一種檢測肉類食品中抗生素殘留的方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及一種檢測肉類食品中抗生素殘留的方法。
【背景技術】
[0002] 抗生素廣泛應用于治療動物的多種細菌性感染疾病。抗生素類藥物主要是通過注 射、口服、飲水等方式進入動物體內。在休藥期結束前注射部位的肌肉和奶中會殘留超量的 抗生素。獸醫在臨床用藥時，將不同的抗生素聯合起來使用，也容易造成抗生素類藥物在動 物體內殘留，導致肉類食品污染。有些抗生素類還被作為飼料添加劑，用來預防動物細菌性 疾病和促進動物生長而被長期使用。如±霉素添加劑、金霉素添加劑等經口腔進入動物體 內，短時間不能完全排出，極易在體內蓄積，造成肉類食品中的抗生素藥物殘留。
[0003] 由于抗生素的廣泛使用，使得細菌的耐藥性不斷增加，食用含抗生素殘留的肉類 食品后，人體內細菌的耐藥性增加。同時，動物體內的耐藥性菌株的耐藥性也可能轉移到人 體細菌中，從而對人類產生極大的危害。因此，對肉類食品進行抗生素殘留檢測對保證食品 安全具有重要意義。
[0004] 目前，對肉類食品中的抗生素殘留檢測主要有酶聯免疫法和高效液相色譜法。運 些檢測方法都設及到樣品前處理步驟，需要從肉類食品中提取出抗生素。由于，肉類食品中 含有蛋白質、脂肪、糖類等成分，萃取時有機相與水相的界面不清，乳化狀態很嚴重。采用常 規的化學試劑并不能完全萃取出其中的抗生素成分，從而造成檢測結果的準確度不高。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的是針對上述【背景技術】中存在的某些和某個問題，提供一種檢測肉類 食品中抗生素殘留的方法。
[0006] 根據本發明的檢測肉類食品中抗生素殘留的方法，包括W下步驟：
[0007] (1)利用粉碎機將待測的肉類食品制成勻漿液，稱取3-5g的勻漿液于離屯、管中，加 入0.5-lg的破乳劑，超聲振蕩15-30分鐘后，加入30-50mL正己燒，分散均勻后，加入50-IOOmL的憐酸鹽緩沖溶液，超聲提取10-20分鐘，離屯、后，棄去上層正己燒，移取IOmL下層清 液，加 IOmL憐酸鹽緩沖溶液混勻后，待凈化；
[000引（2)將步驟（1)中的待凈化液轉移至固相萃取柱中，依次用IOmL水，IOmL甲醇水溶 液淋洗，棄去流出液，減壓抽干后，用IOmL甲醇洗脫，收集洗脫液。在50°C水浴中用氮氣吹至 近干，加入5mL乙臘水溶液，在滿旋混合器上混合后，過微孔濾膜后濾液待測；
[0009] (3)用液相色譜-串聯質譜法測定和確證，外標法定量。
[0010] 破乳劑是一種表面活性物質，它能使乳化狀的液體結構破壞，W達到乳化液中各 相分離開來的目的。破乳劑可W是化學破乳劑，例如聚氧乙締聚氧丙締聚酸或聚氧乙締聚 氧丙締十八醇酸；也可W是生物破乳劑，例如含芽抱桿菌的生物破乳劑。化學破乳劑成本 低、保質期長。生物破乳劑需冷凍保存，但破乳效果通常要高于化學破乳劑。
[0011] 在本發明的檢測方法中，在樣品前處理步驟中，加入一定量的破乳劑來消除乳化 現象，促使肉類食品中的蛋白質、脂肪、糖類與抗生素有效分離，提高樣品中抗生素的溶出 率。再與合適的萃取劑配合，在合適的抑值條件下，高收率地提取出牛奶中的抗生素。從而 在源頭上保證了最終檢測結果的準確性。
[0012] 根據本發明的檢測肉類食品中抗生素殘留的方法，能夠有效提高檢測結果的準確 性，為食品安全提供有益保障。
【具體實施方式】
