參芎葡萄糖注射液中單糖檢測方法
【技術領域】:
[0001] 本發明涉及參芎葡萄糖注射液檢測技術領域,特別涉及參芎葡萄糖注射液中單糖 檢測方法,該方法檢測樣品重現性好,準確度高。在檢測階段,主要涉及樣品前處理。
【背景技術】:
[0002] 單糖組成分析是糖結構分析的一項重要內容.近年來發展迅速的柱前衍生化方法 是使糖類物質帶上紫外或熒光基團,用HPLC進行分離,用紫外或熒光檢測,這種方法具有分 離效率高、分析時間短、進樣量少、檢測限低及多模式等特點。
【發明內容】
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[0003] 為了提高參芎葡萄糖注射液的質量標準,加強了對參芎葡萄糖注射劑安全性檢測 管理,本發明所要解決的技術問題在于提供一種參芎葡萄糖注射液中單糖檢測方法,其在 保證檢測準確的同時,方便檢驗工作的開展。
[0004] 本發明所要解決的技術問題可以通過以下技術方案來實現:
[0005] 參芎葡萄糖注射劑中單糖的檢測方法,其特征在于,由以下步驟組成:
[0006] (1)設置色譜條件步驟:
[0007] 色譜柱 C18(250mmX4.6mm,5ym);流動相:0.1mol/L 磷酸二氫鉀緩沖鹽(PH6.7) (Α) -乙腈(Β),梯度洗脫,流速:1. OmL/min;柱溫:30°C ;檢測波長:250nm;
[0008] (2)對照品溶液的制備步驟:
[0009] 精密稱取葡萄糖對照品10.Omg至10ml量瓶中,加水使溶解并稀釋至刻度,搖勻;即 得。
[0010] (3)供試品溶液的制備步驟:精密吸取注射液稀釋品樣品供試品100~200yL,至具 塞離心管中,加入0 · 3mol/L NaOHlOO~200yL,充分混勻,加0 · 5mol/LPMP甲醇溶液100~200 yL,混勻后置于70°C水浴加熱10~30min,取出放涼,加0.3mol/LHCl 100~200yL,加純化水 500~1240yL,加氯仿0.5~2mL,搖勾,離心5min,棄去氯仿層。重復萃取3次。水層過0.45μηι 濾膜,即得;
[0011] (4)檢測步驟
[0012] 精密量取上述對照品與供試品溶液各10ul,進樣檢測。
[0013] 本發明屬于新增的檢測方法,而且重現性好,準確度高,簡便快速,特別適合實驗 室對其進行的檢測工作,提高了參芎葡萄糖注射劑質量標準,加強了對參芎葡萄糖注射劑 安全性檢測管理,同時也提高了用藥安全性。
【具體實施方式】
[0014] 通過下面給出的本發明的具體實施例可以進一步清楚地了解本發明,但它們不是 對本發明的限定。
[0015] 實施例1
[0016] 對照品的制備:
[0017] 精密稱取葡萄糖對照品10.Omg至10ml量瓶中,加水使溶解并稀釋至刻度,搖勻;即 得。
[0018] 供試品溶液制備:
[0019] 精密吸取注射液稀釋品樣品供試品100μL,至具塞離心管中,加入0.3mο 1 /L NaOHlOOyL,充分混勻,加0.5mol/LPMP甲醇溶液100yL,混勻后置于70°C水浴加熱30min,取 出放涼,加0.3mol/LHC1200yL,加純化水500yL,加氯仿0.5mL,搖勻,離心5min,棄去氯仿層。 重復萃取3次。水層過0.45μηι濾膜。
[0020] 標準曲線的制備:
[0021] 精密量取葡萄糖對照品適量,加水制成5個不同濃度的對照品溶液。在250nm測定 其吸收值。以濃度為縱坐標,吸收度為橫坐標,繪制標準曲線。
[0022]含量測定:
[0023] 色譜柱 C18(250mmX4.6mm,5ym);流動相:0.1mol/L 磷酸二氫鉀緩沖鹽(ρΗ6·7) (Α) -乙腈(Β),梯度洗脫,流速:1. OmL/min;柱溫:30°C ;檢測波長:250nm。精密量取上述對 照品與供試品溶液各l〇ul,進樣測定,按上述標準曲線計算含量,檢測結果見表1
