一種快速測定微生物培養液濁度比色卡的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于基因工程技術領域，具體涉及一種快速測定微生物培養液濁度比色卡 的制作方法。
【背景技術】
[0002] 目前，以基因工程藥物為主導的基因工程應用產業已成為全球發展最快的產業之 一，具有非常廣闊的發展前景。大腸桿菌因其易于操作、遺傳背景清楚、生產成本低和表達 水平高而被廣泛應用于外源基因的克隆表達。在利用大腸桿菌作為基因工程基礎工具的過 程中，經常需要測定大腸桿菌培養物的濁度，即在分光光度計上，于波長為600nm處測試大 腸桿菌培養液的吸光度。常見的次操作，包括大腸桿菌感受態的制備過程和外源蛋白的誘 導表達步驟。特別在外援蛋白誘導表達時判斷大腸桿菌濁度尤為重要，如果誘導時期過早， 可能導致重組蛋白的表達量低，而誘導時期過晚，可能導致菌液中營養物質不足，導致重組 蛋白表達量低或形成無活性的包涵體。傳統的判斷方法為依賴分光光度計，需要將細菌培 養液取出后加入到比色皿中進行測量，結果雖然準確，但是操作過程需要頻繁打開處于無 菌狀態的培養瓶，容易對培養物造成污染。而有經驗的操作者往往依靠肉眼初步判斷培養 液濁度后，估計培養物濁度達到技術區間后(0D600 = 0.6~0.8)再在機器上進行一次精確 測量。
【發明內容】
[0003] 本發明的目的是解決現有微生物濁度的測定方法存在操作過程頻繁、易對培養物 造成污染的技術問題，提供一種快速測定微生物培養液濁度比色卡的制作方法。
[0004] 為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案為：
[0005] -種快速測定微生物培養液濁度比色卡的制作方法，包括以下步驟：
[0006] 1)取無菌錐形搖瓶置于超凈臺上，向錐形搖瓶中依次倒入50ml LB培養基和50ul 卡那霉素，接入l〇ul菌種，再將錐形搖瓶放置搖床上，于37°C的溫度和180r/min的轉速下進 行培養；
[0007] 2)在培養過程中，利用分光光度計測定培養液的濁度，在濁度等于0.1、0.2、0.3、 0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9和1.0時分別取樣并分別置于10個無色玻璃小瓶中，使無色玻璃 小瓶中培養液液面高度等于2.0cm，向各無色玻璃小瓶的培養液中加入疊氮化鈉使其濃度 達到0.1 %以終止微生物生長，最后在各無色玻璃小瓶上標注濁度編號；
[0008] 3)根據RGB顏色模式，A = Rx:Gy:Bz，其中A表示濁度;R、G、B表示紅綠藍三色;x、y、z 表示比例；制作一條高度為2.0cm的黑白顏色漸變比色條帶，該黑白顏色漸變比色條帶的0 < x，y，z < 255;
[0009] 4)將步驟2)中標注濁度編號的無色玻璃小瓶與比色條帶的顏色進行比較并標記 濁度值，即將步驟2)中裝有濁度等于0.1培養液的無色玻璃小瓶在比色條帶的不同顏色間 移動，當透過無色玻璃小瓶剛好無法看見比色條帶的顏色時，則比色條帶的這一位置對應 的濁度值即為0.1，在比色條帶這一位置標記0.1;按照上述操作，依次分別標記比色條帶濁 度值等于〇.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9和1.0的位置，即制作出快速鑒定微生物培養 液濁度的比色卡。
[0010]使用本發明制作的比色卡進行微生物培養液濁度的測定，可在不打開無菌培養瓶 的情況下，快速測得到微生物培養液的濁度，測量精確度可以達到±0.1，解決了現有微生 物濁度的測定方法存在操作過程頻繁、易對培養物造成污染的技術問題。因此，與【背景技術】 向比，本發明具有不會對培養物造成污染且操作方法簡便的優點。
[0011]為表明本發明具有以上優點，分別通過本發明制作的濁度比色卡和分光光度計對 待測大腸桿菌培養液進行濁度測試，比對數據如下：
[0013] 通過上述數據可知，通過本發明制作的濁度比色卡對待測大腸桿菌培養液進行濁 度測試的測量精確度很高。
【附圖說明】
[0014] 附圖是本發明制作的濁度比色卡的示意圖。
【具體實施方式】
[0015] 本實施例中的一種快速測定微生物培養液濁度比色卡的制作方法，包括以下步 驟：