[0013] 下面通過具體實施例詳細描述本發明的檢測肉類食品中抗生素殘留的方法。本領 域技術人員應當理解，下面描述的實施例僅是對本發明的示例性說明，而非用于對其作出 任何限制。
[0014] W經初步篩查（例如微生物抑制試紙法)含有抗生素的豬肉為樣品，檢測其8種大 環內醋類抗生素藥物(螺旋霉素、阿奇霉素、替米考星、竹桃霉素、紅霉素、泰樂菌素、克拉霉 素、羅紅霉素)殘留的具體含量，來介紹本發明的實施過程和效果。
[001引1.樣品液A制備
[0016] 1.1提取步驟
[0017] 利用粉碎機將待測的豬肉制成勻漿液，稱取5g的勻漿液于離屯、管中，加入Ig的聚 氧乙締聚氧丙締聚酸，超聲振蕩30分鐘后，加入50mL正己燒，分散均勻后，加入IOOmL的憐酸 鹽緩沖溶液，超聲提取15分鐘，經7000r/min離屯、10分鐘后，棄去上層渾濁液，移取10血下層 清液，加 IOmL憐酸鹽緩沖溶液混勻后待凈化。
[001引 1.2純化步驟
[0019] 將步驟1.1中的待凈化液轉移至化B固相萃取柱中，依次用IOmL水，IOmL甲醇水溶 液淋洗，棄去流出液，減壓抽干后，用IOmL甲醇洗脫，收集洗脫液。在50°C水浴中用氮氣吹至 近干，加入5. OmL乙臘水溶液，在滿旋混合器上混合后，過0.22微米的微孔濾膜后濾液待測。
[0020] 上述步驟中，憐酸鹽緩沖溶液濃度為O.lmol/L，制備過程為:溶解12.?憐酸二氨 鋼于950mL水中，用0.1mol/L氨氧化鋼溶液調節抑值至8.0,最后用水稀釋至1L。甲醇水溶液 中甲醇與水的體積比為3: 7。乙臘水溶液中乙氯與水體積比為2: 8。
[0021] 2.樣品液B制備
[0022] 為了對比，在上述制備樣品液A的步驟1.1中不加入聚氧乙締聚氧丙締聚酸，其它 步驟完全與樣品液A相同。
[0023] 3.標準液制備
[0024] 準確稱取適量各標準物質（螺旋霉素、阿奇霉素、替米考星、竹桃霉素、紅霉素、泰 樂菌素、克拉霉素、羅紅霉素）分別置于50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成濃度為 500mg/L的儲備液。
[0025] 用乙臘水溶液將儲備液逐級稀釋得到阿奇霉素、竹桃霉素、紅霉素、泰樂菌素、克 拉霉素、羅紅霉素濃度為扣g/L、lOyg/L、2扣g/L、50yg/L、lOOyg/L及螺旋霉素、替米考星濃 度為15化旨/1、300蛇/1、750蛇/1、1500蛇/1、3000蛇/1的系列混合標準工作液。
[0026] 4.液相色譜-質譜檢測
[0027] 4.1液相色譜的工作條件
[002引 a)色譜柱:C18柱，IOOmrnX2. ImmQ.d.)，5皿。
[0029] b)流動相:A:乙臘，B:0.2%甲酸溶液，梯度洗脫，梯度條件見表1。
[0030] 。）柱溫：30。(3。
[00川 d)進樣量：10化。
[0032]表1梯度洗脫程序表
[00巧]4.2串聯質譜工作條件
[0036] a)電離方式:電噴霧電離，正離子模式；
[0037] b)噴霧電壓:3.0kV;
[0038] 。)霧化溫度:300。(3;
[0039] d)毛細管溫度:350°C;
[0040] e)銷氣壓力：SOArb(IAii) = Ipsi);
[0041 ] f)輔助氣壓力：20Arb( IArt = O.化/min);
[0042] g)碰撞氣、銷氣和輔助氣:氣氣(99.999 % );
