一種微乳毛細管電動色譜分析香原料的方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于分析檢測技術領域，公開了采用大體積進樣-pH動態連接-掃集微乳 毛細管電泳（LVSS-DypH-MEEKC)測定化妝品中香原料中性分子和陰離子體系共存的方法。
【背景技術】
[0002] 在日化用品的制作中，常會利用香原料成份，來掩蓋其它一些化學成分帶來的不 愉快的氣味，二甲苯麝香(musk xylene)是用作化妝品香精和皂用香精等的定香劑，是天然 昂貴的麝香的替代品，是人工合成的麝香中利用最廣泛的一種。苯乙醛，異丁香酚（4-丙烯 基-2-甲氧基苯酚）廣泛地用于食品中的一種香原料，主要用以配制火腿、熏煙和香辛料等 型香精，亦廣泛用于各種果香型，如丁香、肉豆蔻、香蕉、樹莓、草莓、桂皮、桃、堅果、杏等型 香精，亦為合成香蘭素的原料。這兩種在化妝品中也常用作香原料用來改變化妝品的香氛， 它們均是易致敏物質，在化妝品衛生規范中均規定有限量值。國際日用香精香料協會規定 了三個物質中，二甲苯麝香是禁用物質，苯乙醛和異丁香酚的限量值（女性面霜中〇. 1%， 唇用產品中分別為0. 02%和0. 01% )。目前關于二甲苯麝香檢測的研究方法主要包括HPLC 法、碳纖維修飾電極安培檢測法、薄層色譜法（TLC)、毛細管電泳法（CE)、氣相色譜等。目前 未見文獻報導關于化妝品中苯乙醛和異丁香酚的檢測。建立一種簡單、快速、靈敏度高且成 本低的同時檢測這三種物質的方法就很有必要。二甲苯麝香和苯乙醛在溶液中不易質子化 呈中性，而異丁香酚在溶液中易發生離解呈陰離子化合物的形式存在，這三個中性化合物 和陰離子化合物共存的體系，可以采用掃集的方法，也可以采用動態pH連接的方法。本實 驗對三個物質采用大體積進樣和pH動態連接及掃集相聯用（LVSS-DypH-sweep)的方法。通 過實驗發現這個富集聯用方法對這三個物質具有很好的富集檢測效果。
【發明內容】
[0003] 為了解決上述現有技術的不足之處，本發明的首要目的在于將大體積進樣、pH動 態連接及掃集相聯用的方式對PAHs進行富集分離，通過改變攜帶分析物前進的微乳粒子 的迀移速度，在pH連接區帶上產生堆積，不需要轉變極性就可以實現大體積進樣堆積，實 現對三種香原料的靈敏檢測。
[0004] 本發明的目的通過下列的技術方案實現：在反向電壓下，利用合適的 LVSS-DypH-sweep體系同時分離分析三種香原料分子，達到同時檢測的目的。該本發明的檢 測步驟如下：
[0005] (1)準確稱取三個標準品，用正己烷溶解并定容至50mL，配制成lg/L儲備液， 于-20°C下保存。
[0006] (2)在反向電壓下，采用大體積進樣-pH動態連接-掃集微乳毛細管電泳 (LVSS-DypH-MEEKC)測定3種香原料，得3種香原料的標準品的反向MEEKC電泳譜圖
[0007] (3)采用LVSS-DypH-swe印體系，利用微乳毛細管電動色譜法，在最佳檢測條件 下，對樣品的提取液進行分析，獲得樣品的毛細管電泳圖。
[0008] (4)根據三種香原料的校正曲線方程，計算出步驟（3)中化妝品樣品中的香原料 的含量。
[0009] 本發明采用的最佳檢測條件為：
[0010] 微乳液的組成為：SDS3. 3 % (w/w)、正丁醇 6. 6 % (w/w)、正辛燒 0· 6 % (w/w)、 40mmol/L 磷酸二氫鈉緩沖液（pH 2. 2)、10mmol/L BM頂-BF4, ΙΟπιΜβ -CD〇
