一種油脂過氧化值檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于油脂檢測技術領域，尤其是一種油脂過氧化值檢測方法。
【背景技術】
[0002] 油脂的氧化所產生的過氧化物雖然本身無色無味無毒，對油脂質量的影響不大。 但是，過氧化物很不穩定，易分解為許多二級氧化產物，如醛類、酮類、醇類等，其中的一些 化合物對人體會產生一定的危害。所以測定油脂的過氧化值很有必要。如果過氧化值大于 800meq/kg，則表明油脂嚴重氧化，品質發生了改變，對人體產生毒性。油脂在食品的口感、 風味以及物理性質方面起著重要的作用，油脂的品質影響著含油食品的質量與安全。
[0003] 目前常用的是碘量法，碘量法準確、成本低，但由于操作繁瑣，使用大量有機溶劑， 且作誤差較大，不適合現場實時監測。。分光光度法快速、簡單、容易操作、成本低，但隨著各 種科技的發展，已經不能滿足測定要求。儀器分析（高效液相色譜、氣相色譜、紅外光譜等） 法雖然靈敏度高，但成本一般都比較高，而且操作相對麻煩。
[0004] 專利CN102706872A公開了一種氧化還原法檢測油脂的方法，在氧化還原反應， 產生絡合物以后采用比色法檢測絡合物，檢測準確性欠缺。
【發明內容】
[0005] 本發明將氧化絡合與分光光度法結合在一起，比一般的分光光度法簡單，成本低， 檢測快速準確，且具有較高的選擇性和靈敏度，為檢測油脂的過氧化值提供了一種十分可 靠的方法。
[0006] 過氧化氫異丙苯（CHP)是由枯烯的氧化溶液或乳濁液衍生的一種無色至淡黃色 液體。溶于醇、丙酮、酯類、烴類和氯烴類，微溶于水。有研究采用過氧化氫異丙苯作為內 標物，因此本實驗采用過氧化氫異丙苯作為標品。
[0007] 本發明提出的技術方案是：一種油脂過氧化值檢測方法，包括如下步驟：
[0008] 步驟1 :過量二茂鐵溶液和油中過氧化氫異丙苯發生氧化絡合反應，生成二茂鐵 異丙苯醚；
[0009] 步驟2 :使用分光光度法檢測絡合物的濃度。
[0010] 步驟1中發生氧化絡合反應，生成的二茂鐵異丙苯醚的最大吸收波長是318nm，選 擇318nm作為分光光度法檢測吸收波長。
[0011] 進一步，所述步驟1中二茂鐵溶液使用異丙醇作為溶劑配制，二茂鐵溶液濃度為 29mmol/L。二茂鐵溶液濃度的選擇：精確稱取0.lg過氧化氫異丙苯，置于10ml容量瓶中， 用異丙醇定容到刻度，配制得到母液，再取lml到10ml容量瓶中，用異丙醇定容至刻度，加 0.5ml甲酸（在酸性條件下反應順利進行，調節pH值），即為A液。分別準確移取0.27g、 0.54g二茂鐵移至100mL的容量瓶中，然后用異丙醇定容至刻度。配制得到濃度分別為 14. 5mm〇l/L、29mm〇l/L的二茂鐵溶液，分別是B液、C液。精確吸取lml的A液和lmlB液 /C液的于干燥的比色管中，用異丙醇定容到5mL，充分搖勻，均置于恒溫水浴鍋中，溫度設 為50°C，各做三次平行實驗，完全反應60min后，以異丙醇試劑作為空白調零，測定各管在 318nm處的吸光度值，觀察吸光度值的變化規律。選擇氧化絡合反應中二茂鐵溶液的最佳濃 度值。