[0016] 1)取無菌錐形搖瓶置于超凈臺上，向錐形搖瓶中依次倒入50ml LB培養基和50ul 卡那霉素，接入l〇ul菌種，再將錐形搖瓶放置搖床上，于37°C的溫度和180r/min的轉速下進 行培養；
[0017] 2)在培養過程中，利用分光光度計測定培養液的濁度，在濁度等于0.1、0.2、0.3、 0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9和1.0時分別取樣并分別置于10個無色玻璃小瓶中，使無色玻璃 小瓶中培養液液面高度等于2.0cm，向各無色玻璃小瓶的培養液中加入疊氮化鈉使其濃度 達到0.1 %以終止微生物生長，最后在各無色玻璃小瓶上標注濁度編號；
[0018] 3)根據RGB顏色模式，A = Rx:Gy:Bz，其中A表示濁度;R、G、B表示紅綠藍三色;x、y、z 表示比例，制作一條高度為2.0cm的黑白顏色漸變比色條帶，該黑白顏色漸變比色條帶的0 < x，y，z < 255;
[0019] 4)將步驟2)中標注濁度編號的無色玻璃小瓶與比色條帶的顏色進行比較并標記 濁度值，即將步驟2)中裝有濁度等于0.1培養液的無色玻璃小瓶在比色條帶的不同顏色間 移動，當透過無色玻璃小瓶剛好無法看見比色條帶的顏色時，則比色條帶的這一位置對應 的濁度值即為0.1，在比色條帶這一位置標記0.1;按照上述操作，依次分別標記比色條帶濁 度值等于〇.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9和1.0的位置，即制作出快速鑒定微生物培養 液濁度的比色卡。
[0020]采用本發明制作的濁度比色卡進行微生物培養液濁度測定的方法為:將待測微生 物培養液裝入無色玻璃小瓶中，透過無色玻璃小瓶中裝的待測微生物培養液觀察濁度比色 卡，在不同顏色間移動，當剛好無法看見比色卡某一位置的顏色時，則比色卡這一位置標注 的數值即為該微生物培養液的濁度。
【主權項】
1. 一種快速測定微生物培養液濁度比色卡的制作方法，其特征在于:包括以下步驟： 1) 取無菌錐形搖瓶置于超凈臺上，向錐形搖瓶中依次倒入50ml LB培養基和50ul卡那 霉素，接入l〇ul菌種，再將錐形搖瓶放置搖床上，于37°C的溫度和180r/min的轉速下進行培 養； 2) 在培養過程中，利用分光光度計測定培養液的濁度，在濁度等于0.1、0.2、0.3、0.4、 0.5、0.6、0.7、0.8、0.9和1.0時分別取樣并分別置于10個無色玻璃小瓶中，使無色玻璃小瓶 中培養液液面高度等于2.0cm，向各無色玻璃小瓶的培養液中加入疊氮化鈉使其濃度達到 0.1 %以終止微生物生長，最后在各無色玻璃小瓶上標注濁度編號； 3) 根據RGB顏色模式，A = Rx:Gy:Bz，其中A表示濁度;R、G、B表示紅綠藍三色;x、y、z表示 比例；制作一條高度為2.0cm的黑白顏色漸變比色條帶，該黑白顏色漸變比色條帶的0<x， y,ζ < 255； 4) 將步驟2)中標注濁度編號的無色玻璃小瓶與比色條帶的顏色進行比較并標記濁度 值，即將步驟2)中裝有濁度等于0.1培養液的無色玻璃小瓶在比色條帶的不同顏色間移動， 當透過無色玻璃小瓶剛好無法看見比色條帶的顏色時，則比色條帶的這一位置對應的濁度 值即為0.1，在比色條帶這一位置標記0.1;按照上述操作，依次分別標記比色條帶濁度值等 于0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9和1.0的位置，即制作出快速鑒定微生物培養液濁度 的比色卡。
【專利摘要】本發明屬于基因工程技術領域，具體涉及一種快速測定微生物培養液濁度比色卡的制作方法。本發明主要解決了現有微生物濁度的測定方法存在操作過程頻繁、易對培養物造成污染的技術問題。使用本發明制作的比色卡進行微生物培養液濁度的測定，可在不打開無菌培養瓶的情況下，快速測得到微生物培養液的濁度，測量精確度可以達到±0.1，解決了現有微生物濁度的測定方法存在操作過程頻繁、易對培養物造成污染的技術問題。
【IPC分類】G01N21/29
【公開號】CN105572057
【申請號】CN201610005808
【發明人】張騰, 蘇少博, 李光飛
【申請人】山西瑞亞力科技有限公司
【公開日】2016年5月11日
【申請日】2016年1月5日