[0043] h)掃描模式:多反應監測(MRM)模式，8種大環內醋類抗生素的質譜參數見表2。
[0044] 表2質譜參數
[0046] *定量離子
[0047] 4.3測定步驟
[004引先對混合標準工作液按濃度由低到高進行檢測，W定量離子峰面積對質量濃度作 圖，做出標準曲線回歸方程。
[0049] 在對樣品液進行檢測，得到的離子峰面積與標準曲線對照得到各抗生素的濃度。 樣品液檢測次數為5次，取平均值為結果。
[0050] 如果樣品液中有組分的響應值超過標準曲線的線性范圍，則稀釋后再進樣測定。
[0051] 測試結果如表3所示。
[0052] 表3樣品液中8種大環內醋類抗生素含量檢測結果
[0054] 上述結果顯示，樣品液B中檢測出的各種抗生素含量均大于樣品液A中的含量，特 別對于在樣品A中未檢出的阿奇霉素和羅紅霉素，卻在樣品液B檢測出微小含量。從而表明， 在樣品液的提取過程中，加入一定量的破乳劑進行破乳處理，抗生素的提取率能夠提高 10% W上，大大提高了肉類食品中抗生素殘留檢測的準確度。
[0055] 上述實施例W經初步篩查含有抗生素的豬肉為樣品進行檢測，僅為了更好地理解 本發明。本領域技術人員應該理解，本發明的檢測方法可W適用于未經初步篩查的各類肉 類食品，例如各種獸類、禽類、魚類等食品的檢測。檢測項目也不限于大環內醋類抗生素，也 可W是檢測其它種類的抗生素。
【主權項】
1. 一種檢測肉類食品中抗生素殘留的方法，包括以下步驟： (1) 利用粉碎機將待測的肉類食品制成勻漿液，稱取3-5g的勻漿液于離心管中，加入 〇. 5-lg的破乳劑，超聲振蕩15-30分鐘后，加入30-50mL正己烷，分散均勻后，加入50-100mL 的磷酸鹽緩沖溶液，超聲提取10-20分鐘，離心后，棄去上層正己烷，移取10mL下層清液，加 10mL磷酸鹽緩沖溶液混勻后，待凈化； (2) 將步驟（1)中的待凈化液轉移至固相萃取柱中，依次用10mL水，10mL甲醇水溶液淋 洗，棄去流出液，減壓抽干后，用10mL甲醇洗脫，收集洗脫液。在50°C水浴中用氮氣吹至近 干，加入5mL乙腈水溶液，在渦旋混合器上混合后，過微孔濾膜后濾液待測； (3) 用液相色譜-串聯質譜法測定和確證，外標法定量。2. 根據權利要求1所述的檢測肉類食品中抗生素殘留的方法，所述破乳劑聚氧乙烯聚 氧丙烯聚醚或聚氧乙烯聚氧丙烯十八醇醚。3. 根據權利要求1所述的檢測肉類食品中抗生素殘留的方法，所述固相萃取柱為HLB萃 取柱。4. 根據權利要求1所述的檢測肉類食品中抗生素殘留的方法，所述微孔濾膜規格為 0·22μηι〇
【專利摘要】一種檢測肉類食品中抗生素殘留的方法，包括以下步驟：(1)利用粉碎機將待測的肉類食品制成勻漿液，將勻漿液置于離心管中，依次加入破乳劑、正己烷、以及磷酸鹽緩沖溶液，超聲提取，離心后，得到待凈化液；(2)將待凈化液轉移至固相萃取柱中，進行凈化，收集洗脫液。在水浴中用氮氣吹至近干，加入乙腈水溶液，在渦旋混合器上混合后，過微孔濾膜后濾液待測；(3)用液相色譜-串聯質譜法測定和確證，外標法定量。根據本發明的檢測肉類食品中抗生素殘留的方法，能夠有效提高檢測結果的準確性，為食品安全提供有益保障。
【IPC分類】G01N30/06, G01N30/88
【公開號】CN105527367
【申請號】CN201510867215
【發明人】趙林萍, 常偉, 魯龍, 苗銀萍, 曾小宇, 李慧英, 王盼
【申請人】鄭州中道生物技術有限公司
【公開日】2016年4月27日
【申請日】2015年12月1日