[0012] 進一步，所述步驟1中發生氧化絡合反應的溫度是50°C。反應溫度的優化：精確 稱取0.lg過氧化氫異丙苯，置于l〇ml容量瓶中，用異丙醇定容到刻度，配制得到母液，再取 lml到10ml容量瓶中，用異丙醇定容至刻度，加0. 5ml甲酸（在酸性條件下反應順利進行， 調節pH值），為A液。分別準確移取0. 54g二茂鐵移至100mL的容量瓶中，然后用異丙醇 定容至刻度。配制得到濃度分別為29mmol/L的二茂鐵標準溶液，為B液備用。分別精確吸 取lml的A液和lml的B液于干燥的比色管中，用異丙醇定容到5mL，充分搖勻，置于恒溫水 浴鍋，溫度分別設為20 °C、30 °C、40 °C、50 °C、60 °C，各做三次平行實驗，完全反應60min后， 以異丙醇試劑為空白調零，測定各管在318nm處的吸光度值，觀察吸光度值的變化規律。選 擇氧化絡合反應的最佳反應溫度。
[0013] 進一步，所述步驟1中發生氧化絡合反應的時間是60min。氧化絡合反應時間的選 擇：精確稱取〇.lg過氧化氫異丙苯，置于l〇ml容量瓶中，用異丙醇定容到刻度，配制得到母 液，再取lml到10ml容量瓶中，用異丙醇定容至刻度，加0.5ml甲酸（反應在酸性條件下進 行，調節pH值），為A液。分別準確移取0. 54g二茂鐵移至100mL的容量瓶中，然后用異丙 醇定容至刻度。配制得到濃度分別為29mmol/L的二茂鐵標準溶液，為B液備用。分別精確 吸取lml的A液和lml的B液于干燥的比色管中，用異丙醇定容到5mL，充分搖勻，置于恒溫 水浴鍋 50°C，分別完全反應 10min、20min、30min、40min、50min、60min、70min、80min，各做 三個平行實驗，以異丙醇試劑為空白調零，測定各管在318nm處的吸光度值，觀察吸光度值 的變化規律。選擇氧化絡合反應的最佳反應時間。
[0014] 本發明的反應原理是：反應第一步：在微量氫離子存在的條件下，二茂鐵與油脂 中的過氧化物反應生成不穩定的二茂鐵鑰離子[(n5_C5H5)2Fe3+]+，流程圖如圖1 ;反應第二 步：環戊二烯的雙鍵的α位發生去質子化反應，與過氧化氫異丙苯發生反應，生成穩定的 二茂鐵異丙苯醚，流程圖如圖2。
[0015] 本發明的優點和積極效果是：
[0016] ⑴二茂鐵易溶于甲醇、乙醇、乙醚、汽油、苯、柴油等有機溶劑，與酸、堿、紫外線不 發生反應，具有極高的熱穩定性和耐輻射性。
[0017] ⑵本發明生產的氧化絡合物，比較穩定，相對于國標法（硫氰酸鐵法）溶液中的 氧氣會影響測定結果，且應注意鐵離子的污染，二氯化鐵要新鮮配制，且實驗過程要求避光 進行，否則因為空氣中氧氣、光照等影響空白值，從而影響結果的準確性。本發明在反應完 全后，在室溫下放置一段時間，檢測結果基本不變。
[0018] ⑶二茂鐵具有疏水性，低毒性，能順利通過細胞膜，與細胞內各種酶、DNA、RNA等物 質作用，因而有可能作為治療某些疾病的藥物。此外，在生物酶的作用下，二茂鐵及其衍生 物能參與各種新陳代謝作用；它具有一定厚度的夾心結構，能夠阻止其接近某些酶的活性 部位，因而具有較強選擇性；基于這些特性，二茂鐵具有抗腫瘤、殺菌、殺蟲、治貧血、抗炎、 調節植物生長、抗潰瘍、酶抑制劑等生理活性，使其在生物學、醫學、微生物學等領域有著廣 泛的應用前景。
【附圖說明】
[0019] 圖1二茂鐵由油脂中的過氧化物氧化生成不穩定的二茂鐵鑰離子 [(n5-C5H5)2Fe3+]+流程圖；
[0020] 圖2生成穩定的二茂鐵異丙苯醚流程圖
[0021] 圖3絡合物二茂鐵異丙苯醚吸收曲線
[0022] 圖4氧化絡合法的標準曲線
【具體實施方式】[0023] 實施例1
[0024] 標準曲線制作
