一種微萃取耦合技術及其在杞黃膠囊質量控制中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于分離技術領域，具體涉及一種微萃取耦合技術尤其是中空纖維膜微萃 取耦合技術及其在杞黃膠囊質量控制中的應用。
【背景技術】
[0002] 中空纖維膜微萃取技術具有有機溶劑用量少、樣品除雜能力突出、易與多種分析 儀器聯用、操作模式多樣化、成本低等優點，近年來已有應用于環境、生物、食品等復雜樣品 的研究報道。然而由于中藥樣品化學成分的復雜性，單一的中空纖維膜微萃取技術應用于 中藥質量控制領域還不多見。納米粒子具有高的機械強度、大的比表面積、低毒、理化性質 穩定、抗腐蝕等優點，是一種理想的固體吸附劑。目前尚無中空纖維膜微萃取耦合納米粒子 并成功應用于中藥質量控制的報道。
[0003] 杞黃膠囊具有益氣養陰、清熱生津之功效，用于II型糖尿病屬氣陰兩虛兼燥熱傷 津證。黃連是杞黃膠囊中的一味重要藥材，具清熱燥濕、瀉火解毒之功效，為中醫臨床治療 消渴(糖尿病）的常用藥物，主要含原小檗堿型生物堿如小檗堿、巴馬汀、藥根堿、表小檗堿、 黃連堿等生物堿類成分。由于杞黃膠囊由20余味中藥組成，化學成分復雜，其藥效成分分 析測定難度極大，杞黃膠囊現有標準中沒有黃連生物堿的含量測定項。本發明首次將中空 纖維膜微萃取和納米粒子技術進行耦合，并成功應用于杞黃膠囊的樣品前處理，結合HPLC 法測定了杞黃膠囊中黃連生物堿的含量，克服了杞黃膠囊復雜樣品基質的干擾，解決了杞 黃膠囊中沒有黃連生物堿的含量測定項的問題。該耦合技術操作簡便易行、綠色環保等常 規方法不可比擬的等優點，在中藥質量控制領域具有廣闊的應用前景。
【發明內容】
[0004] 本發明針對現有中空纖維膜微萃取技術之不足，將其與納米粒子技術進行耦合， 產生了非常顯著的有益效果。應用于杞黃膠囊的質量控制，提供了一種杞黃膠囊中黃連生 物堿的含量方法，HPLC測定小檗堿、巴馬汀、表小檗堿和黃連堿能夠達到基線分離，方法專 屬性好、簡便準確，進一步完善了杞黃膠囊的質量標準。
[0005] 本發明為實現上述目的，通過以下技術方案實現： 一種微萃取耦合技術及其在杞黃膠囊質量控制中的應用，其特征在于，主要包括以下 步驟： ①納米粒子分散液的制備： 將一定量的納米粒子(可以是二氧化硅、二氧化鈦、氧化銅、四氧三化鐵納米粒子）放到 盛有一定量分散溶劑的小燒杯中，在磁力攪拌器的作用下，使其均勻的分散到分散溶劑中， 得到納米粒子分散液； 納米粒子可以是二氧化娃、二氧化鈦、氧化銅、四氧三化鐵納米粒子以及由上述納米粒 子按不同比例組成的組合物。優選的分散溶劑為二氧化鈦； 分散溶劑可以是有機溶劑、有機溶劑的水溶液和水，優選的分散溶劑為水； ② 中空纖維膜的預處理 取中空纖維膜洗凈吹干，剪成長約1. 5cm的小段，得到中空纖維膜棒； 優選的中空纖維膜的材質為聚醚砜、聚偏氟乙烯，更為優選的中空纖維膜的材質為聚 醚砜；優選的中空纖維膜的截留分子量為40000 ; ③ 含納米粒子/有機溶劑的中空纖維膜棒的制備 將中空纖維膜棒放到盛有納米粒子分散液的小燒杯中，在磁力攪拌器的作用下攪拌3 小時，使納米粒子充分填充到中空纖維的壁孔內，然后從燒杯中取出中空纖維，用純凈水清 洗3次，以除去其表面多余的納米粒子，取出其內腔中的液體，然后放到盛有有機溶劑的小 燒杯中，在磁力攪拌器的作用下使其內腔中充滿有機溶劑，然后取出，用純凈水清洗2次以 除去其表面多余的有機溶劑，得到納米粒子/有機溶劑的中空纖維棒； 優選的有機溶劑為有機溶劑可以是氯仿、乙酸乙酯、正丁醇； ④ 杞黃膠囊中黃連生物堿的含量測定： 對照品溶液的制備：取鹽酸小檗堿對照品適量，精密稱定，加甲醇超聲使其完全溶解， 制成每lml含90 y g的溶液，即得鹽酸小檗堿對照品溶液。
[0006] 供試品溶液的制備：取杞黃膠囊粉0. 2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲 醇-鹽酸（10:0. 1)混合溶液50ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率40kHz )30分 鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液2. 5ml，水浴揮 干，以水稀釋至5ml，加1M鹽酸或1M氫氧化鈉調節pH值，并加入適量NaCl。將制備好的納 米粒子/有機溶劑正丁醇的中空纖維棒放入上述溶液中，以一定速度進行攪拌，萃取一段 時間后，取出中空纖維棒，用清洗劑清洗兩次，棄除清洗液，加入一定量洗脫劑在超聲波清 洗器的作用下超聲洗脫一定時間，棄去中空纖維棒，洗脫液經過0.22WI1微孔濾膜濾過后， 進行HPLC分析。
[0007] 色譜條件：以乙腈-0? 05mol/L磷酸二氫鉀溶液（50:50)(每100ml中加十二烷基 硫酸鈉0. 4g，再以磷酸調pH值為4. 0)為流動相，檢測波長為346nm，流速為lml/min。
[0008] 優選的，所采用中空纖維棒為4~10根。
[0009] 優選的，所采用洗脫劑可以是40~100%的甲醇、乙醇溶液。