[0011] 高導緩沖液（HCB)組成為：40mmol/L NaH2P04(pH 2. 2)、30% 乙腈（v/v)。
[0012] 樣品基質為：：0. 20mmol/L硼砂緩沖溶液（pH 8. 7)。
[0013] 紫外檢測波長為256nm，運行電壓為-20kV，溫度為20°C。
[0014] 步驟（3)所述樣品提取液采用以下步驟獲得，稱取2. 00g待測化妝品，加入10mL 甲醇，超聲助溶30min ;高速離心機離心5min，吸取上清液，在下層殘渣中再加入10mL甲醇， 操作方法同上；反復提取三次，合并上清液，將其放入冰箱內冷凍5min ;冷凍后的提取液取 出后用0. 45 μ m過濾膜過濾，并定容于50mL容量瓶中。
[0015] 在最佳的檢測條件下，三種香原料在15分鐘內達到基線分離，顯示了良好的分離 選擇性和靈敏度。六個物質在該方法的線性范圍分別為5. 0X 10 2~7. 5mg/L，2. 5 X 10 1~ 25mg/L，2. 5 X 10 1~25mg/L。檢出限為 0· 043mg/L，0· 14mg/L，0· 15mg/L，（S/N = 3)，峰面 積的相對標準偏差（RSD)小于5. 5%。
[0016] 本發明相對于現有技術，具有如下的優點及有益效果：（1)本發明為化妝品的質 量控制提供技術支持，檢測快速；(2)環境友好，經濟環保，所用的緩沖液多為水相，無需消 耗大量的有機溶劑，比液相色譜更環保，更有利于檢測者的身體健康；(3)分析成本低，所 需樣品和溶劑都很少，檢測一個樣品消耗的緩沖溶液不到lmL，且不需要特殊的色譜柱，僅 使用普通的空心毛細管柱，價格比一般的色譜柱要低好幾倍。（4)該方法不僅可以用于香原 料的檢測，而且為結構及性質較為相近的化合物的分離富集提供一個有效的參考。
【附圖說明】
[0017] 圖1為LVSS-DypH-swe印原理圖。其中（A)大體積進樣；⑶動態pH連接；（C)掃 集；（D)MEEKC模式分離。
[0018] 圖2標準品的LVSS-DypH-swe印電泳譜圖。其中1、異丁香酚2、苯乙醛3、二甲苯 麝香 具體實施方案
[0019] 實施例：
[0020] 1、材料與方法
[0021] (1)試驗材料：
[0022] 某品牌化妝品中的乳液。
[0023] (2)儀器及色譜條件：
[0024] TH-3100高效毛細管電泳儀。
[0025] 采用未涂層石英毛細管（總長度為65cm，有效長度50cm，柱內徑為50 μ m)為分 離通道，以15s/16Kpa的方式進高導區帶（HCB)，然后60s/16Kpa方式進樣，紫外檢測波長 256nm，運行電壓-20kV，溫度20°C。
[0026] (3)香原料標準溶液的配制：
[0027] 準確稱取三個標準品，用正己烷溶解并定容至50mL，配制成lg/L儲備液，于-20°C 下保存。
[0028] (4)樣品洛液制備：
[0029] 稱取2. 00g待測化妝品，加入10mL甲醇，超聲助溶30min ;高速離心機離心5min， 吸取上清液，在下層殘渣中再加入10mL甲醇，操作方法同上；反復提取三次，合并上清液， 將其放入冰箱內冷凍5min ;冷凍后的提取液取出后用0. 45 μ m過濾膜過濾，并定容于50mL 容量瓶中。
[0030] (5)化妝品中香原料含量的測定：
[0031] 優化的實驗條件下，化妝品提取液在高效毛細管電泳儀上進樣，平行測定3次。
[0032] (6)樣品回收率測定：
[0033] 在相應化妝品中加入一定量相應香原料的標準溶液，充分混勻，與相應樣品同時 同樣處理，所得提取液在高效毛細管電泳儀上進樣，同樣平行測定3次。