[0024] 表 1
[0027] 實施例2 [0028] 對照品的制備:
[0029]精密稱取葡萄糖對照品10.Omg至10ml量瓶中,加水使溶解并稀釋至刻度,搖勻;即 得。
[0030] 供試品溶液制備:
[0031] 精密吸取注射液稀釋品樣品供試品12 0 μ L,至具塞離心管中,加入0.3 m ο 1 / L Na0H120yL,充分混勻,加0.5mol/LPMP甲醇溶液120yL,混勻后置于70°C水浴加熱30min,取 出放涼,加0.3mol/LHCl 180yLl中和堿液,加純化水700yL,加氯仿lmL,搖勻,離心5min,棄 去氯仿層。重復萃取3次。水層過0.45μηι濾膜,
[0032] 標準曲線的制備:
[0033]精密量取葡萄糖對照品適量,加水制成5個不同濃度的對照品溶液。在250nm測定 其吸收值。以濃度為縱坐標,吸收度為橫坐標,繪制標準曲線。
[0034]含量測定:
[0035]色譜柱 C18(250mmX4.6mm,5ym);流動相:0.1mol/L 磷酸二氫鉀緩沖鹽(ρΗ6·7) (Α) -乙腈(Β),梯度洗脫,流速:1. OmL/min;柱溫:30°C ;檢測波長:250nm。精密量取上述對 照品與供試品溶液各l〇ul,進樣測定,按上述標準曲線計算含量,檢測結果見表2
[0036]表2
[0038] 實施例3
[0039] 對照品的制備:
[0040] 精密稱取葡萄糖對照品10.Omg至10ml量瓶中,加水使溶解并稀釋至刻度,搖勻;即 得。
[0041 ]供試品溶液制備:
[0042] 精密吸取注射液稀釋品樣品供試品15 0 μ L,至具塞離心管中,加入0.3 m ο 1 / L Na0H150yL,充分混勻,加0.5mol/LPMP甲醇溶液140yL,混勻后置于70°C水浴加熱30min,取 出放涼,加0.3mol/LHCl 150yL,加純化水900yL,加氯仿1.5mL,搖勻,離心5min,棄去氯仿 層。重復萃取3次。水層過0.45μηι濾膜,
[0043] 標準曲線的制備:
[0044]精密量取葡萄糖對照品適量,加水制成5個不同濃度的對照品溶液。在250nm測定 其吸收值。以濃度為縱坐標,吸收度為橫坐標,繪制標準曲線。
[0045] 含量測定:
[0046] 色譜柱 C18(250mmX4.6mm,5ym);流動相:0.1mol/L 磷酸二氫鉀緩沖鹽(ρΗ6·7) (Α) -乙腈(Β),梯度洗脫,流速:1. OmL/min;柱溫:30°C ;檢測波長:250nm。精密量取上述對 照品與供試品溶液各l〇ul,進樣測定,按上述標準曲線計算含量,檢測結果見表3
[0047] 表 3
[0049] 實施例4
[0050] 對照品的制備:
[0051 ]精密稱取葡萄糖對照品10.Omg至10ml量瓶中,加水使溶解并稀釋至刻度,搖勻;即 得。
[0052]供試品溶液制備:
[0053] 精密吸取注射液稀釋品樣品供試品18 0 μ L,至具塞離心管中,加入0.3 m ο 1 / L Na0H180yL,充分混勻,加0.5mol/LPMP甲醇溶液150yL,混勻后置于70°C水浴加熱30min,取 出放涼,加0.3mol/LHCl 120yL,加純化水lOOOyL,加氯仿1.8mL,搖勻,離心5min,棄去氯仿 層。重復萃取3次。水層過0.45μηι濾膜,
[0054] 標準曲線的制備:
[0055] 精密量取葡萄糖對照品適量,加水制成5個不同濃度的對照品溶液。在250nm測定 其吸收值。以濃度為縱坐標,吸收度為橫坐標,繪制標準曲線。
[0056] 含量測定:
[0057]色譜柱 C18(250mmX4.6mm,5ym);流動相:0.1mol/L 磷酸二氫鉀緩沖鹽(ρΗ6·7) (Α) -乙腈(Β),梯度洗脫,流速:1. OmL/min;柱溫:30°C ;檢測波長:250nm。精密量取上述對 照品與供試品溶液各l〇ul,進樣測定,按上述標準曲線計算含量,檢測結果見表4
[0058]表4
[0060] 實施例5 [0061 ] 對照品的制備:
[0062]精密稱取葡萄糖對照品10.Omg至10ml量瓶中,加水使溶解并稀釋至刻度,搖勻;即 得。
[0063]供試品溶液制備:
[0064] 精密吸取注射液稀釋品樣品供試品2 0 0μL,至具塞離心管中,加入0.3mο 1 / L Na0H200yL,充分混勻,加0.5mol/LPMP甲醇溶液160yL,混勻后置于70°C水浴加熱30min,取 出放涼,加〇.3mol/LHCl 100yL,加純化水1240yL,加氯仿2mL,搖勾,離心5min,棄去氯仿層。 重復萃取3次。水層過0.45μηι濾膜,
[0065] 標準曲線的制備:
[0066]精密量取葡萄糖對照品適量,加水制成5個不同濃度的對照品溶液。在250nm測定 其吸收值。以濃度為縱坐標,吸收度為橫坐標,繪制標準曲線。
[0067] 含量測定:
[0068] 色譜柱 C18(250mmX4.6mm,5ym);流動相:0.1mol/L 磷酸二氫鉀緩沖鹽(ρΗ6·7) (Α) -乙腈(Β),梯度洗脫,流速:1. OmL/min;柱溫:30°C ;檢測波長:250nm。精密量取上述對 照品與供試品溶液各l〇ul,進樣測定,按上述標準曲線計算含量,檢測結果見表5
[0069] 表5
[0071]根據上述實驗數據分析,本發明能夠有效地檢測參芎葡萄糖注射液中單糖的含 量,而且樣品重復性好,準確度高,并且更能夠保證檢測結果的準確性、有效性。提高了參芎 葡萄糖注射劑質量標準,加強了對參芎葡萄糖注射劑安全性檢測管理。
【主權項】
1.參芎葡萄糖注射劑中單糖的檢測方法,其特征在于,由以下步驟組成: (1) 設置色譜條件步驟: 色譜柱C18(250mmX 4.6mm,5μπι);流動相:0.1 moVL磷酸二氫鉀緩沖鹽(pH6.7) (A) -乙 腈(B),梯度洗脫,流速:1. OmL/min;柱溫:30°C ;檢測波長:250nm; (2) 對照品洛液的制備步驟: 精密稱取葡萄糖對照品10.〇mg至10ml量瓶中,加水使溶解并稀釋至刻度,搖勾;即得。 (3) 供試品溶液的制備步驟:精密吸取注射液稀釋品樣品供試品100~200yL,至具塞離 心管中,加入0 · 3mol/L NaOHlOO~200yL,充分混勻,加0 · 5mol/LPMP甲醇溶液100~200yL, 混勻后置于70°C水浴加熱10~30min,取出放涼,加 O.3mol/LHC1 100~200yL,加純化水500 ~1240yL,加氯仿0.5~2mL,搖勾,離心5min,棄去氯仿層。重復萃取3次。水層過0.45μηι濾 膜,即得; (4) 檢測步驟 精密量取上述對照品與供試品溶液各l〇ul,進樣檢測。
【專利摘要】本發明涉及參芎葡萄糖注射液中單糖的檢測方法,包括如下步驟(1)設置色譜條件步驟;(2)對照品溶液的制備步驟;(3)供試品溶液的制備步驟;(4)檢測步驟。本發明屬于新增的檢測方法,而且重現性好,準確度高,簡便快速,特別適合實驗室對其進行的檢測工作,提高了參芎葡萄糖注射劑質量標準,加強了對參芎葡萄糖注射劑安全性檢測管理,同時也提高了用藥安全性。
【IPC分類】G01N30/02
【公開號】CN105572254
【申請號】CN201510976077
【發明人】葉湘武, 羅斌, 畢昌瓊, 簡芳, 趙曲
【申請人】貴州景峰注射劑有限公司, 上海景峰制藥有限公司
【公開日】2016年5月11日
【申請日】2015年12月22日