[0025] (1)取0· 54g二茂鐵定容到100ml容量瓶中定容，此溶液為A液。
[0026] (2)稱取0.lg過氧化氫異丙苯于10ml容量瓶中定容，此溶液作為母液，再取1ml 母液到20ml比色管中，加9ml異丙醇和0. 5ml甲酸（反應在酸性條件下進行，調節pH值）， 混勻后，此溶液為B液。
[0027] (3)取1mlA液和1mlB液定容到5ml后，在50°C加熱lh后冷卻，以異丙醇試劑 為空白調零。
[0028](4)分別取6個比色管，分別精確移入B液0· 0ml，0· 3ml，0· 5ml，0· 8ml，1. 0ml， 1. 5ml于20ml的比色管中，各加入lmlA液后，定容至5ml，于50°C加熱lh后，反應完成后， 立即移入lcm比色皿中，以異丙醇試劑為空白調零，在318nm波長下測定各管的吸光度，制 作標準曲線，如圖3。
[0029] 實施例2
[0030] 樣品的檢測：
[0031] (1)取0. 5g油樣于10ml容量瓶中定容，加0. 5ml甲酸（在酸性條件下反應順利進 行，調節pH值），取lml于20ml比色管中，再加入lmlA液，定容至5ml，每個樣品做三個 平行，在50°C加熱lh后，反應完成后，立即移入lcm比色皿中，以異丙醇試劑為空白調零，在 318nm波長下測定各管的吸光度。
[0032] (2)將測得的吸光值代入公式1，計算即可得油樣的過氧化值（即油樣中所含過氧 化氫異丙苯的毫摩爾數）。
[0033] 油脂過氧化值計算公式：
[0035] 式中字母代表：
[0036] X，油脂的過氧化值（mmol/kg)
[0037] A= 0. 1101B= 0.2553
[0038] Y，代表油樣檢測到的吸光度值；
[0039] Μ,代表所取油樣的質量（g)。
【主權項】
1. 一種油脂過氧化值檢測方法，其特征在于，包括如下步驟： 步驟1:過量二茂鐵溶液和油中過氧化氫異丙苯發生氧化絡合反應，生成二茂鐵異苯 丙醚； 步驟2 :使用分光光度法檢測絡合物的濃度。2. 根據權利要求1所述的一種油脂過氧化值檢測方法，其特征在于，所述步驟1中二茂 鐵溶液使用異丙醇作為溶劑配制，二茂鐵溶液濃度29mmol/L。3. 根據權利要求1所述的一種油脂過氧化值檢測方法，其特征在于，所述步驟1中發生 氧化絡合反應的溫度是50°C。4. 根據權利要求1所述的一種油脂過氧化值檢測方法，其特征在于，所述步驟1中發生 氧化絡合反應的時間是60min。5. 根據權利要求1所述的一種油脂過氧化值檢測方法，其特征在于，所述步驟2使用分 光光度法檢測絡合物濃度在318nm處檢測。
【專利摘要】本發明涉及一種油脂過氧化值檢測方法，包括如下步驟：步驟1：過量二茂鐵溶液和油中過氧化氫異丙苯發生氧化絡合反應，生成絡合物；步驟2：使用分光光度法檢測絡合物的濃度。本發明的優點本發明生產的氧化絡合物，比較穩定，相對于國標法(硫氰酸鐵法)溶液中的氧氣會影響測定結果，且應注意鐵離子的污染，二氯化鐵要新鮮配制，且實驗過程要求避光進行，否則因為空氣中氧氣、光照等影響空白值，從而影響結果的準確性。本發明在反應完全后，在室溫下放置一段時間，檢測結果基本不變。
【IPC分類】G01N21/75, G01N21/31
【公開號】CN105241832
【申請號】CN201510658657
【發明人】李昌模, 王蕊, 王冠華, 王碩
【申請人】天津科技大學
【公開日】2016年1月13日
【申請日】2015年10月12日