸檬酸· H20、25. 0ml乙醇，用蒸餾水將其配制成lOOOmL溶液； 所述緩沖液B3組成為13. 31g檸檬酸鈉· 2H20、3. 74g氯化鈉、12. 80g檸檬酸· H20、 9. 00ml乙醇，用蒸餾水將其配制成lOOOmL溶液； 所述緩沖液Μ組成為26. 67g檸檬酸鈉· 2H20、54. 35g氯化鈉、6. 10g檸檬酸· H20，用 蒸餾水將其配制成l〇〇〇mL溶液； 所述緩沖液B5組成為8. 00g NaOH、100. 0ml乙醇，用蒸餾水將其配制成lOOOmL溶液。
[0015] 表2:緩沖液的配制表
本發明針對緩沖液的變換時間以及分離柱的柱溫等條件進行了一系列的條件篩選。首 先將緩沖液從B2向B3轉換的時間在4. 5min的條件下分別提前和推后0. 5min，發現在推 后0. 5分鐘的情況下也就是轉換時間在5. Omin，同時將B3向Μ轉換的時間推后0. 8min， 也就是由原來的12. 9min推后到13. 7min條件下分離效果有所改善，胱氨酸受流動相轉換 的含量波動較小，重現性變佳。
[0016] 圖1為日立L-8900氨基酸分析儀推薦條件分離，可看出胱氨酸與前后兩種氨基酸 的分離效果都不是太好，自身峰形也不是太好看，無法進行準確定量分析。
[0017] 圖2為本發明的分離條件的圖譜，可明顯看出本發明使胱氨酸與前后兩個氨基酸 達到有效分離，優化了峰形，減小了因流動相轉換時間對胱氨酸定量的影響，從而提高了其 含量測定的準確性和重現性。
【主權項】
1. 一種復方氨基酸注射液18AA-II含量測定方法，其特征在于，采用離子交換樹脂 柱，柱溫57°C，流量為0· 4ml/min，檢測波長是570nm和440nm，流動相是由緩沖液Bl、B2、 B3、B4、B5組成，洗脫時間為60分鐘，0-2. 5分鐘采用100%的B1進行洗脫，2. 6-5分鐘采用 100%的B2進行洗脫，5. 1-13. 6分鐘采用100%的B3進行洗脫，13. 7-27. 8分鐘采用100%的 B4進行洗脫，27. 9-33. 8分鐘采用100%的B5進行洗脫，33. 9-34. 8分鐘采用100%的B2進 行洗脫，34. 9-53. 8分鐘采用100%的B1進行洗脫； 所述緩沖液B1組成為6. 19g檸檬酸鈉· 2H20、1M NaOH 6-7 mL、5. 66g氯化鈉、19. 80g 檸檬酸· H20、135. 0ml乙醇，用蒸餾水將其配制成1000mL溶液； 所述緩沖液B2組成為7. 74g檸檬酸鈉· 2H20、1M NaOH 20-22 mL、7. 07g氯化鈉、 22. 00g檸檬酸· H20、25. 0ml乙醇，用蒸餾水將其配制成1000mL溶液； 所述緩沖液B3組成為13. 31g檸檬酸鈉· 2H20、3. 74g氯化鈉、12. 80g檸檬酸· H20、 9. 00ml乙醇，用蒸餾水將其配制成1000mL溶液； 所述緩沖液Μ組成為26. 67g檸檬酸鈉· 2H20、54. 35g氯化鈉、6. 10g檸檬酸· H20，用 蒸餾水將其配制成l〇〇〇mL溶液； 所述緩沖液B5組成為8. 00g NaOH、100. 0ml乙醇，用蒸餾水將其配制成lOOOmL溶液。
【專利摘要】本發明涉及藥品制備領域，特別涉及一種復方氨基酸注射液18AA-II含量測定方法，在緩沖液從B2向B3轉換的時間推后0.5min，在緩沖液從B3向B4轉換的時間推后0.8min，分離柱溫度達到57度時，各組分間的分離效果更好，使胱氨酸與纈氨酸二者分離度滿足含量測定的要求，同時使得胱氨酸受流動相轉換的干擾降低，使其在含量較低的情況下也能準確定量，最終實現了氨基酸分析儀對復方氨基酸注射液（18AA-II）16種氨基酸含量的準確測定。
【IPC分類】G01N30/06
【公開號】CN105588900
【申請號】CN201410579008
【發明人】孔文靜, 陸宇, 劉春霞, 鄒姍姍
【申請人】華仁藥業股份有限公司
【公開日】2016年5月18日
【申請日】2014年10月24日