[0010] 本發明的優點在于：本發明針對現有中空纖維膜微萃取技術之不足，將其與納米 粒子技術進行耦合，產生了非常顯著的有益效果。本發明首次將中空纖維膜微萃取耦合技 術應用于復雜中藥樣品杞黃膠囊的質量控制方法研究，結合HPLC法測定了杞黃膠囊中黃 連生物堿的含量，克服了杞黃膠囊復雜樣品基質的干擾，解決了杞黃膠囊中沒有黃連生物 堿含量測定項的問題，且具有操作簡便易行、綠色環保等常規方法不可比擬的優點。
【具體實施方式】
[0011] 實施例1 杞黃膠囊中黃連生物堿的HPLC檢測 1.儀器、試劑和藥品： SHIMADZU高效液相色譜儀（LC-10AT栗，LC-10紫外檢測器）（日本)，N2000色譜工作站 (浙江大學智能信息工程研究所)。鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸表小檗堿、硫酸黃連堿均 購自中國藥品生物制品鑒定所； 2. 色譜條件 1(1'〇111&8；[1(]18(25011111114.6111111，5 11111);以乙臆-0.051]1〇1/1^憐酸二氛鐘溶液（50:50)(每100ml中加十二烷基硫酸鈉0. 4g，再以磷酸調pH值為4. 0)為流動相，檢測波長為346nm，流 速為1. OmLmin \進樣量20 y 1 ; 3. 樣品測定 精密量取〇. 45mgmL1的鹽酸小檗堿溶液1.OmL于10mL容量瓶中，甲醇定容，即得鹽 酸小檗堿對照品溶液。分別精密對照品溶液和供試品溶液20 y 1。注入液相色譜儀，測定，以 鹽酸小檗堿對照品的峰面積為對照，分別計算小檗堿、表小檗堿、黃連堿和巴馬汀的含量， 用待測成分色譜峰與鹽酸小檗堿色譜峰的相對保留時間確定。表小檗堿、黃連堿、巴馬汀、 小檗堿的峰位，其相對保留時間應在規定值的±5%范圍之內，即得。小試三批杞黃膠囊中 黃連生物堿的HPLC測定結果見表1 ; 表1杞黃膠囊中黃連生物堿含量測定結果（mg/粒）。
[0012] 實施例2 含納米粒子/有機溶劑的中空纖維膜制備 將一定量的二氧化鈦納米粒子放到盛有一定量水的小燒杯中，在磁力攪拌器的作用 下，使其均勻的分散到水中，得到納米粒子分散液； 將洗凈吹干的聚醚砜、聚偏氟乙烯中空纖維剪成長約1. 5cm的小段，放到盛有納米粒 子分散液的小燒杯中，在磁力攪拌器的作用下攪拌3小時，使納米粒子充分填充到中空纖 維的壁孔內，然后從燒杯中取出中空纖維，用純凈水清洗3次，以除去其表面多余的納米粒 子，然后用微量進樣器將其內腔中的液體取出，然后放到盛有有機溶劑的小燒杯中，在磁力 攪拌器的作用下使其內腔中充滿有機溶劑，然后取出，用純凈水清洗2次以除去其表面多 余的有機溶劑，得到納米粒子/有機溶劑的中空纖維棒； 同法制備含二氧化硅、氧化銅、四氧三化鐵納米粒子以及其組合物的納米粒子/有機 溶劑的中空纖維棒。
[0013] 實施例3 取杞黃膠囊粉（N〇140315) 0. 2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-鹽酸 (10:0. 1)混合溶液50ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率40kHz) 30分鐘，放冷， 再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液2. 5ml，水浴揮干，以水稀 釋至5ml，以1M鹽酸調節pH值至5.0,并加入適量NaCl 0.25 g。將制備好的四氧三化鐵 納米粒子/正丁醇的中空纖維棒上述溶液中，以一定速度進行磁力攪拌，萃取10分鐘后，取 出中空纖維棒，用水清洗兩次，然后放入盛有l〇ml甲醇的離心試管中，在超聲波清洗器的 作用下解吸10分鐘左右，棄去中空纖維棒，解吸液經過〇. 22Wii微孔濾膜濾過后，進行HPLC 分析，含量測定結果見表1。
[0014] 實施例4 取杞黃膠囊粉（N〇140316) 0. 2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-鹽酸 (10:0. 1)混合溶液50ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率40kHz) 30分鐘，放冷， 再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液2. 5ml，水浴揮干，以水稀 釋至5ml，以1M氫氧化鈉調節pH值至8.0。將制備好的二氧化硅納米粒子/乙酸乙酯的中 空纖維棒上述溶液中，以一定速度進行磁力攪拌，萃取100分鐘后，取出中空纖維棒，用30% 的乙醇溶液清洗兩次，然后放入盛有1. 〇ml 40%甲醇的離心試管中，在超聲波清洗器的作 用下解吸5分鐘左右，棄去中空纖維棒，解吸液經過0. 22Mffl微孔濾膜濾過后，進行HPLC分 析，含量測定結果見表1。
[0015] 實施例5 取杞黃膠囊粉（N〇140317) 0. 2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-鹽酸 (10:0. 1)混合溶液50ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率40kHz) 30分鐘，放冷， 再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，