[0034] 2、測定結果
[0035] (1)香原料分離結果（如附圖2所示）
[0036] (2)香原料測定結果：
[0037] 3種香原料的線性范圍、回歸方程及相關系數、檢出限見表1所示。
[0038] 樣品測定結果與加標回收率見表2。
[0039] 表1三種香原料的回歸方程、線性范圍和檢出限
[0042] (富集倍數：稀釋倍數X LVSS-DypH-swe印的峰面積/MEEKC的峰面積）
[0043] 表2樣品中三種香原料的測定結果和回收率實驗
【主權項】
1. 一種分離測定護膚類化妝品中三種香原料的方法，其特征是以大體積進樣-pH動態 連接-掃集微乳毛細管電泳（LVSS-DypH-MEEKC)方法，樣品經甲醇提取后，先進一段高導 緩沖液（HCB)，然后利用大體積進樣的方法，將樣品提取液進樣至微乳運行液的毛細管電泳 上，在電泳及測定條件下分離并測定化妝品中二甲苯麝香、苯乙醛和異丁香酚。2. 根據權利要求1所述的方法，其特征是樣品提取液采用以下步驟獲得，在一定量的 樣品中，加入10mL甲醇，超聲助溶30min;高速離心機離心5min，吸取上清液，在下層殘渣中 再加入10mL甲醇，操作方法同上；反復提取三次，合并上清液，將其放入冰箱內冷凍5min; 冷凍后的提取液取出后用0. 45μm過濾膜過濾，并定容于50mL容量瓶中。3. 根據權利要求1所述的方法，其特征是微乳運行液的組成為：微乳液的組成為正丁 醇 6. 6% (w/w)、正辛烷 0· 6% (w/w)、SDS3. 3% (w/w)、20mmol/LNaH2P04緩沖液（pH2. 2)、 10mmol/LBMIM-BF4,ΙΟπιΜβ-CD。 高導緩沖液0〇)組成為：40臟〇1/1似氏?04(?!12.2)、30%乙腈（￥八）。4. 根據權利要求1所述的方法，樣品溶在樣品基質中，樣品基質的組成為：樣品基質 為：0. 20mmol/L硼砂緩沖溶液（pH8. 7)。5. 根據權利要求1所述的方法，其特征是毛細管電泳所采用的毛細管為未涂層石英毛 細管，總長度為65cm，有效長度50cm，柱內徑為50μm。6. 根據權利要求1所述的方法，進樣壓力16Kpa，進樣時間60s，高導區帶（HCB)進入壓 力16Kpa，進入時間15s，反相運行電壓-20kV，運行溫度20°C。7. 根據權利要求1所述的方法，其特征是樣品提取液經毛細管電泳分離后，采用紫外 光檢測器檢測，紫外檢測波長256nm。
【專利摘要】本發明提供了一種以大體積進樣-pH動態連接-掃集微乳毛細管電泳(LVSS-DypH-MEEKC)測定化妝品中三個的香原料的方法。該方法采用LVSS-DypH-MEEKC對化妝品的提取液進行分析檢測，獲得了二甲苯麝香、苯乙醛和異丁香酚三個化合物的電泳譜圖，根據校正曲線方程可以計算出三個物質的濃度。本發明能夠同時分析檢測化妝品中二甲苯麝香、苯乙醛和異丁香酚的濃度。本發明不僅可以用于香原料的檢測，而且為中性化合物和陰離子化合物共存的體系分離富集，提供一個有效的參考。方法簡單、快速和高效；所用的緩沖液主要是水溶液，無需大量使用有機溶劑，污染小，環境友好；所需溶劑和樣品用量小，使用的空心毛細管柱價格便宜，分析成本低。
【IPC分類】G01N30/06, G01N30/02
【公開號】CN105353051
【申請號】CN201510835531
【發明人】陳新, 曹玉華, 劉瑛, 朱海燕
【申請人】江南大學
【公開日】2016年2月24日
【申請日】2015年11月26日